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异源表达油菜DGAT1基因对亚麻荠种子含油量及油脂合成相关基因表达的影响
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作者 邢明 关文启 +3 位作者 黄曼婷 韦怡 柴文洋 赵翠珠 《西北农业学报》 北大核心 2025年第4期653-658,共6页
为了提升亚麻荠的产量及含油量,本研究通过农杆菌侵染转化法,将油菜中DGAT基因的4个拷贝分别转入亚麻荠中,得到亚麻荠过表达材料。与野生型种子相比,转基因系种子更加圆润饱满,更平滑有光泽感,种子体积变大,同时种子的质量也增加。种子... 为了提升亚麻荠的产量及含油量,本研究通过农杆菌侵染转化法,将油菜中DGAT基因的4个拷贝分别转入亚麻荠中,得到亚麻荠过表达材料。与野生型种子相比,转基因系种子更加圆润饱满,更平滑有光泽感,种子体积变大,同时种子的质量也增加。种子含油量测定结果显示,过表达系BnaDGAT1-1OE、BnaDGAT1-2OE、BnaDGAT1-3OE和BnaDGAT1-4OE种子含油量均高于野生型,其中BnaDGAT1-3OE含油量最高。通过qRT-PCR测定与油脂相关基因的表达量,结果显示BnaDGAT1-1OE、BnaDGAT1-2OE、BnaDGAT1-3OE和BnaDGAT1-4OE的CsFAE1、CsFATA、CsFATB的表达量均高于野生型,而CsSAD则不变。 展开更多
关键词 亚麻荠 二酰甘油酰基转移酶 种子含油量 异源表达 油脂合成
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TmLPCAT转基因高芥酸油菜组培体系的优化
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作者 李娅楠 邢明 +2 位作者 关文启 黄曼婷 赵翠珠 《西北农业学报》 CAS CSCD 北大核心 2024年第9期1775-1781,共7页
转旱金莲TmLPCAT基因油菜的三酰甘油的sn-2位上装配了大量的芥酰基,大大提高了甘蓝型油菜LC的含油量。旨在优化TmLPCAT转基因高芥酸油菜的组培体系,为高芥酸油菜的进一步分子改良奠定基础。以TmLPCAT转基因高芥酸纯系油菜种子为材料,研... 转旱金莲TmLPCAT基因油菜的三酰甘油的sn-2位上装配了大量的芥酰基,大大提高了甘蓝型油菜LC的含油量。旨在优化TmLPCAT转基因高芥酸油菜的组培体系,为高芥酸油菜的进一步分子改良奠定基础。以TmLPCAT转基因高芥酸纯系油菜种子为材料,研究0.1%HgCl 2溶液、15%次氯酸钠、15%次氯酸钠(含0.1%Triton x-100)3种消毒剂不同消毒时间(5 min、10 min、15 min)的消毒效果,并研究侵染液不同OD值(0.2~0.4、0.4~0.6、0.6~0.8、0.8~1.0、1.0~1.2)对下胚轴再生的影响,研究不同蔗糖含量(0 g/L、10 g/L、20 g/L、60 g/L)M4生根培养基对再生苗生根的影响。结果表明,最适合TmLPCAT转基因高芥酸油菜种子的消毒方式是75%乙醇消毒45 s,再用15%次氯酸钠消毒15 min,种子萌发率达到90%;最适宜侵染下胚轴的侵染液OD值为0.4~0.6,转到M3,6周后发芽率达到48.33%,褐化程度较低;TmLPCAT转基因高芥酸油菜种子再生苗生根的最适蔗糖含量为20 g/L,生根率达到96.65%,并且根的数目较多。表明在原有的油菜下胚轴转化方法基础上,优化了TmLPCAT转基因高芥酸油菜组织培养体系,提高了下胚轴的出芽率、生根率等。 展开更多
关键词 高芥酸 组织培养 生根培养 消毒方式
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盐胁迫对亚麻荠幼苗生理生化指标的影响 被引量:31
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作者 李晓雅 赵翠珠 +5 位作者 程小军 贾庆利 李长圣 刘明喆 Chaofu Lu 张猛 《西北农业学报》 CAS CSCD 北大核心 2015年第4期76-83,共8页
