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牛肺炎链球菌重组PsaA蛋白对牛胚气管上皮细胞黏附抑制作用的研究被引量：5: 1; 作者孙雅婕郭婷 +5 位作者周雅坪赵红梅赵逢淼高源李梦思郝永清《中国预防兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2024年第2期195-200,共6页; 为研究牛肺炎链球菌的黏附蛋白—肺炎链球菌表面黏附素A (PsaA)对牛肺炎链球菌黏附牛胚气管上皮细胞的影响,本研究利用PCR扩增牛肺炎链球菌psaA基因,构建重组质粒pET32a-PsaA,经双酶切和测序鉴定正确后,将阳性重组质粒转化BL21(DE3)感... 展开更多; 关键词肺炎链球菌 psaA基因原核表达黏附; 在线阅读下载PDF 职称材料

牛病毒性腹泻病毒对新西兰白兔致病性分析及E2蛋白免疫效果的评价被引量：3: 2; 作者赵逢淼郭婷 +7 位作者周雅坪赵红梅王宇琛田广原孙雅婕卞宇晨于佳梁郝永清《中国畜牧兽医》 CAS 北大核心 2022年第9期3549-3558,共10页; 【目的】研究牛病毒性腹泻病毒(BVDV)感染对新西兰白兔的致病性以及BVDV E2重组蛋白的免疫效果。【方法】将实验室培养保存的BVDV病毒纯化并按照Reed-Muench法测定其病毒滴度。在致病性试验中,将10只新西兰白兔随机分为感染组和对照组,... 展开更多; 关键词牛病毒性腹泻病毒新西兰白兔免疫组化亚单位疫苗; 在线阅读下载PDF 职称材料

绵羊肺炎支原体P60_(58aa-928aa)蛋白的原核表达及间接ELISA方法的建立被引量：6: 3; 作者田广原王宇琛 +7 位作者周雅坪郭婷赵红梅赵逢淼孙雅婕卞宇晨于佳梁周雨霞《中国畜牧兽医》 CAS 北大核心 2022年第5期1960-1969,共10页; 【目的】建立基于绵羊肺炎支原体表面脂蛋白P60的间接ELISA方法。【方法】利用生物信息学软件对P60蛋白进行抗原性分析,筛选出抗原性最佳的区域,扩增目的基因后构建重组表达载体并进行基因测序,将测序正确的质粒转化大肠杆菌BL21(DE3)... 展开更多; 关键词绵羊肺炎支原体 P60_(58aa-928aa)蛋白原核表达间接ELISA; 在线阅读下载PDF 职称材料

BPIV3 NP蛋白的原核表达及其对BPIV3灭活疫苗免疫增强作用的研究被引量：1: 4; 作者王宇琛田广原 +7 位作者周雅坪郭婷赵红梅孙雅婕赵逢淼卞宇晨于佳梁郝永清《中国畜牧兽医》 CAS 北大核心 2022年第8期3122-3130,共9页; 【目的】验证牛副流感病毒3型(Bovine parainfluenza virus type 3,BPIV3)NP蛋白对BPIV3灭活疫苗的免疫效果是否有增强作用。【方法】利用生物信息学软件对NP基因编码的蛋白进行抗原性分析,筛选出抗原性区域,采用PCR方法扩增BPIV3截短... 展开更多; 关键词牛副流感病毒3型(BPIV3) NP蛋白原核表达灭活疫苗; 在线阅读下载PDF 职称材料

