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TB16.3重组蛋白在结核感染中的诊断价值研究
被引量：
3
1
作者
朱中元
刘元
+6 位作者
王海波
肖劲逐
邱一帆
颜磊
陈德
刘爱国
杨欣
《中国人兽共患病学报》
CAS
CSCD
北大核心
2013年第8期791-796,共6页
目的通过构建结核分枝杆菌蛋白TB16.3的原核表达载体并表达纯化,对其检测抗体的性能进行评价。方法用PCR法从结核菌H37Rv基因组DNA扩增TB16.3基因,连接到表达载体PET-30a上,在大肠杆菌中表达;组氨酸标签镍柱层析纯化重组蛋白。结果建立E...
目的通过构建结核分枝杆菌蛋白TB16.3的原核表达载体并表达纯化,对其检测抗体的性能进行评价。方法用PCR法从结核菌H37Rv基因组DNA扩增TB16.3基因,连接到表达载体PET-30a上,在大肠杆菌中表达;组氨酸标签镍柱层析纯化重组蛋白。结果建立ELISA方法检测116份TB患者和96份健康对照者血清中的抗结核菌TB16.3抗体。构建了表达TB16.3的大肠杆菌工程菌,发现目的蛋白主要以可溶形式存在。诱导剂IPTG浓度为1mmol/L,37℃培养5h可获得最大量表达。而在28℃时重组蛋白为可溶形式表达。用重组TB16.3蛋白,ELISA方法检测118份TB患者和96份健康者血清,敏感性、特异性和调整一致率分别为72.9%、86.5%和79.6%。抗TB15.3抗体的敏感性、特异性和调整一致率分别为46.6%、99.0%和76.0%。抗CFP-10的敏感性、特异性和调整一致率分别为75.4%、55.2%和65.7%。结核病患者抗Rv2626C抗体阳性率(44.1%)显著低于其在正常对照的阳性率(75.0%,χ2=20.8,P<0.01)。TB15.3和TB16.3等量包被检测,敏感性、特异性和一致率分别达69.4%、96.9%和83.7%,检测非TB肺部疾病患者,其抗体阳性率仅为9.6%,特异性为90.4%。TB15.3和TB16.3混合后同时包被检测,结合TB15.3单独检测的结果,则敏感性、特异性和一致率分别达82.2%、95.9%和88.9%,一致率为最高。结论目的基因克隆入宿主菌中并表达成功,获得制备上述4种蛋白的最适条件。获得的重组TB16.3、CFP-10和TB15.3蛋白可能成为结核病血清学诊断的抗原或者抗原组合。Rv2626C抗体可能被用于结核患者恢复期的评估。
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关键词
结核分枝杆菌
TB16
3蛋白
表达
血清学诊断
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职称材料
结核分枝杆菌CFP-10与Rv2626c蛋白的表达及血清学诊断研究
被引量：
3
2
作者
朱中元
张丹
+6 位作者
王海波
肖劲逐
邱一帆
颜磊
陈德
刘爱国
杨欣
《中国人兽共患病学报》
CAS
CSCD
北大核心
2012年第12期1212-1215,共4页
目的通过构建结核分枝杆菌(结核菌)CFP-10和Rv2626c蛋白表达载体,并在大肠杆菌表达,对其免疫反应性进行鉴定评价。方法用PCR法从结核菌H37Rv基因组DNA分别扩增出CFP-10、Rv2626c基因,连接到表达载体PET30a上,在大肠杆菌中表达;组氨酸标...
