生物制品中支原体污染的快速检测 被引量：11

1

作者 应蓓蓓 陆诗华 +2 位作者 吴维寿 赵寿元 李昌本 《高技术通讯》 EI CAS CSCD 1999年第5期53-56,共4页

用两步ＰＣＲ法（ＮｅｓｔｅｄＰＣＲ）及ＤＮＡ荧光染色技术（ＨｏｅｃｈｓｔＳｔａｉｎｉｎｇ），检测了８１份不同来源和批号的疫苗及一些实验用细胞株中的支原体，并对检测结果做了比较。ＰＣＲ阳性检出率为３８．３％，Ｈｏｅｃｈ... 用两步ＰＣＲ法（ＮｅｓｔｅｄＰＣＲ）及ＤＮＡ荧光染色技术（ＨｏｅｃｈｓｔＳｔａｉｎｉｎｇ），检测了８１份不同来源和批号的疫苗及一些实验用细胞株中的支原体，并对检测结果做了比较。ＰＣＲ阳性检出率为３８．３％，Ｈｏｅｃｈｓｔ阳性检出率为１９％。这些结果表明ＰＣＲ法较Ｈｏｅｃｈｓｔ染色法更敏感。 展开更多

关键词 支原体污染 NestedPCR DNA荧光染色法 生物制品

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单向锚定 PCR 富集扩增在克隆低丰度基因转录本中的应用 被引量：3

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作者 郑其平 余龙 +5 位作者 姜春玲 张宏来 毕安定 赵勇 庚镇城 赵寿元 《高技术通讯》 EI CAS CSCD 1998年第10期40-44,共5页

利用国际生物信息资源，通过计算机检索寻找与已知功能基因具有高度同源的ＥＳＴｓ，据此设计特异的ＰＣＲ扩增引物，并通过单侧特异引物搭配ｃＤＮＡ分子库载体引物（锚定引物），在低严紧条件下扩增各种组织的ｃＤＮＡ分子库以富集目... 利用国际生物信息资源，通过计算机检索寻找与已知功能基因具有高度同源的ＥＳＴｓ，据此设计特异的ＰＣＲ扩增引物，并通过单侧特异引物搭配ｃＤＮＡ分子库载体引物（锚定引物），在低严紧条件下扩增各种组织的ｃＤＮＡ分子库以富集目标片段。继以单向锚定ＰＣＲ扩增产物为模板，用双侧特异引物再次扩增，获得的特异扩增ＰＣＲ产物经测序证实之后，将其用作探针杂交筛选相应的ｃＤＮＡ文库并进而克隆目的基因的全长ｃＤ－ＮＡ。此方法用于三个人类新基因的全长ｃＤＮＡ的分离与克隆，结果全部获得成功。这三个人类新基因分别是Ｈ－ＲａｌＧＤＳ基因、Ｈ－ＣＩＳ基因和Ｈ－Ｓ６ＰＫ基因，它们在ＧｅｎＢａｎｋ数据库的登录号分别是：ＡＦ０２７１６９、ＡＦ０３５９４６及ＡＦ０３７４４７。本文结果提示这一方法对于应用现有的人类基因组生物信息资源，克隆具有重要生物学功能的人类新基因，尤其是克隆呈低丰度的基因转录本全长序列具有较高的实用价值。 展开更多

关键词 基因克隆 锚定PCR 低丰度转录本 扩增引物

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抑制PCR技术及其在基因分析中的应用 被引量：5

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作者 周炜 赵寿元 李昌本 《高技术通讯》 EI CAS CSCD 1999年第1期55-59,12,共6页

介绍了ＰＣＲ技术在基因组走步、寻找基因旁侧序列、从总ＲＮＡ构建ｃＤＮＡ文库、分析样本间共同序列、构建均等化（ｎｏｒｍａｌｉｚｅｄ）ｃＤＮＡ文库、构建差异表达的ｃＤＮＡ文库中的应用。

关键词 抑制PCR技术 PCR 基因组 基因分析

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用Alu－VectorettePCR方法从酵母人工染色体末端分离人基因组单拷贝片段 被引量：1

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作者 韩顺生 余龙 +1 位作者 邓余 赵寿元 《高技术通讯》 CAS CSCD 1995年第3期40-43,共4页

