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马属动物克隆技术:从实验室到产业应用
1
作者
刘琦
任宏
+6 位作者
温鑫
才文道力玛
伊敏娜
赵比力格
斯琴
何千倩
格
日乐其木
格
《黑龙江动物繁殖》
2025年第2期52-59,共8页
随着我国经济的快速发展,马产业在文化、体育、生态旅游和食品领域中崭露头角。然而,马属动物的繁殖面临“三低难题”,即自然受孕率低、胚胎存活率低和幼驹成活率低,并且通常为单胎繁殖,这些独特的生物学特性严重制约了良种繁育的进程...
随着我国经济的快速发展,马产业在文化、体育、生态旅游和食品领域中崭露头角。然而,马属动物的繁殖面临“三低难题”,即自然受孕率低、胚胎存活率低和幼驹成活率低,并且通常为单胎繁殖,这些独特的生物学特性严重制约了良种繁育的进程。体细胞克隆作为一种有效的繁育技术,能够为马产业的发展带来显著提升。文章主要综述了体细胞克隆的一般流程、体细胞克隆对马属动物命运的改变、体细胞克隆现存挑战及未来展望,以期为国内马属动物体细胞克隆的发展提供理论参考。
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关键词
马
驴
骡
体细胞克隆
卵母细胞
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职称材料
马脐静脉内皮细胞分离培养及其功能验证
2
作者
赵比力格
温鑫
+7 位作者
伊敏娜
才文道力玛
神英超
斯琴
照伦其其
格
任宏
芒来
格
日乐其木
格
《中国畜牧兽医》
CAS
CSCD
北大核心
2024年第7期2953-2962,共10页
【目的】建立一种简便且高效的体外马脐静脉内皮细胞(equine umbilical vein endothelial cells,eUVECs)分离和培养方法,并提供一个可靠的细胞模型,用于研究马的血管生成功能。【方法】在无菌条件下,从马脐带中分离静脉,并用PBS液彻底...
【目的】建立一种简便且高效的体外马脐静脉内皮细胞(equine umbilical vein endothelial cells,eUVECs)分离和培养方法,并提供一个可靠的细胞模型,用于研究马的血管生成功能。【方法】在无菌条件下,从马脐带中分离静脉,并用PBS液彻底冲洗。使用0.2%Ⅰ型胶原酶对脐静脉进行消化25~30 min后,收集分离的eUVECs进行培养。每12 h使用倒置显微镜观察eUVECs的生长状况。使用CCK-8法测定第1代(P1)和P3代eUVECs在7 d内的D450 nm值,并绘制生长曲线。通过免疫荧光染色方法鉴定内皮细胞标记物CD31和CD34的表达情况。使用间充质干细胞成脂和成骨分化诱导试剂诱导eUVECs,以验证其是否具有分化特性。确定内皮细胞后,添加梯度上升浓度(5、10、15、20、25 ng/mL)的肿瘤坏死因子-α(TNF-α)刺激eUVECs,使用CCK-8法检测细胞活性,观察细胞形态变化。使用Matrigel法培养eUVECs,用ImageJ软件分析数据,并统计新生血管的4个指标:成管交叉点、成管长度、成管数和成管面积。寻找体外血管生成能力的最佳TNF-α刺激浓度。【结果】使用0.2%Ⅰ型胶原酶消化法分离的eUVECs 4~5 d内的汇合度达到90%。在倒置显微镜下观察,这些细胞生长良好并呈铺路石状排列。通过免疫荧光染色确认了CD31和CD34在eUVECs中的阳性表达;并且eUVECs表现出薄弱的成脂和成骨分化能力。在Matrigel法培养条件下,20 ng/mL TNF-α处理组的成管交叉点数、成管长度、成管数和成管面积等血管形成能力指标最高,且极显著高于对照组(P<0.01)。然而,在常规培养条件下,随着TNF-α浓度增加到15 ng/mL,eUVECs的增殖受到显著抑制甚至开始导致细胞的凋亡。【结论】Ⅰ型胶原酶脐带注满消化法能够成功分离培养出原代eUVECs,20 ng/mL TNF-α显著增强eUVECs体外血管生成能力,eUVECs可以作为体外研究血管生成的细胞模型。
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关键词
马
脐静脉内皮细胞
Ⅰ型胶原酶消化法
培养鉴定
TNF-α
血管新生
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职称材料
题名
马属动物克隆技术:从实验室到产业应用
1
作者
刘琦
任宏
温鑫
才文道力玛
伊敏娜
赵比力格
斯琴
何千倩
格
日乐其木
格
机构
农业农村部马属动物种业创新重点实验室
内蒙古自治区马属动物科学研究与技术创新重点实验室
内蒙古农业大学动物科学学院马属动物研究中心
内蒙古农业大学职业技术学院
出处
《黑龙江动物繁殖》