题名牛肺炎链球菌重组PsaA蛋白对牛胚气管上皮细胞黏附抑制作用的研究被引量：5: 1; 作者孙雅婕郭婷周雅坪赵红梅赵逢淼高源李梦思郝永清; 机构内蒙古农业大学兽医微生物学与免疫学实验室; 出处《中国预防兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2024年第2期195-200,共6页; 基金内蒙古自治区科技重大专项项目(2021SZD0016) 牛、羊重要疫病传统和新型疫苗及检测试剂盒研制(BR22-11-04)。; 文摘为研究牛肺炎链球菌的黏附蛋白—肺炎链球菌表面黏附素A (PsaA)对牛肺炎链球菌黏附牛胚气管上皮细胞的影响,本研究利用PCR扩增牛肺炎链球菌psaA基因,构建重组质粒pET32a-PsaA,经双酶切和测序鉴定正确后,将阳性重组质粒转化BL21(DE3)感受态细胞后进行IPTG诱导表达,采用SDS-PAGE和western blot鉴定重组PsaA蛋白(rPsaA)的表达情况及反应原性,结果显示,rPsaA在上清和沉淀中均获得了表达,且具有较好的反应原性。将牛胚气管上皮细胞与1.3×10^(8)cfu/mL的牛肺炎链球菌稀释液于37℃共孵育后,利用间接免疫荧光试验(IFA)检测牛肺炎链球菌对牛胚气管上皮细胞的黏附性,结果显示,可观察到黏附在牛胚气管上皮细胞的牛肺炎链球菌的绿色荧光,即牛肺炎链球菌可以黏附牛胚气管上皮细胞。利用牛肺炎链球菌稀释液孵育经不同浓度rPsaA预处理的牛胚气管上皮细胞后,对黏附的细菌计数,结果显示,rPsaA可以极显著减少牛肺炎链球菌对牛胚气管上皮细胞的黏附菌数(P<0.01)。利用本研究制备的rPsaA多克隆抗体和肺炎链球菌阳性血清分别与牛肺炎链球菌作用后,与牛胚气管上皮细胞孵育,对黏附的细菌计数,结果显示,rPsaA多克隆抗体与肺炎链球菌阳性血清均能有效减少牛肺炎链球菌对牛胚气管上皮细胞的黏附数。本研究经原核系统表达了牛肺炎链球菌rPsaA,并首次证明rPsaA具有影响牛肺炎链球菌黏附牛胚气管上皮细胞的作用,该结果为探究抑制肺炎链球菌黏附呼吸道上皮细胞的机理以及肺炎链球菌亚单位疫苗的研究奠定了基础。; 关键词肺炎链球菌 psaA基因原核表达黏附; Keywords Streptococcus pneumoniae psaA gene prokaryotic expression adhesion; 分类号 S852.61 [农业科学—基础兽医学]; 在线阅读下载PDF 职称材料

题名牛病毒性腹泻病毒对新西兰白兔致病性分析及E2蛋白免疫效果的评价被引量：3: 2; 作者赵逢淼郭婷周雅坪赵红梅王宇琛田广原孙雅婕卞宇晨于佳梁郝永清; 机构内蒙古农业大学; 出处《中国畜牧兽医》 CAS 北大核心 2022年第9期3549-3558,共10页; 基金牛羊重要疫病免疫与分子快速检测新技术研发(2019GG240) 牛支原体感染促进牛病毒性腹泻病毒感染机制的研究(32060790)。; 文摘【目的】研究牛病毒性腹泻病毒(BVDV)感染对新西兰白兔的致病性以及BVDV E2重组蛋白的免疫效果。【方法】将实验室培养保存的BVDV病毒纯化并按照Reed-Muench法测定其病毒滴度。在致病性试验中,将10只新西兰白兔随机分为感染组和对照组,每组5只。感染组用1 mL纯化的BVDV病毒攻毒(滴鼻500μL、耳缘静脉注射500μL),对照组用等体积的生理盐水处理,连续3 d,每天1次,每天观察各组兔的临床症状并测量体温;分别于接种病毒后第6、9、12、15、17天通过耳缘静脉采集血液检测血常规;感染病毒第17天采集鼻拭子进行RT-PCR鉴定,采集后剖杀并采集气管、肺脏、脾脏和小肠组织,制备病理切片观察病理变化。在免疫效果评价试验中,将10只新西兰白兔随机分为免疫组和对照组,每组5只,免疫组用E2重组蛋白(1 mg/只)与佐剂混合后经肌内多点注射免疫新西兰白兔,对照组接种等体积生理盐水;共免疫2次,2次免疫间隔为14 d。在一免后0、7、14、21、28 d采集血清,通过间接ELISA方法检测血清中抗重组蛋白特异性抗体水平;在一免后第28天按致病性试验中方法攻毒,在攻毒第17天采集鼻拭子进行RT-PCR鉴定,采集气管、肺脏、脾脏和小肠组织制备病理切片观察病理变化及免疫组织化学检测。【结果】纯化后BVDV的病毒滴度为4.16×10~6 TCID/mL。与对照组相比,感染组部分新西兰白兔6 d内活动减少,采食略微减少,6 d后逐渐恢复正常,在感染第13天出现腹泻症状,从第5天开始体温略微升高,但均在正常范围内波动。与对照组相比,在攻毒第6和9天,感染组白细胞和血小板分别显著和极显著降低(P<0.05;P<0.01);在攻毒第12、15和17天,感染组白细胞、血小板和淋巴细胞均极显著降低(P<0.01)。鼻拭子RT-PCR检测为阳性,气管、肺脏、脾脏及小肠组织表现出轻度至重度的组织病理学变化。间接ELISA检测结果表明,在一免后7 d时,血清抗体滴度为1∶16~1∶32;在一免后28 d时,血清抗体滴度为1∶256~1∶512;免疫攻毒组新西兰白兔鼻拭子经RT-PCR检测为阴性;组织病理学观察显示,免疫攻毒组气管及肺脏表现出轻微的组织病理学变化。免疫组化检测结果显示,免疫组结果均呈阴性,对照组结果均为阳性。【结论】通过滴鼻及耳缘静脉注射BVDV的方式可以构建新西兰白兔致病模型,BVDV E2亚单位疫苗能够刺激机体产生特异性抗体,起到免疫防御的作用。; 关键词牛病毒性腹泻病毒新西兰白兔免疫组化亚单位疫苗; Keywords Bovine viral diarrhea virus(BVDV) New Zealand White rabbits immunohistochemistry subunit vaccine; 分类号 S852.659.6 [农业科学—基础兽医学]; 在线阅读下载PDF 职称材料