目的通过构建结核分枝杆菌(结核菌)CFP-10和Rv2626c蛋白表达载体,并在大肠杆菌表达,对其免疫反应性进行鉴定评价。方法用PCR法从结核菌H37Rv基因组DNA分别扩增出CFP-10、Rv2626c基因,连接到表达载体PET30a上,在大肠杆菌中表达;组氨酸标签(His-Tag)镍柱层析纯化重组蛋白;用ELISA方法进行检测。结果构建了含CFP-10、Rv2626c重组质粒的大肠杆菌工程菌,发现目的蛋白主要以可溶形式存在;用重组CFP-10、Rv2626c蛋白组成联合抗原,ELISA方法检测214份血清,阳性率达77.1%。结论目的基因克隆入宿主菌中并成功表达,重组的CFP-10、Rv2626c蛋白组成联合抗原可能成为结核病血清学诊断的组合抗原之一。
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关键词
结核分枝杆菌
CFP-10蛋白
Rv2626c蛋白
表达
ELISA
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职称材料
题名
TB16.3重组蛋白在结核感染中的诊断价值研究
被引量：
3
1
作者
朱中元
刘元
王海波
肖劲逐
邱一帆
颜磊
陈德
刘爱国
杨欣
机构
海南省农垦总医院
海南大学环境与植物保护学院
南京大渊生物技术有限责任公司
出处
《中国人兽共患病学报》
CAS
CSCD
北大核心
2013年第8期791-796,共6页
基金
海南省2008年度重点科技项目(No.080209)资助~~
文摘
目的通过构建结核分枝杆菌蛋白TB16.3的原核表达载体并表达纯化,对其检测抗体的性能进行评价。方法用PCR法从结核菌H37Rv基因组DNA扩增TB16.3基因,连接到表达载体PET-30a上,在大肠杆菌中表达;组氨酸标签镍柱层析纯化重组蛋白。结果建立ELISA方法检测116份TB患者和96份健康对照者血清中的抗结核菌TB16.3抗体。构建了表达TB16.3的大肠杆菌工程菌,发现目的蛋白主要以可溶形式存在。诱导剂IPTG浓度为1mmol/L,37℃培养5h可获得最大量表达。而在28℃时重组蛋白为可溶形式表达。用重组TB16.3蛋白,ELISA方法检测118份TB患者和96份健康者血清,敏感性、特异性和调整一致率分别为72.9%、86.5%和79.6%。抗TB15.3抗体的敏感性、特异性和调整一致率分别为46.6%、99.0%和76.0%。抗CFP-10的敏感性、特异性和调整一致率分别为75.4%、55.2%和65.7%。结核病患者抗Rv2626C抗体阳性率(44.1%)显著低于其在正常对照的阳性率(75.0%,χ2=20.8,P<0.01)。TB15.3和TB16.3等量包被检测,敏感性、特异性和一致率分别达69.4%、96.9%和83.7%,检测非TB肺部疾病患者,其抗体阳性率仅为9.6%,特异性为90.4%。TB15.3和TB16.3混合后同时包被检测,结合TB15.3单独检测的结果,则敏感性、特异性和一致率分别达82.2%、95.9%和88.9%,一致率为最高。结论目的基因克隆入宿主菌中并表达成功,获得制备上述4种蛋白的最适条件。获得的重组TB16.3、CFP-10和TB15.3蛋白可能成为结核病血清学诊断的抗原或者抗原组合。Rv2626C抗体可能被用于结核患者恢复期的评估。
关键词
结核分枝杆菌
TB16
3蛋白
表达
血清学诊断
Keywords
Mycobacterium tuberculosis
TB16.3
expression
serodiagnosis
分类号
R378 [医药卫生—病原生物学]
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职称材料
题名
结核分枝杆菌CFP-10与Rv2626c蛋白的表达及血清学诊断研究
被引量：
3
2
作者
朱中元
张丹
王海波
肖劲逐
邱一帆
颜磊
陈德
刘爱国
杨欣
机构
海南省农垦总医院
海南大学环境与植物保护学院
南京大渊生物技术有限责任公司
出处
《中国人兽共患病学报》
CAS
CSCD
北大核心
2012年第12期1212-1215,共4页
基金
海南省2008年度重点科技项目(080209)~~
文摘
目的通过构建结核分枝杆菌(结核菌)CFP-10和Rv2626c蛋白表达载体,并在大肠杆菌表达,对其免疫反应性进行鉴定评价。方法用PCR法从结核菌H37Rv基因组DNA分别扩增出CFP-10、Rv2626c基因,连接到表达载体PET30a上,在大肠杆菌中表达;组氨酸标签(His-Tag)镍柱层析纯化重组蛋白;用ELISA方法进行检测。结果构建了含CFP-10、Rv2626c重组质粒的大肠杆菌工程菌,发现目的蛋白主要以可溶形式存在;用重组CFP-10、Rv2626c蛋白组成联合抗原,ELISA方法检测214份血清,阳性率达77.1%。结论目的基因克隆入宿主菌中并成功表达,重组的CFP-10、Rv2626c蛋白组成联合抗原可能成为结核病血清学诊断的组合抗原之一。
关键词
结核分枝杆菌
CFP-10蛋白
Rv2626c蛋白
表达
ELISA
Keywords
Mycobacterium tuberculosis
CFP-10 protein
Rv2626c protein
expression
ELISA
分类号
R378.911 [医药卫生—病原生物学]
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职称材料
题名
作者
出处
发文年
被引量
操作
1
TB16.3重组蛋白在结核感染中的诊断价值研究
朱中元
刘元
王海波
肖劲逐
邱一帆
颜磊
陈德
刘爱国
杨欣
《中国人兽共患病学报》
CAS
CSCD
北大核心
2013
3
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职称材料
2
结核分枝杆菌CFP-10与Rv2626c蛋白的表达及血清学诊断研究
朱中元
张丹
王海波
肖劲逐
邱一帆
颜磊
陈德
刘爱国
杨欣
《中国人兽共患病学报》
CAS
CSCD
北大核心
2012
3
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