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猪轮状病毒胶体金检测试纸条的研制及应用 被引量:1
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作者 李妍花 周兵强 +11 位作者 康笃利 郝丽影 汪志艳 赵少若 黄甜 庞杏豪 刘俊阳 楚园园 张云静 高晓静 邓均华 田克恭 《中国畜牧兽医》 CAS CSCD 北大核心 2024年第3期1223-1231,共9页
【目的】利用2株猪轮状病毒(Porcine rotavirus,PoRV)单克隆抗体,研制胶体金检测试纸条,用于PoRV的临床快速检测。【方法】制备40 nm粒径的胶体金溶液标记单克隆抗体4G5,将单克隆抗体5G4和羊抗鼠IgG分别包被在硝酸纤维素膜上,作为检测... 【目的】利用2株猪轮状病毒(Porcine rotavirus,PoRV)单克隆抗体,研制胶体金检测试纸条,用于PoRV的临床快速检测。【方法】制备40 nm粒径的胶体金溶液标记单克隆抗体4G5,将单克隆抗体5G4和羊抗鼠IgG分别包被在硝酸纤维素膜上,作为检测线和质控线。通过优化胶体金溶液最适pH、标记抗体和检测抗体的最佳使用量,制备PoRV胶体金检测试纸条;对试纸条的灵敏度、敏感性、特异性、重复性和稳定性进行评价。通过检测50份猪粪便样品,计算试纸条与RT-PCR方法的符合率,最后采用试纸条进行1249份临床样品的测定。【结果】经优化后试纸条的最佳参数如下:胶体金溶液最佳pH为8.0,标记抗体4G5和检测抗体5G4最佳使用量分别为14.4μg/mL和1 mg/mL。试纸条能检测出1∶2000稀释的PoRV OSU株(G5型)病毒液,灵敏度为104.5TCID50/mL,且检测PoRV G9、G3和G4型毒株均为阳性。检测猪传染性胃肠炎病毒(Transmissible gastroenteritis virus,TGEV)、猪流行性腹泻病毒(Porcine epidemic diarrhea virus,PEDV)、猪δ冠状病毒(Porcine deltacoronavirus,PDCoV)、猪伪狂犬病病毒(Porcine pseudorabies virus,PRV)和猪圆环病毒2型(Porcine circovirus type 2,PCV2)均为阴性。批内和批间重复性、稳定性良好。检测50份猪粪便样品,与RT-PCR方法的阳性符合率为97.5%(39/40),阴性符合率为100%(10/10),总体符合率为98%(49/50)。检测2022年在河南、山西省猪场收集的临床样品1249份,阳性检出率为5.2%。【结论】本研究制备的PoRV胶体金检测试纸条具有良好的敏感性、特异性和重复性等优点,与RT-PCR方法的符合率较高,可用于规模化猪场PoRV的快速检测。 展开更多
关键词 猪轮状病毒(PoRV) 胶体金检测试纸条 快速检测
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原虫硫氧还蛋白还原酶研究进展 被引量:1
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作者 赵少若 周金林 《动物医学进展》 北大核心 2016年第3期86-90,共5页
硫氧还蛋白系统是原虫寄生于宿主细胞时抵抗氧化压力的一道重要防线,其中包括硫氧还蛋白(Trx)、硫氧还蛋白还原酶(TrxR)及NADPH。论文详细叙述了原虫TrxR的结构,从抗氧化应激和催化氧化还原活性两个方面介绍了TrxR的生物学活性与功能,... 硫氧还蛋白系统是原虫寄生于宿主细胞时抵抗氧化压力的一道重要防线,其中包括硫氧还蛋白(Trx)、硫氧还蛋白还原酶(TrxR)及NADPH。论文详细叙述了原虫TrxR的结构,从抗氧化应激和催化氧化还原活性两个方面介绍了TrxR的生物学活性与功能,并对其抑制剂的应用前景进行了总结。 展开更多
关键词 原虫 TrxR 结构与功能 抑制剂
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犬轮状病毒单克隆抗体制备及胶体金试纸条检测方法的建立 被引量:3
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作者 赵少若 黄甜 +6 位作者 郝丽影 吴洪超 汪志艳 崔宁宁 王亚玲 邓均华 田克恭 《中国畜牧兽医》 CAS 北大核心 2022年第11期4429-4437,共9页