题名绵羊肺炎支原体P60_(58aa-928aa)蛋白的原核表达及间接ELISA方法的建立被引量：6: 3; 作者田广原王宇琛周雅坪郭婷赵红梅赵逢淼孙雅婕卞宇晨于佳梁周雨霞; 机构内蒙古农业大学; 出处《中国畜牧兽医》 CAS 北大核心 2022年第5期1960-1969,共10页; 基金内蒙古农业大学科技成果转化专项资金(YZGC2017027)。; 文摘【目的】建立基于绵羊肺炎支原体表面脂蛋白P60的间接ELISA方法。【方法】利用生物信息学软件对P60蛋白进行抗原性分析,筛选出抗原性最佳的区域,扩增目的基因后构建重组表达载体并进行基因测序,将测序正确的质粒转化大肠杆菌BL21(DE3)感受态细胞,用IPTG诱导抗原性最佳蛋白表达并进行诱导时间优化;利用SDS-PAGE分析该蛋白分子质量大小及其表达形式。以重组蛋白作为抗原,绵羊肺炎支原体阳性血清作为抗体,通过Western blotting方法分析其反应原性。以重组蛋白为包被抗原,建立抗原性最佳蛋白的间接ELISA抗体检测方法,用该方法对20份阴性血清进行检测,计算阴阳临界值;检测该方法的特异性、敏感性和重复性,并用建立的间接ELISA方法与间接血凝法对92份绵羊临床血清样本进行检测。【结果】经DNAStar分析,P60蛋白第58-928位氨基酸区域的平均抗原指数在0.8~1.7之间,亲水指数为0~2.0,证明该区域(P60_(58aa-928aa))抗原性和亲水性较强;通过PCR扩增得到P60_(58aa-928aa)基因,并构建重组表达载体,通过基因测序证明该重组表达载体与预期结果一致。SDS-PAGE结果显示,IPTG诱导浓度为1 mmol/L,诱导10 h时蛋白表达量较高,蛋白分子质量为42 ku,在大肠杆菌中以包涵体的形式表达;Western blotting结果表明,构建的重组蛋白具有良好的反应原性。对ELISA各条件进行优化结果显示:抗原包被浓度为0.5μg/mL,一抗最佳稀释浓度为1∶100,最佳孵育时间为1.5 h,酶标二抗最佳稀释倍数为1∶4000,判定阴阳性血清的临界值为0.36。对口蹄疫病毒(FMDV)、小反刍兽疫病毒(PPRV)、布氏杆菌(Brucella)、牛支原体(Mb)、丝状支原体山羊亚种(Mmc)的标准阳性血清的检测均为阴性,证明该方法特异性较强;敏感性试验结果表明,血清稀释度为1∶2048时仍为阳性;批内重复试验和批间重复试验的变异系数均<10%,证明该方法具有较好的重复性。利用所建立的间接ELISA方法与间接血凝法对92份羊血清检测结果表明,二者的阳性符合率为81.6%,阴性符合率为92.6%,总符合率为88.0%。【结论】本研究建立的间接ELISA方法可用于临床样本的检测,为绵羊肺炎支原体的疫苗免疫效果评价和疾病诊断提供了较为可靠的方法。; 关键词绵羊肺炎支原体 P60_(58aa-928aa)蛋白原核表达间接ELISA; Keywords Mycoplasma ovipneumoniae P60_(58aa-928aa)protein prokaryotic expression indirect ELISA; 分类号 S852.53 [农业科学—基础兽医学]; 在线阅读下载PDF 职称材料

