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乳腺炎对牛奶外泌体功能的影响:基于乳腺上皮细胞的观察
被引量：
4
1
作者
应易恬
杨璟
+2 位作者
严冰璇
邵冯金
谭勋
《浙江大学学报（农业与生命科学版）》
CAS
CSCD
北大核心
2020年第3期383-390,共8页
通过观察乳腺炎牛奶外泌体对乳腺上皮细胞(mammary epithelial cells,MECs)活力和天然免疫功能的影响,探究外泌体在乳腺炎发病机制中的作用。MECs经热灭活的乳腺炎病原(大肠埃希菌)刺激24 h后进行转录组测序和基因本体(gene ontology,GO...
通过观察乳腺炎牛奶外泌体对乳腺上皮细胞(mammary epithelial cells,MECs)活力和天然免疫功能的影响,探究外泌体在乳腺炎发病机制中的作用。MECs经热灭活的乳腺炎病原(大肠埃希菌)刺激24 h后进行转录组测序和基因本体(gene ontology,GO)富集分析,发现有21条差异表达基因富集在细胞外囊泡外泌体(GO:0070062)这一细胞组分上,提示感染可引起宿主细胞外泌体生物学功能改变。在此基础上,采用正常牛奶来源的外泌体(N-exo)和乳腺炎牛奶来源的外泌体(M-exo)作用MECs,以培养于不含外泌体的培养基中的细胞为对照,采用3-(4,5-二甲基噻唑-2)-2,5-二苯基四氮唑溴盐(methyl-thiazol-diphenyltetrazolium,MTT)法检测细胞活力,并采用实时荧光定量聚合酶链式反应检测MECs中白细胞介素8(interleukin-8,IL-8)、白细胞介素1β(interleukin-1β,IL-1β)和肿瘤坏死因子-α(tumor necrosis factor-α,TNF-α)的表达。结果发现:正常牛奶外泌体对MECs活力无显著影响,而乳腺炎牛奶外泌体可显著抑制MECs活力;2种来源的外泌体对IL-8和TNF-α的表达均无显著影响,但正常牛奶外泌体可诱导表达IL-1β,而乳腺炎牛奶外泌体则缺乏诱导IL-1β表达的能力。上述结果提示,在乳腺感染过程中,进入牛奶中的外泌体可引起MECs活力下降,并可能参与介导有利于病原逃避免疫的微环境的形成。因而,在乳腺炎发病机制中,外泌体可能起着促进乳腺感染扩散的作用。
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关键词
牛奶
外泌体
乳腺上皮细胞
促炎细胞因子
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职称材料
禽CD133胞外结构域原核表达及多克隆抗体的制备
2
作者
章乔艳
邵冯金
+1 位作者
俞向前
谭勋
《浙江大学学报（农业与生命科学版）》
CAS
CSCD
北大核心
2018年第6期743-747,共5页
为构建禽CD133胞外区原核表达载体,制备抗CD133多克隆抗体,在生物信息学分析的基础上,选取禽CD133蛋白N端胞外区一段由89个氨基酸残基构成的肽段作为候选抗原,通过聚合酶链式反应(polymerase chain reaction, PCR)扩增其编码基因,亚克隆...
为构建禽CD133胞外区原核表达载体,制备抗CD133多克隆抗体,在生物信息学分析的基础上,选取禽CD133蛋白N端胞外区一段由89个氨基酸残基构成的肽段作为候选抗原,通过聚合酶链式反应(polymerase chain reaction, PCR)扩增其编码基因,亚克隆至pET-28a(+)表达载体,转化大肠埃希菌BL21(DE3)感受态细胞,用异丙基β-D-硫代半乳糖苷(isopropyl-β-D-thiogalactopyranoside, IPTG)诱导表达;目的蛋白经镍柱纯化后免疫BALB/c小鼠,制备抗血清。结果表明,构建的原核表达载体可高效表达CD133重组蛋白。蛋白质印迹法(Westernblotting)证实鼠抗禽CD133血清可特异性识别CD133重组蛋白。免疫组化染色结果显示,该抗血清可用于检测组织中的CD133阳性细胞。上述结果表明,利用禽CD133蛋白N端胞外结构域重组蛋白为抗原成功制备出了抗禽CD133多克隆抗体。
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关键词
CD133蛋白
多克隆抗体
家禽
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职称材料
题名
乳腺炎对牛奶外泌体功能的影响:基于乳腺上皮细胞的观察
被引量：
4
1
作者
应易恬
杨璟
严冰璇
邵冯金
谭勋
机构
浙江大学动物科学学院
出处
《浙江大学学报（农业与生命科学版）》
CAS
CSCD
北大核心