为了研究盐胁迫对亚麻荠幼苗生理生化的影响,通过水培NaCl盐胁迫试验,分别测定盐胁迫下叶片萎蔫数目,叶片相对含水量,单株鲜质量和干质量等形态指标,以及一些关键的生理指标,包括在不同水平盐胁迫下以及复水后亚麻荠叶片和根的相对电导... 为了研究盐胁迫对亚麻荠幼苗生理生化的影响,通过水培NaCl盐胁迫试验,分别测定盐胁迫下叶片萎蔫数目,叶片相对含水量,单株鲜质量和干质量等形态指标,以及一些关键的生理指标,包括在不同水平盐胁迫下以及复水后亚麻荠叶片和根的相对电导率,丙二醛(MDA),可溶性蛋白,超氧阴离子(O-2)和3种抗氧化酶(SOD、POD和CAT)活性的变化。结果表明:盐胁迫严重影响植物的生长参数,造成植株吸水困难,植物受害程度与盐处理浓度呈正相关;盐胁迫使得植物叶片和根细胞中包括膜相对透性和膜脂过氧化的膜损伤参数改变,表现在随着盐浓度的增加,植物细胞中的相对电导率和MDA水平逐渐上升;可溶性蛋白作为一种渗透调节有机物,在短期的盐胁迫下叶片中可溶性蛋白变化不明显,但在复水后根细胞中可溶性蛋白质量分数上升说明其具有缓解胁迫的作用;盐胁迫导致活性氧的大量积累,同时也迅速激活了活性氧清除酶系统,随着盐胁迫程度的加剧,O-2水平逐渐增加,抗氧化酶SOD、POD和CAT活性先上升后下降;植物面临盐胁迫时,根比叶片敏感,能很快地产生应答,在高盐浓度复水后仍存在较大胁迫,恢复缓慢。 展开更多
关键词 亚麻荠 盐胁迫 膜损伤 活性氧 抗氧化酶
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甘蓝型油菜DGAT1重复基因的克隆与表达分析 被引量:1
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作者 李欢 赵翠珠 +4 位作者 李长圣 刘明喆 张文学 李志西 张猛 《西北农业学报》 CAS CSCD 北大核心 2014年第7期55-61,共7页
二酰甘油酰基转移酶(Diacylglycerol acyltransferase,DGAT1)是十字花科植物种子三酰甘油积累主要的贡献者。甘蓝型油菜为异源四倍体,存在多个DGAT1重复基因,目前还缺乏对这些基因的系统研究。以甘蓝型油菜为试验材料,根据TAIR已公布的... 二酰甘油酰基转移酶(Diacylglycerol acyltransferase,DGAT1)是十字花科植物种子三酰甘油积累主要的贡献者。甘蓝型油菜为异源四倍体,存在多个DGAT1重复基因,目前还缺乏对这些基因的系统研究。以甘蓝型油菜为试验材料,根据TAIR已公布的拟南芥DGAT1基因序列在BRAD数据库中进行BLAST比对,根据比对得到的2个白菜型油菜与2个甘蓝的DGAT1基因序列设计引物,利用RT-PCR技术获得4个甘蓝型油菜DGAT1包含完整编码区的基因片段,并对所得到片段进行测序和生物信息学分析。结果表明:克隆得到的基因片段分别为BnDGAT1-1,1 509bp;BnDGAT1-2,1 533bp;BnDGAT1-3,1 515bp;BnDGAT1-4,1 506bp。这4个基因具有极高的相似性,BnDGAT1-1与BnDGAT1-2、BnDGAT1-3与BnDGAT1-4的2个基因相似度均高达97%以上。跨膜结构分析表明BnDGAT1-1与BnDGAT1-2这1对基因所编码的蛋白质含有9个跨膜结构域,而BnDGAT1-3与BnDGAT1-4这对基因所编码的蛋白质含有8个跨膜结构域。包含有BnDGAT1-1与BnDGAT1-3的基因对BnDGAT1-a与包含有BnDGAT1-2与BnDGAT1-4的基因对BnDGAT1-b在含油量不同的各种甘蓝型油菜种子中表达无明显差异,表明这2对DGAT1基因的表达差异并不是影响所选材料种子含油量的决定因素。 展开更多
关键词 甘蓝型油菜 DGAT1 重复基因 基因表达
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白菜型油菜PDAT1基因的克隆及生物信息学分析 被引量:2
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作者 穆姣 赵翠珠 +6 位作者 王莉莉 李卓蔚 李欢 刘明喆 李长圣 杨铮 张猛 《西北农业学报》 CAS CSCD 北大核心 2015年第12期78-84,共7页