分离和克隆ＹＡＣ插入片段的末端顺序是构建ＹＡＣ重叠群的重要手段之一，我们采用Ａｌｕ载体（Ａｌｕ－ｖｅｃｔｏｒｅｔｔｅ）ＰＣＲ方法成功地从含人淀粉样蛋白前体（ＡＰＰ）基因的法国人类多态研究中心（ＣＥＰＨ，Ｃｅｎｔｒｅｄ... 分离和克隆ＹＡＣ插入片段的末端顺序是构建ＹＡＣ重叠群的重要手段之一，我们采用Ａｌｕ载体（Ａｌｕ－ｖｅｃｔｏｒｅｔｔｅ）ＰＣＲ方法成功地从含人淀粉样蛋白前体（ＡＰＰ）基因的法国人类多态研究中心（ＣＥＰＨ，Ｃｅｎｔｒｅｄ＇ＥｔｕｄｅｄｕＰｏｌｙｍｏｒｐｈｉｓｍｅＨｕｍａｎ）ＹＡＣ克隆５９９Ｇ１１的未端分离到一个０．５８ｋｂ的单拷贝片段。测序后经核普酸顺序检索分析，证明这是一个新的ＳＴＳ顺序。用这个片段作探针，在英国肿瘤研究基金会（ＩＣＲＦ）的ＹＡＣ库中筛选到一个新的ＹＡＣ克隆，证明这是获得ｃｏｎｔｉｇ的有效而快捷的方法。 展开更多

关键词 YAC 未端克隆 PCR 聚合酶链反应 基因组

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海上废弃桩基平台导管架拆除方法初探 被引量：5

5

作者 李美求 段梦兰 赵寿元 《石油矿场机械》 2008年第12期1-3,共3页

为做好导管架拆除的前期技术储备,综合国内外废弃桩基平台拆除的发展状况,初步探讨了废弃桩基平台导管架拆除的要求和方法。建立了导管架三维模型,运用有限元方法分析了导管架切割、吊装过程中的稳定性和强度,为指导导管架拆除提供理论... 为做好导管架拆除的前期技术储备,综合国内外废弃桩基平台拆除的发展状况,初步探讨了废弃桩基平台导管架拆除的要求和方法。建立了导管架三维模型,运用有限元方法分析了导管架切割、吊装过程中的稳定性和强度,为指导导管架拆除提供理论参考依据。 展开更多

关键词 桩基平台 退役 拆除 导管架

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人类神经元蛋白 P17.3 全长 cDNA 的克隆及表达特征分析

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作者 崔映宇 余龙 +5 位作者 龚若沫 张民 范玉新 傅强 岳鹏 赵寿元 《高技术通讯》 EI CAS CSCD 1998年第12期1-6,共6页

从人胎脑ｃＤＮＡ文库分离到一个长５９５ｂｐ的ｃＤＮＡ，它含一个编码１５３个氨基酸的完整开放阅读框，５ＵＴＲ长１８ｂｐ，３ＵＴＲ长１１８ｂｐ；在３ＵＴＲ中，含有非典型的加尾信号序列“ＡＡＴＴＡＡＡ”和长１５ｂｐ的... 从人胎脑ｃＤＮＡ文库分离到一个长５９５ｂｐ的ｃＤＮＡ，它含一个编码１５３个氨基酸的完整开放阅读框，５ＵＴＲ长１８ｂｐ，３ＵＴＲ长１１８ｂｐ；在３ＵＴＲ中，含有非典型的加尾信号序列“ＡＡＴＴＡＡＡ”和长１５ｂｐ的ｐｏｌｙＡ序列。由阅读框推导的编码蛋白质的分子量为１７．３ＫＤ，等电点为４．８９。由于它与小鼠神经元蛋白ＮＰ１５．６呈高度同源，尤其是二者的推导氨基酸序列一致性高达８１．２％，故将这一新ｃＤＮＡ序列推导的蛋白命名为神经元蛋白Ｐ１７．３。用ＰＣＧＥＮＥ软件包的ＧＧＢＳＭ程序推导该蛋白质的二级结构，发现该蛋白中３２．６％的氨基酸参与组成α螺旋结构，１５．０％的氨基酸参与组成β折叠片；用位点检测分析软件的ＰＥＳＴＦＩＮＤ程序分析，发现它的第４８～６８位氨基酸残基区为快速衰变蛋白特征性的“ＰＥＳＴ”结构域。 展开更多

关键词 人胎脑 神经元蛋白 P17.3 CDNA 克隆

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一个编码XAP2同源蛋白的人视网膜cDNA的克隆

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作者 王小柯 余龙 +4 位作者 傅强 张民 屠强 胡培蓉 赵寿元 《高技术通讯》 EI CAS CSCD 1999年第6期1-7,共7页