2020年第3期383-390,共8页
基金
国家重点研发计划(2017YFD0502200)
浙江省科技厅项目(2013C32036)。
文摘
通过观察乳腺炎牛奶外泌体对乳腺上皮细胞(mammary epithelial cells,MECs)活力和天然免疫功能的影响,探究外泌体在乳腺炎发病机制中的作用。MECs经热灭活的乳腺炎病原(大肠埃希菌)刺激24 h后进行转录组测序和基因本体(gene ontology,GO)富集分析,发现有21条差异表达基因富集在细胞外囊泡外泌体(GO:0070062)这一细胞组分上,提示感染可引起宿主细胞外泌体生物学功能改变。在此基础上,采用正常牛奶来源的外泌体(N-exo)和乳腺炎牛奶来源的外泌体(M-exo)作用MECs,以培养于不含外泌体的培养基中的细胞为对照,采用3-(4,5-二甲基噻唑-2)-2,5-二苯基四氮唑溴盐(methyl-thiazol-diphenyltetrazolium,MTT)法检测细胞活力,并采用实时荧光定量聚合酶链式反应检测MECs中白细胞介素8(interleukin-8,IL-8)、白细胞介素1β(interleukin-1β,IL-1β)和肿瘤坏死因子-α(tumor necrosis factor-α,TNF-α)的表达。结果发现:正常牛奶外泌体对MECs活力无显著影响,而乳腺炎牛奶外泌体可显著抑制MECs活力;2种来源的外泌体对IL-8和TNF-α的表达均无显著影响,但正常牛奶外泌体可诱导表达IL-1β,而乳腺炎牛奶外泌体则缺乏诱导IL-1β表达的能力。上述结果提示,在乳腺感染过程中,进入牛奶中的外泌体可引起MECs活力下降,并可能参与介导有利于病原逃避免疫的微环境的形成。因而,在乳腺炎发病机制中,外泌体可能起着促进乳腺感染扩散的作用。
关键词
牛奶
外泌体
乳腺上皮细胞
促炎细胞因子
Keywords
milk
exosome
mammary epithelial cell
pro-inflammatory cytokine
分类号
S852.3 [农业科学—基础兽医学]
S852.4 [农业科学—基础兽医学]
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职称材料
题名
禽CD133胞外结构域原核表达及多克隆抗体的制备
2
作者
章乔艳
邵冯金
俞向前
谭勋
机构
浙江大学动物科学学院
浦东新区动物疫病预防控制中心
出处
《浙江大学学报（农业与生命科学版）》
CAS
CSCD
北大核心
2018年第6期743-747,共5页
基金
国家自然科学基金(31872444)
浙江省自然科学基金杰出青年科学基金(LR12C18001)
文摘
为构建禽CD133胞外区原核表达载体,制备抗CD133多克隆抗体,在生物信息学分析的基础上,选取禽CD133蛋白N端胞外区一段由89个氨基酸残基构成的肽段作为候选抗原,通过聚合酶链式反应(polymerase chain reaction, PCR)扩增其编码基因,亚克隆至pET-28a(+)表达载体,转化大肠埃希菌BL21(DE3)感受态细胞,用异丙基β-D-硫代半乳糖苷(isopropyl-β-D-thiogalactopyranoside, IPTG)诱导表达;目的蛋白经镍柱纯化后免疫BALB/c小鼠,制备抗血清。结果表明,构建的原核表达载体可高效表达CD133重组蛋白。蛋白质印迹法(Westernblotting)证实鼠抗禽CD133血清可特异性识别CD133重组蛋白。免疫组化染色结果显示,该抗血清可用于检测组织中的CD133阳性细胞。上述结果表明,利用禽CD133蛋白N端胞外结构域重组蛋白为抗原成功制备出了抗禽CD133多克隆抗体。
关键词
CD133蛋白
多克隆抗体
家禽
Keywords
CD133 protein
polyclonal antibody
avian
分类号
Q786 [生物学—分子生物学]
S858.31 [农业科学—临床兽医学]
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职称材料
题名
作者
出处
发文年
被引量
操作
1
乳腺炎对牛奶外泌体功能的影响:基于乳腺上皮细胞的观察
应易恬
杨璟
严冰璇
邵冯金
谭勋
《浙江大学学报（农业与生命科学版）》
CAS
CSCD
北大核心
2020
4
在线阅读
下载PDF
职称材料
2
禽CD133胞外结构域原核表达及多克隆抗体的制备
章乔艳
邵冯金
俞向前
谭勋
《浙江大学学报（农业与生命科学版）》
CAS
CSCD
北大核心
2018
0
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已选择
0
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