2025年第2期52-59,共8页
基金
内蒙古自治区教育厅一流学科科研专项(YLXKZX-NND-019)。
文摘
随着我国经济的快速发展,马产业在文化、体育、生态旅游和食品领域中崭露头角。然而,马属动物的繁殖面临“三低难题”,即自然受孕率低、胚胎存活率低和幼驹成活率低,并且通常为单胎繁殖,这些独特的生物学特性严重制约了良种繁育的进程。体细胞克隆作为一种有效的繁育技术,能够为马产业的发展带来显著提升。文章主要综述了体细胞克隆的一般流程、体细胞克隆对马属动物命运的改变、体细胞克隆现存挑战及未来展望,以期为国内马属动物体细胞克隆的发展提供理论参考。
关键词
马
驴
骡
体细胞克隆
卵母细胞
Keywords
horse
donkey
mule
somatic cell cloning
oocytes
分类号
Q785 [生物学—分子生物学]
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职称材料
题名
马脐静脉内皮细胞分离培养及其功能验证
2
作者
赵比力格
温鑫
伊敏娜
才文道力玛
神英超
斯琴
照伦其其
格
任宏
芒来
格
日乐其木
格
机构
内蒙古农业大学动物科学学院
出处
《中国畜牧兽医》
CAS
CSCD
北大核心
2024年第7期2953-2962,共10页
基金
内蒙古自治区自然科学基金(2023SHZR0557)
内蒙古农业大学优秀博士引进人才科研启动项目(NDYB2022-42)。
文摘
【目的】建立一种简便且高效的体外马脐静脉内皮细胞(equine umbilical vein endothelial cells,eUVECs)分离和培养方法,并提供一个可靠的细胞模型,用于研究马的血管生成功能。【方法】在无菌条件下,从马脐带中分离静脉,并用PBS液彻底冲洗。使用0.2%Ⅰ型胶原酶对脐静脉进行消化25~30 min后,收集分离的eUVECs进行培养。每12 h使用倒置显微镜观察eUVECs的生长状况。使用CCK-8法测定第1代(P1)和P3代eUVECs在7 d内的D450 nm值,并绘制生长曲线。通过免疫荧光染色方法鉴定内皮细胞标记物CD31和CD34的表达情况。使用间充质干细胞成脂和成骨分化诱导试剂诱导eUVECs,以验证其是否具有分化特性。确定内皮细胞后,添加梯度上升浓度(5、10、15、20、25 ng/mL)的肿瘤坏死因子-α(TNF-α)刺激eUVECs,使用CCK-8法检测细胞活性,观察细胞形态变化。使用Matrigel法培养eUVECs,用ImageJ软件分析数据,并统计新生血管的4个指标:成管交叉点、成管长度、成管数和成管面积。寻找体外血管生成能力的最佳TNF-α刺激浓度。【结果】使用0.2%Ⅰ型胶原酶消化法分离的eUVECs 4~5 d内的汇合度达到90%。在倒置显微镜下观察,这些细胞生长良好并呈铺路石状排列。通过免疫荧光染色确认了CD31和CD34在eUVECs中的阳性表达;并且eUVECs表现出薄弱的成脂和成骨分化能力。在Matrigel法培养条件下,20 ng/mL TNF-α处理组的成管交叉点数、成管长度、成管数和成管面积等血管形成能力指标最高,且极显著高于对照组(P<0.01)。然而,在常规培养条件下,随着TNF-α浓度增加到15 ng/mL,eUVECs的增殖受到显著抑制甚至开始导致细胞的凋亡。【结论】Ⅰ型胶原酶脐带注满消化法能够成功分离培养出原代eUVECs,20 ng/mL TNF-α显著增强eUVECs体外血管生成能力,eUVECs可以作为体外研究血管生成的细胞模型。
关键词
马
脐静脉内皮细胞
Ⅰ型胶原酶消化法
培养鉴定
TNF-α
血管新生
Keywords
horse
umbilical vein endothelial cells
typeⅠcollagenase digestion
culture identification
TNF-α
angiogenesis
分类号
S821.7 [农业科学—畜牧学]
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职称材料
题名
作者
出处
发文年
被引量
操作
1
马属动物克隆技术:从实验室到产业应用
刘琦
任宏
温鑫
才文道力玛
伊敏娜
赵比力格
斯琴
何千倩
格
日乐其木
格
《黑龙江动物繁殖》
2025
0
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职称材料
2
马脐静脉内皮细胞分离培养及其功能验证
赵比力格
温鑫
伊敏娜
才文道力玛
神英超
斯琴
照伦其其
格
任宏
芒来
格
日乐其木
格
《中国畜牧兽医》
CAS
CSCD
北大核心
2024
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