目的探究具核梭杆菌(F.nucleatum)感染对体外肠道上皮屏障的影响及可能的机制。方法人结直肠腺癌细胞Caco-2细胞接种于Transwell小室构建体外肠道上皮屏障模型。采用葡聚糖硫酸钠(DSS)和F.nucleatum建立细胞损伤和感染模型,实验分为CON...目的探究具核梭杆菌(F.nucleatum)感染对体外肠道上皮屏障的影响及可能的机制。方法人结直肠腺癌细胞Caco-2细胞接种于Transwell小室构建体外肠道上皮屏障模型。采用葡聚糖硫酸钠(DSS)和F.nucleatum建立细胞损伤和感染模型,实验分为CON组、FN组、8%DSS组和FN+8%DSS组,检测F.nucleatum对有无DSS处理的上皮屏障的影响并评估铁死亡在其中的作用;随后引入铁死亡抑制剂铁抑素1(Fer-1)和去铁胺(DFO),探究抑制铁死亡对受损上皮屏障的作用。实验中,采用细胞计数试剂盒8(CCK-8)检测细胞增殖;乳酸脱氢酶(LDH)法检测细胞损伤;跨上皮电阻值(TEER)评估上皮完整性;异硫氰酸荧光素-葡聚糖(FD4)透过率评估上皮通透性;透射电镜观察细胞间连接及线粒体;蛋白免疫印迹和免疫荧光染色检测胞质紧密粘连蛋白ZO-1和紧密连接蛋白CLDN-1的表达;铁死亡检测包括免疫荧光染色检测细胞内亚铁离子(Fe2+)含量;免疫印迹法检测谷胱甘肽过氧化物酶4(GPX4)、铁蛋白重链1(FTH1)、乙酰辅酶A合成酶长链家族4(ACSL4)的表达,以及测量丙二醛(MDA)含量和谷胱甘肽比例(GSH%)评估脂质过氧化水平。结果与CON组相比,FN组、8%DSS组和FN+8%DSS组细胞增殖率降低,细胞损伤增加(P<0.05);与CON组相比,FN组TEER值和FD4透过率差异无统计学意义(P>0.05);与8%DSS组相比,FN+8%DSS组的6、12、24 h TEER值下降(P<0.05),FD4透过率增加(P<0.0001);与CON组相比,FN+8%DSS组ZO-1和CLDN-1蛋白下调(P<0.05);透射电镜观察到8%DSS组细胞间连接破坏,FN+8%DSS组除了细胞间连接破坏还观测到F.nucleatum入侵细胞内部,线粒体呈现铁死亡样改变;GPX4蛋白下调,FTH1和ACSL4蛋白上调,细胞内Fe2+积聚,MDA升高,GSH%降低。引入Fer-1和DFO后,细胞损伤降低,TEER值回升,FD4透过率降低,ZO-1和CLDN-1蛋白表达升高(P<0.05)。结论F.nucleatum感染可能通过铁死亡途径促进DSS诱导的体外肠道上皮屏障破坏。展开更多
文摘[目的]评估中草药散剂治疗奶牛隐性乳房炎的治疗效果,探索替代抗生素的可行性。[方法]采用随机对照试验,将90头隐性乳房炎奶牛分为试验组(中草药散剂,含黄芪、蒲公英等)、抗生素组(头孢噻呋钠)和对照组(未治疗),每组30头。治疗30 d后,通过体细胞数、产奶量、乳成分(脂肪、蛋白质、乳糖)及临床症状(乳房肿胀、温度、硬结面积)等指标,结合ANOVA、t检验及χ^(2)检验分析效果。[结果]试验组治疗后30 d乳汁体细胞计数下降73.8%(489×10^(3)个/mL→128×10^(3)个/mL),与抗生素组(75.8%)无显著差异(P=0.062),但显著优于对照组(17.4%,P<0.001)。产奶量提升15.8%(24.6→28.5 kg/d),显著高于抗生素组(7.2%)且效果持续更久(停药30 d仍多10.1%,P<0.01)。脂肪(+14.2%)和蛋白质(+14.6%)恢复速度较抗生素组快3~5 d。临床症状改善显著,乳房肿胀消退率73.3%、抗生素组(46.7%,P=0.015),乳房温度恢复时间缩短45.2%(3.2 d vs 5.8 d,P<0.001),乳腺硬结面积缩小82.7%(vs抗生素组57.1%,P=0.018)。[结论]中草药散剂治疗隐性乳房炎的效果与抗生素相当,且在产奶恢复持续性、乳成分改善速度和治疗成本(降低57%)方面更具优势,为畜牧业抗生素减量化提供有效解决方案。