磷脂二酰甘油酰基转移酶(phospholipid:diacylglycerol acyltransferase 1,PDAT1)催化三酰甘油合成的最后一步反应,在生物质能源领域有良好的应用前景。本试验克隆得到白菜型油菜PDAT1的2条编码区序列,分别命名为BrPDAT1-1和BrPDAT1-2。... 磷脂二酰甘油酰基转移酶(phospholipid:diacylglycerol acyltransferase 1,PDAT1)催化三酰甘油合成的最后一步反应,在生物质能源领域有良好的应用前景。本试验克隆得到白菜型油菜PDAT1的2条编码区序列,分别命名为BrPDAT1-1和BrPDAT1-2。BrPDAT1-1CDS全长2 007bp,编码668个氨基酸残基组成的肽链;BrPDAT1-2CDS全长1 794bp,编码597个氨基酸残基组成的肽链。生物信息学分析表明:BrPDAT1-1与AtPDAT1的相似度为91.08%,BrPDAT1-2与AtPDAT1的相似度为82.86%,两序列都编码一个无信号肽的亲水性稳定蛋白,跨膜结构域分析表明AtPDAT1和BrPDAT1-1都有1个跨膜结构域,而BrPDAT1-2无跨膜结构域。BrPDAT1-1和BrPDAT1-2蛋白序列均含有卵磷脂-胆固醇-酰基转移酶超家族保守结构域。 展开更多
关键词 白菜型油菜 PDAT1 基因克隆 生物信息学
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甘蓝型油菜种子特异表达油体蛋白启动子P_(BnOA03)的克隆及功能分析 被引量:2
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作者 王海兰 贾庆利 +6 位作者 赵翠珠 杨铮 王凯 刘香伶 唐通 宋欢 张猛 《西北农业学报》 CAS CSCD 北大核心 2018年第8期1152-1160,共9页
为了改良油菜种子的性状,常常需要研究种子特异表达目的基因的情况。在分析油菜油体蛋白表达模式的基础上,选择种子特异高表达的油体蛋白,根据甘蓝型油菜基因组序列设计引物,利用PCR技术从基因组中克隆到一段715bp的启动子序列。启动子... 为了改良油菜种子的性状,常常需要研究种子特异表达目的基因的情况。在分析油菜油体蛋白表达模式的基础上,选择种子特异高表达的油体蛋白,根据甘蓝型油菜基因组序列设计引物,利用PCR技术从基因组中克隆到一段715bp的启动子序列。启动子顺式元件分析表明,这一克隆序列具有CAAT-box和TATA-box启动子基本元件,另外含有ABA响应元件等多种顺式元件。进一步利用GUS报告基因在拟南芥中对该启动子的功能进行鉴定,结果表明,在转基因株系的幼苗、根、茎、叶、花和种子发育前期及成熟种子中没有检测到GUS基因明显表达,在种子发育的中后期检测到GUS基因的表达逐渐增强。说明这个启动子的表达调控具有一定的种子特异性。 展开更多
关键词 甘蓝型油菜 油体蛋白 启动子 GUS染色 拟南芥
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TmFAD2和BnFAD3双基因载体的构建及转化株脂肪酸分析 被引量:1
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作者 倪雪峰 赵翠珠 +1 位作者 李欢 张猛 《西北农业学报》 CAS CSCD 北大核心 2014年第10期112-119,共8页
必需脂肪酸亚油酸(18∶2)和亚麻酸(18∶3)在植物中的合成过程一直备受研究者的关注。本研究利用旱金莲中合成亚油酸的油酸脱饱和酶基因TmFAD2及甘蓝型油菜中合成亚麻酸的亚油酸脱饱和酶基因BnFAD3,在pRD400骨架载体的基础上,构建同时表... 必需脂肪酸亚油酸(18∶2)和亚麻酸(18∶3)在植物中的合成过程一直备受研究者的关注。本研究利用旱金莲中合成亚油酸的油酸脱饱和酶基因TmFAD2及甘蓝型油菜中合成亚麻酸的亚油酸脱饱和酶基因BnFAD3,在pRD400骨架载体的基础上,构建同时表达TmFAD2和BnFAD3的串联双价载体pSFF。通过农杆菌介导的花序浸蘸法完成pSFF对拟南芥哥伦比亚野生型的转化,观察发现转基因植株的第1对真叶有不同程度的畸形。按照畸形程度将其划分为4个等级,气相色谱分析4个等级叶片及其后代种子中脂肪酸的组成及含量,发现随着畸形程度的增高,叶片和种子中亚麻酸C18∶3含量都呈现降低的趋势。 展开更多
关键词 TmFAD2 BnFAD3 植物表达载体 拟南芥转化
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