为探究山羊肌内前体脂肪细胞分化过程中中胚层特异转录本(mesoderm specific transcript,MEST)基因的转录及其启动子区DNA甲基化水平的调节机制。本试验通过分离并培养山羊肌内前体脂肪细胞作为试验材料,采用实时荧光定量PCR(RT-qPCR)...为探究山羊肌内前体脂肪细胞分化过程中中胚层特异转录本(mesoderm specific transcript,MEST)基因的转录及其启动子区DNA甲基化水平的调节机制。本试验通过分离并培养山羊肌内前体脂肪细胞作为试验材料,采用实时荧光定量PCR(RT-qPCR)技术检测MEST基因在细胞分化过程中的表达量变化;运用生物信息学工具预测MEST基因启动子区的CpG岛,针对CpG岛应用亚硫酸氢盐测序PCR(BSP)方法分析其甲基化状态。结果显示,MEST基因在细胞分化前的mRNA表达水平显著高于分化后(P<0.01);在MEST基因的启动子区识别到两个CpG岛。对比分化第0天和第4天,发现MEST基因启动子区的目标片段甲基化率从79.2%显著上升至88%(P<0.05)。进一步分析显示,MEST基因mRNA表达水平与启动子区甲基化水平之间存在显著的负相关性(r=-0.997,P<0.0001)。在山羊肌内前体脂肪细胞分化前后,MEST基因的表达量及其启动子区的甲基化水平均发生显著变化,且MEST基因的表达受到启动子区甲基化的负向调控。展开更多
文摘为探究山羊肌内前体脂肪细胞分化过程中中胚层特异转录本(mesoderm specific transcript,MEST)基因的转录及其启动子区DNA甲基化水平的调节机制。本试验通过分离并培养山羊肌内前体脂肪细胞作为试验材料,采用实时荧光定量PCR(RT-qPCR)技术检测MEST基因在细胞分化过程中的表达量变化;运用生物信息学工具预测MEST基因启动子区的CpG岛,针对CpG岛应用亚硫酸氢盐测序PCR(BSP)方法分析其甲基化状态。结果显示,MEST基因在细胞分化前的mRNA表达水平显著高于分化后(P<0.01);在MEST基因的启动子区识别到两个CpG岛。对比分化第0天和第4天,发现MEST基因启动子区的目标片段甲基化率从79.2%显著上升至88%(P<0.05)。进一步分析显示,MEST基因mRNA表达水平与启动子区甲基化水平之间存在显著的负相关性(r=-0.997,P<0.0001)。在山羊肌内前体脂肪细胞分化前后,MEST基因的表达量及其启动子区的甲基化水平均发生显著变化,且MEST基因的表达受到启动子区甲基化的负向调控。