文摘选取黄山、大别山山脉的4种烘青名优绿茶为对象,选择优选评价员小组应用静态的定量描述分析(quantitative descriptive analysis,QDA)法、动态合适项勾选(temporal check-all-that-apply,TCATA)法和动态主导感官属性(temporal dominance of sensation,TDS)法,选择消费者评价小组应用动态主导情感属性(temporal dominance of emotion,TDE)法进行评价。结果表明,静态的QDA法能有效表征4种名优绿茶的风味特征;而通过动态的TCATA法实时记录风味属性,发现黄山名优绿茶的动态风味感知顺序依次为“醇”“鲜”“鼻后香”和“回甘”,大别山名优绿茶的顺序为“浓”“苦”“涩”和“厚”;结合动态的TDS法和TDE法,揭示了4种名优绿茶品饮过程中特定的主导感官属性与消费者情感之间的相关性,“苦”与“丰富的”“印象深刻的”“意外的”和“不舒服的”之间的正相关性依次增强,“鼻后香”“回甘”与“温和的”“愉快的”和“感兴趣的”之间的正相关性依次增强。本研究为茶企把握茶产品动态特征,并引导消费者实时感受茶汤风味的动态变化提供了理论依据。
文摘目的探究具核梭杆菌(F.nucleatum)感染对体外肠道上皮屏障的影响及可能的机制。方法人结直肠腺癌细胞Caco-2细胞接种于Transwell小室构建体外肠道上皮屏障模型。采用葡聚糖硫酸钠(DSS)和F.nucleatum建立细胞损伤和感染模型,实验分为CON组、FN组、8%DSS组和FN+8%DSS组,检测F.nucleatum对有无DSS处理的上皮屏障的影响并评估铁死亡在其中的作用;随后引入铁死亡抑制剂铁抑素1(Fer-1)和去铁胺(DFO),探究抑制铁死亡对受损上皮屏障的作用。实验中,采用细胞计数试剂盒8(CCK-8)检测细胞增殖;乳酸脱氢酶(LDH)法检测细胞损伤;跨上皮电阻值(TEER)评估上皮完整性;异硫氰酸荧光素-葡聚糖(FD4)透过率评估上皮通透性;透射电镜观察细胞间连接及线粒体;蛋白免疫印迹和免疫荧光染色检测胞质紧密粘连蛋白ZO-1和紧密连接蛋白CLDN-1的表达;铁死亡检测包括免疫荧光染色检测细胞内亚铁离子(Fe2+)含量;免疫印迹法检测谷胱甘肽过氧化物酶4(GPX4)、铁蛋白重链1(FTH1)、乙酰辅酶A合成酶长链家族4(ACSL4)的表达,以及测量丙二醛(MDA)含量和谷胱甘肽比例(GSH%)评估脂质过氧化水平。结果与CON组相比,FN组、8%DSS组和FN+8%DSS组细胞增殖率降低,细胞损伤增加(P<0.05);与CON组相比,FN组TEER值和FD4透过率差异无统计学意义(P>0.05);与8%DSS组相比,FN+8%DSS组的6、12、24 h TEER值下降(P<0.05),FD4透过率增加(P<0.0001);与CON组相比,FN+8%DSS组ZO-1和CLDN-1蛋白下调(P<0.05);透射电镜观察到8%DSS组细胞间连接破坏,FN+8%DSS组除了细胞间连接破坏还观测到F.nucleatum入侵细胞内部,线粒体呈现铁死亡样改变;GPX4蛋白下调,FTH1和ACSL4蛋白上调,细胞内Fe2+积聚,MDA升高,GSH%降低。引入Fer-1和DFO后,细胞损伤降低,TEER值回升,FD4透过率降低,ZO-1和CLDN-1蛋白表达升高(P<0.05)。结论F.nucleatum感染可能通过铁死亡途径促进DSS诱导的体外肠道上皮屏障破坏。