用同源筛选法从人视网膜ｃＤＮＡ分子库中克隆到一个与ＸＡＰ２ｃＤＮＡ有高度同源的ｃＤＮＡ序列，长１３８６ｂｐ，其第１７—１１７１ｎｔ为一个完整的开放阅读框（ＯＲＦ），编码３８４个氨基酸，其Ｃ端较ＸＡＰ２长５５个氨基酸；... 用同源筛选法从人视网膜ｃＤＮＡ分子库中克隆到一个与ＸＡＰ２ｃＤＮＡ有高度同源的ｃＤＮＡ序列，长１３８６ｂｐ，其第１７—１１７１ｎｔ为一个完整的开放阅读框（ＯＲＦ），编码３８４个氨基酸，其Ｃ端较ＸＡＰ２长５５个氨基酸；３ＵＴＲ长２１８ｂｐ，１３５５—１３６０ｎｔ为加尾信号序列ＡＡＴＡＡＡ，１３７７—１３８６ｎｔ为ＰｏｌｙＡ序列。由该ｃＤＮＡＯＲＦ推导的蛋白质被命名为ＡＩＰＨ，它在ＧｅｎＢａｎｋ的登录号为：ＡＦ０３８４３７。它与ＸＡＰ２的氨基酸一致率为４２％，相似率为６１．７％。计算机分析结果显示：推导的ＡＩＰＨ蛋白与乙肝病毒Ｘ蛋白（ＨＢＸ）有三个较高同源的区域。其中两个对应于ＨＢＸ的反式转录激活功能结构域。ＡＩＰＨｃＤＮＡ与人体１６种组织ｍＲＮＡ的Ｎｏｒｔｈｅｒｎ杂交结果显示：这个来源于视网膜的转录本也可在骨骼肌和心脏中见到，杂交带长度约１．９Ｋｂ；此外在骨骼肌和心脏及其它１４种组织中还可见到另一个长约５． 展开更多

关键词 AIPH HBX XPA2 CDNA 克隆 视网膜

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核磁共振研究人肿瘤坏死因子α衍生物a(hTNF α Da)的变性过程

8

作者 戴林森 林丽珠 +6 位作者 王力平 吴泰琉 李昌本 赵寿元 徐静 斐劳霞飞 吴厚铭 《分析测试学报》 CAS CSCD 1998年第4期8-11,共4页

用Ｂｒｕｋｅｒ公司的ＡＭ－６００和ＭＳＬ－３００核磁共振波谱仪分别做了天然态和在不同浓度尿素作用下人肿瘤坏死因子α衍生物ａ（ｈＴＮＦαＤａ）的质子核磁共振实验。发现在尿素的作用下，ｈＴＮＦαＤａ的结构发生了变化，当尿... 用Ｂｒｕｋｅｒ公司的ＡＭ－６００和ＭＳＬ－３００核磁共振波谱仪分别做了天然态和在不同浓度尿素作用下人肿瘤坏死因子α衍生物ａ（ｈＴＮＦαＤａ）的质子核磁共振实验。发现在尿素的作用下，ｈＴＮＦαＤａ的结构发生了变化，当尿素浓度增加到４～６ｍｏｌ／Ｌ时，ｈＴＮＦαＤａ逐渐解聚为单体和无规线团。 展开更多

关键词 人肿瘤坏死因子 衍生物 NMR 变性 hTNFαDa

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用Bubble　PCR法对一个新的锌指基因进行外显子划界

9

作者 张民 余龙 +3 位作者 胡培蓉 施少林 邢郡 赵寿元 《高技术通讯》 EI CAS CSCD 1997年第11期1-6,共6页

介绍了一种确定基因外显子一内含子交界点的快速、准确的方法，应用该方法对本室克隆的一个新的锌指基因ZNF191进行了外显子划界。将含有ZNF191全长CDNA的基因组DNA经限制酶酶切后与退火的Bubblelinker连接，以该连接产物为模板，用依据... 介绍了一种确定基因外显子一内含子交界点的快速、准确的方法，应用该方法对本室克隆的一个新的锌指基因ZNF191进行了外显子划界。将含有ZNF191全长CDNA的基因组DNA经限制酶酶切后与退火的Bubblelinker连接，以该连接产物为模板，用依据cDNA序列设计的引物和Bubblelinker上的特异引物进行PCR扩增，继以相同的扩增条件对扩增产物进行测序，从而确定了外显子－内含子的交界点。结果确认出ZNF191基因由4个外显子和3个内含子组成，这一结论为后来完成的ZNF191基因的全长测序结果所证实。 展开更多

