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软腐病菌Dickeya fangzhongdai Onc5菌株vfmH和vfmI基因的克隆、原核表达及蛋白纯化
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作者 王文婷 张晨燕 +3 位作者 赵可冉 丁建华 荆恩荣 杨超 《福建农林大学学报(自然科学版)》 北大核心 2025年第4期447-454,共8页
【目的】双组分系统VfmH/VfmI与Dickeya属病原菌的致病因子和致病过程有关。研究D.fangzhongdai Onc5菌株vfmH和vfmI基因的克隆、原核表达及蛋白纯化,为明确VfmH/VfmI的调控机理提供依据。【方法】采用RT-PCR方法扩增D.fangzhongdai Onc... 【目的】双组分系统VfmH/VfmI与Dickeya属病原菌的致病因子和致病过程有关。研究D.fangzhongdai Onc5菌株vfmH和vfmI基因的克隆、原核表达及蛋白纯化,为明确VfmH/VfmI的调控机理提供依据。【方法】采用RT-PCR方法扩增D.fangzhongdai Onc5菌株,获取vfmH和vfmI基因开放阅读框(ORF)。随后将目的基因克隆至原核表达质粒pET-32a,构建重组质粒pET-32a-VfmH和pET-32a-VfmI,经异丙基-β-D-硫代半乳糖苷(IPTG)诱导表达后,利用SDS-PAGE和Western blot鉴定重组蛋白,并利用Ni^(2+)-NTA琼脂糖亲和层析柱对重组蛋白进行纯化。【结果】D.fangzhongdai Onc5菌株vfmH和vfmI的ORF大小分别为1401 bp和1320 bp,分别编码466个和439个氨基酸;同源性分析表明,其氨基酸序列与Dickeya属其他菌种的vfmH和vfmI序列具有很高的相似性;SDS-PAGE和Western blot鉴定结果表明,添加0.5 mmol·L^(-1)IPTG,可诱导重组质粒pET-32a-VfmH转化株和pET-32a-VfmI转化株表达产生大量携带His-tag的融合重组蛋白;同时,成功纯化出目的蛋白。【结论】首次克隆出D.fangzhongdai中双组分系统基因vfmH和vfmI,并成功纯化出VfmH和VfmI蛋白。 展开更多
关键词 软腐病 双组分系统 狄克氏菌 vfmH基因 vfmI基因 原核表达
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