【目的】研发犬轮状病毒(Canine ratavirus,CRV)免疫学诊断试剂,制备并鉴定CRV特异性单克隆抗体,建立可用于检测CRV的胶体金免疫层析法。【方法】以CRV临床分离株SL006株为免疫原免疫BALB/c雌性小鼠,用杂交瘤细胞法进行细胞融合,通过间... 【目的】研发犬轮状病毒(Canine ratavirus,CRV)免疫学诊断试剂,制备并鉴定CRV特异性单克隆抗体,建立可用于检测CRV的胶体金免疫层析法。【方法】以CRV临床分离株SL006株为免疫原免疫BALB/c雌性小鼠,用杂交瘤细胞法进行细胞融合,通过间接免疫荧光法(IFA)筛选可稳定分泌CRV单克隆抗体的杂交瘤细胞,并制备腹水,亲和层析法进行纯化获得单克隆抗体。对获得的单克隆抗体进行鉴定,经条件优化建立胶体金试纸条检测方法,对试纸条的灵敏度、特异性、重复性和应用情况进行评价。【结果】获得了4株杂交瘤细胞,分别命名为2C12、4A5、1H3、5F3,IFA效价分别为1∶6400、1∶12800、1∶1600和1∶3200;重链亚类分别为IgG2b、IgG2a、IgG1和IgG2a,轻链亚类均为kappa;制备的胶体金试纸条检测线包被单克隆抗体4A5,对照线包被羊抗鼠IgG,金标垫包被胶体金标记的单克隆抗体2C12,对CRV病毒液的检测灵敏度为10TCID/mL,检测犬源其他病毒犬细小病毒(Canine parvovirus,CPV)、犬副流感病毒(Canine parainfluenza virus,CPIV)、犬腺病毒Ⅰ型(Canine adenovirus-Ⅰ,CAV-Ⅰ)、CAV-Ⅱ、犬瘟热病毒(Canine distemper virus,CDV)病毒液及CRV阴性肛拭子和阴性粪便均为阴性;批内和批间重复性良好;利用制备的胶体金试纸条和RT-PCR方法对47份样品进行检测比较,两者符合率为93.6%。【结论】本研究建立的CRV胶体金试纸条检测方法具有良好的敏感性、特异性、重复性,与RT-PCR方法符合率较高,可为CRV的临床快速诊断提供有效的检测方法。 展开更多
关键词 犬轮状病毒(CRV) 单克隆抗体 胶体金试纸条
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非洲猪瘟病毒p62蛋白单克隆抗体的制备及初步应用 被引量:11
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作者 白晨雨 王同燕 +10 位作者 赵少若 王衡 郝丽影 李雪锋 白露露 邓跃 王孟月 邓均华 李向东 张桂红 田克恭 《畜牧兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2020年第5期1074-1082,共9页
为制备非洲猪瘟病毒(ASFV)p62蛋白的特异性单克隆抗体,并初步应用于感染组织样品中ASFV抗原的免疫组化(IHC)检测,本研究以杆状病毒表达的非洲猪瘟病毒重组p62蛋白免疫BALB/c小鼠,取其脾细胞与骨髓瘤细胞进行融合获得杂交瘤细胞。结果显... 为制备非洲猪瘟病毒(ASFV)p62蛋白的特异性单克隆抗体,并初步应用于感染组织样品中ASFV抗原的免疫组化(IHC)检测,本研究以杆状病毒表达的非洲猪瘟病毒重组p62蛋白免疫BALB/c小鼠,取其脾细胞与骨髓瘤细胞进行融合获得杂交瘤细胞。结果显示:基于纯化的p62蛋白建立的间接ELISA方法对杂交瘤细胞进行筛选和亚克隆,获得了18株可稳定分泌抗非洲猪瘟病毒p62蛋白单克隆抗体的杂交瘤细胞株。经IFA检测,制备的单克隆抗体均与非洲猪瘟病毒反应,且不与猪瘟病毒、猪繁殖与呼吸综合征病毒、猪伪狂犬病病毒、猪圆环病毒2型等猪源常见病毒反应,特异性良好。抗体识别蛋白的鉴定结果显示,3株MAbs识别p35蛋白,15株MAbs识别p15蛋白。14株MAbs重链亚类为IgG1型,4株MAbs重链亚类为IgG2a,轻链均为κ链。利用18株MAbs对ASFV感染猪的肺、扁桃体、淋巴结等组织进行IHC检测,结果显示5株MAbs均能够与感染ASFV的组织发生特异性的免疫反应。本研究获得的非洲猪瘟病毒p62蛋白单克隆抗体可为非洲猪瘟病毒免疫学检测方法的建立及p62蛋白的结构功能等基础研究提供重要的生物材料。 展开更多
关键词 非洲猪瘟病毒 p62蛋白 单克隆抗体 免疫组化
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