关键词 BUBBLE PCR 外显子划界 锌指基因 克隆技术

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表达人白细胞介素-2的重组腺病毒的制备

10

作者 徐人尔 应蓓蓓 +2 位作者 王义斌 赵寿元 李昌本 《高技术通讯》 EI CAS CSCD 1997年第1期15-18,共4页

携带人白细胞介素-2（interleukin－2，IL－2）cDNA序列的E1区缺陷的腺病毒载体pAdl2／RSV－IL2－bpA与pJM17质粒，通过磷酸钙沉淀法共转染293细胞，经同源重组，获得了一个腺病毒噬斑。抽提腺病毒DNA，运用PCR扩增及XbaI酶切检测，证... 携带人白细胞介素-2（interleukin－2，IL－2）cDNA序列的E1区缺陷的腺病毒载体pAdl2／RSV－IL2－bpA与pJM17质粒，通过磷酸钙沉淀法共转染293细胞，经同源重组，获得了一个腺病毒噬斑。抽提腺病毒DNA，运用PCR扩增及XbaI酶切检测，证实这一噬斑为带有人IL－2cNDA序列的重组腺病毒。受其感染的293细胞和人黑素瘤A375细胞上清中，都能够测出IL－2的活性，表明制备的重组腺病毒是能表达人IL－2的，可进一步用于恶性肿瘤的基因治疗。 展开更多

关键词 人白细胞介素-2 腺病毒 重组体

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从YAC　DNA制备荧光原位杂交探针的新方法

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作者 韩顺生 余龙 +3 位作者 黄浩杰 徐璐 李学义 赵寿元 《高技术通讯》 CAS CSCD 1996年第12期38-41,共4页

介绍了一种新的ＹＡＣ　ＤＮＡ的回收方法。该方法先用脉冲电泳分离并回收ＹＡＣ条带，然后连接引物用ＰＣＲ扩增ＹＡＣＤＮＡ。这一方法回收的ＹＡＣＤＮＡ一是量多，节省制备探针的时间；二是产物总的染色体跨度大，有利于染色体原位... 介绍了一种新的ＹＡＣ　ＤＮＡ的回收方法。该方法先用脉冲电泳分离并回收ＹＡＣ条带，然后连接引物用ＰＣＲ扩增ＹＡＣＤＮＡ。这一方法回收的ＹＡＣＤＮＡ一是量多，节省制备探针的时间；二是产物总的染色体跨度大，有利于染色体原位杂交。经ＦＩＳＨ（荧光原位杂交）鉴定证明该方法得到的ＹＡＣＤＮＡ对ＹＡＣ的定位和嵌合的鉴定非常有效。 展开更多

关键词 基因 酵母人工染色体 荧光杂交探针 制图

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人淋巴毒素基因5′端上游NF-κB类因子特异性结合位点的研究

12

作者 徐人尔 赵寿元 《高技术通讯》 EI CAS CSCD 1993年第4期13-16,共4页

关键词 淋巴毒素 基因 蛋白 淋巴因子

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抑制消减杂交法分离血管内皮细胞中表达的TNFα相关基因 被引量：2

13

作者 周炜 王光清 +5 位作者 肖靖 喻红 林丽珠 赵强 赵寿元 李昌本 《高技术通讯》 EI CAS CSCD 2000年第3期9-11,共3页

介绍使用快速而高效地分离差别表达基因的新方法———抑制消减杂交法 ,克隆了在TNFα作用后血管内皮细胞中的差异表达cDNA。经反向Northern杂交试验证实。为进一步研究血管内皮细胞中表达的TNFα作用相关基因打下基础。

关键词 抑制消减杂交 TNFΑ 血管内皮细胞 NORTHERN杂交

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人肿瘤坏死因子衍生物cDNA的构建及其在大肠杆菌中的表达 被引量：1

14

作者 蔡武城 何晓龙 +5 位作者 常金丽 吕群 喻红 陆惠萍 李昌本 赵寿元 《高技术通讯》 EI CAS CSCD 1993年第7期13-16,共4页

关键词 衍生物 聚合酶 链反应 肿瘤

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应用带HSV－TK基因的重组腺病毒的肺癌基因治疗的研究 被引量：1