题名BPIV3 NP蛋白的原核表达及其对BPIV3灭活疫苗免疫增强作用的研究被引量：1: 4; 作者王宇琛田广原周雅坪郭婷赵红梅孙雅婕赵逢淼卞宇晨于佳梁郝永清; 机构内蒙古农业大学; 出处《中国畜牧兽医》 CAS 北大核心 2022年第8期3122-3130,共9页; 基金内蒙古自治区科技计划项目(2019GG240) 内蒙古自治区科技重大专项子课题(2021SZD0016)。; 文摘【目的】验证牛副流感病毒3型(Bovine parainfluenza virus type 3,BPIV3)NP蛋白对BPIV3灭活疫苗的免疫效果是否有增强作用。【方法】利用生物信息学软件对NP基因编码的蛋白进行抗原性分析,筛选出抗原性区域,采用PCR方法扩增BPIV3截短的NP基因序列,连接至pET-32a(+)质粒上,通过大肠杆菌原核表达系统和Ni亲和层析的方法获得了较高纯度的BPIV3 NP蛋白,经Western blotting验证其反应原性。将BPIV3用0.3%甲醛灭活后与弗氏佐剂1∶1混合制备灭活疫苗。8只新西兰白兔随机分为4组:灭活疫苗组、NP蛋白组、灭活疫苗和NP蛋白混合组及对照组,每组2只。免疫前及免疫后每7 d采集血液分离血清,采用间接ELISA方法和病毒中和试验测定并比较4组新西兰白兔特异性抗体和中和抗体的水平。【结果】经DNAStar分析,NP蛋白第193-368位氨基酸处的平均抗原指数在0.4~1.7之间,亲水指数为0~1.5,证明该区域抗原性和亲水性较强;通过PCR扩增得到NP基因,并构建重组表达载体,通过基因测序证明该重组表达载体与预期结果一致;SDS-PAGE结果显示,NP蛋白表达量较高,蛋白分子质量为50 ku且以包涵体形式表达;Western blotting结果表明,所表达的蛋白具有较强的反应原性;ELISA结果显示,在免疫后28 d,对照组的特异性抗体效价为0,灭活疫苗组、NP蛋白组及灭活疫苗和NP蛋白混合组的特异性抗体效价分别达到1∶2^(11)、1∶2^(17)和1∶2^(18)。病毒中和试验结果显示,在免疫后28 d,对照组中和抗体效价为0,灭活疫苗组、NP蛋白组及灭活疫苗和NP蛋白混合组的中和抗体效价分别为1∶2^(3.32)、1∶2^(4.48)和1∶2^(4.98)。【结论】BPIV3 NP蛋白可增强BPIV3灭活疫苗的免疫效果,在灭活疫苗中加入NP蛋白可作为BPIV3灭活疫苗的新型接种方法。; 关键词牛副流感病毒3型(BPIV3) NP蛋白原核表达灭活疫苗; Keywords Bovine parainfluenza type 3(BPIV3) NP protein prokaryotic expression inactivated vaccine; 分类号 S852.653 [农业科学—基础兽医学]; 在线阅读下载PDF 职称材料

	题名	作者	出处	发文年	被引量	操作
1	牛肺炎链球菌重组PsaA蛋白对牛胚气管上皮细胞黏附抑制作用的研究	孙雅婕郭婷周雅坪赵红梅赵逢淼高源李梦思郝永清	《中国预防兽医学报》 CAS CSCD 北大核心	2024	5	在线阅读下载PDF 职称材料
2	牛病毒性腹泻病毒对新西兰白兔致病性分析及E2蛋白免疫效果的评价	赵逢淼郭婷周雅坪赵红梅王宇琛田广原孙雅婕卞宇晨于佳梁郝永清	《中国畜牧兽医》 CAS 北大核心	2022	3	在线阅读下载PDF 职称材料
3	绵羊肺炎支原体P60_(58aa-928aa)蛋白的原核表达及间接ELISA方法的建立	田广原王宇琛周雅坪郭婷赵红梅赵逢淼孙雅婕卞宇晨于佳梁周雨霞	《中国畜牧兽医》 CAS 北大核心	2022	6	在线阅读下载PDF 职称材料
4	BPIV3 NP蛋白的原核表达及其对BPIV3灭活疫苗免疫增强作用的研究	王宇琛田广原周雅坪郭婷赵红梅孙雅婕赵逢淼卞宇晨于佳梁郝永清	《中国畜牧兽医》 CAS 北大核心	2022	1	在线阅读下载PDF 职称材料