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作者 耿雨红 吴昊泉 +4 位作者 应蓓蓓 徐人尔 王义斌 赵寿元 李昌本 《高技术通讯》 CAS CSCD 1996年第12期46-49,共4页

带有单纯疱疹病毒脱氧胸苷激酶基因（ＨＳＶ－ｔｋ）的腺病毒结合ｇａｎｃｉｃｌｏｖｉｒ（ＧＣＶ）对分裂细胞有很强的杀伤作用。本文报道在感染复数（Ｍ．Ｏ．Ｉ，ＭｕｌｔｉＰｌｉｃｉｔｙｏｆＩｎｆｅｃｔｉｏｎ）达到１０００时对... 带有单纯疱疹病毒脱氧胸苷激酶基因（ＨＳＶ－ｔｋ）的腺病毒结合ｇａｎｃｉｃｌｏｖｉｒ（ＧＣＶ）对分裂细胞有很强的杀伤作用。本文报道在感染复数（Ｍ．Ｏ．Ｉ，ＭｕｌｔｉＰｌｉｃｉｔｙｏｆＩｎｆｅｃｔｉｏｎ）达到１０００时对人体肺腺癌细胞Ａ５４９的杀伤几乎达到回１００％。四种人体肺癌细胞株（Ａ５４９，ＬＡＸ，ＳＰＣ，ＳＫＹ）对带ＨＳＶ－ｔｋ的腺病毒（ＡＤＶ／ＲＳＶ－ｔＫ）的杀伤作用表现不同的敏感性。另外，Ａｃｙｃｌｏｖｉｒ（ＡＣＶ）和ＧＣＶ对感染了重组腺病毒ＡＤＶ／ＲＳＶ－ｔＫ的细胞都有一定杀伤作用，但杀伤效果有很大差别；就Ａ５４９而言，ＧＣＶ的杀伤作用比ＡＣＶ高７—８倍。此外ＡＤＶ／ＲＳＶ－ｔｋ结合ＧＣＶ杀伤肿瘤细胞时有“旁观者效应”，即感染了ＡＤＶ／ＲＳＶ－ｔｋ的细胞与未感染细胞混合后，后者也明显地遭到杀伤。 展开更多

关键词 腺病毒 HSV-TK基因 肺癌

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表观遗传学的形成和发展 被引量：2

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作者 杨慧蓉 赵寿元 《解剖学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2007年第4期389-391,共3页

关键词 表观遗传学 遗传变异 分支学科

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带HSV-tk基因的重组腺病毒治疗小鼠实体瘤的研究

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作者 耿雨红 孟德鸣 +6 位作者 吴昊泉 应蓓蓓 徐人尔 刘全海 王义斌 赵寿元 李昌本 《高技术通讯》 EI CAS CSCD 1997年第10期44-47,共4页

在完成一系列离体实验川的基础上进一步进行了活体研究，离体实验表明，小鼠肉瘤细胞5180在感染重组腺病毒ADV／RSV－tk后对GCV的处理显示出致死敏感性。因4L以S180肿瘤细胞进行活体实验，小鼠腋下接种3×106S180细胞，当能触摸到... 在完成一系列离体实验川的基础上进一步进行了活体研究，离体实验表明，小鼠肉瘤细胞5180在感染重组腺病毒ADV／RSV－tk后对GCV的处理显示出致死敏感性。因4L以S180肿瘤细胞进行活体实验，小鼠腋下接种3×106S180细胞，当能触摸到瘤块时在瘤内注入ADV／RSV－tk，并腹腔注射GCV连续五天；种瘤后10天杀死小鼠剥离瘤块称重，治疗组瘤重为对照组的1／14。实验结果表明，以腺病毒为载体介导HSV－tk基因结合GCV作用对肿瘤细胞有强杀伤性，是有应用前景的肿瘤基因治疗的一种疗法。 展开更多

关键词 肿瘤 基因治疗 腺病毒 HSV-TK基因 GCV

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新疆棉包崩丝原因探讨及对策

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作者 赵念普 赵寿元 马跃 《中国棉花加工》 1998年第5期3-4,共2页

关键词 新疆棉包 崩包断丝 原因 质量控制 打包技术

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加强管理广开门路　转变观念走出因境

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作者 赵念普 杨金瑞 赵寿元 《中国棉花加工》 1998年第2期3-4,共2页

关键词 棉麻公司 新疆棉花 经营管理 生产规模 科技含量

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