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犬新孢子虫NcSRS2基因真核表达质粒的构建 被引量:3
1
作者 赵占中 刘群 汪明 《畜牧兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2005年第8期819-822,共4页
根据犬新孢子虫NcSRS2基因序列,设计了1对含有Kozak序列、PstⅠ和XbaⅠ酶切位点的引物,以含有NcSRS2基因的质粒P43为模板,经PCR扩增获得NcSRS2ORF基因片段,用PstⅠ和XbaⅠ双酶切该片段,回收得到含有以上2个酶切位点黏端的NcSR2ORF基因,... 根据犬新孢子虫NcSRS2基因序列,设计了1对含有Kozak序列、PstⅠ和XbaⅠ酶切位点的引物,以含有NcSRS2基因的质粒P43为模板,经PCR扩增获得NcSRS2ORF基因片段,用PstⅠ和XbaⅠ双酶切该片段,回收得到含有以上2个酶切位点黏端的NcSR2ORF基因,将此基因片段克隆至相同酶切回收后的pcDNA3.1(+)真核表达载体中,获得重组质粒pcNCSRS2。经PCR鉴定、限制性内切酶分析和克隆片段序列测定、比较,证实了重组质粒的正确性。 展开更多
关键词 犬新孢子虫 聚合酶链反应 NCSRS2基因 真核表达载体pcDNA3.1(+)
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蹄叶炎:毒素、组织胺与代谢紊乱 被引量:6
2
作者 赵占中 刘群 《中国草食动物》 2004年第4期29-30,共2页
关键词 蹄叶炎 病因 毒素 组织胺 代谢紊乱
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蹄叶炎:毒素、组织胺与代谢紊乱 被引量:1
3
作者 赵占中 刘群 《浙江畜牧兽医》 2004年第2期10-11,共2页
关键词 蹄叶炎 毒素 组织胺 代谢紊乱 病理变化 病因 家畜
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小反刍兽疫病毒H基因在杆状病毒中的表达及其免疫原性研究 被引量:5
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作者 隋修锟 金红岩 +4 位作者 李文超 史利军 赵占中 梁琳 李刚 《畜牧兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2014年第6期974-980,共7页
为表达小反刍兽疫病毒(PPRV)H蛋白,并探讨其免疫原性,通过RT-PCR克隆PPRV Nigeria75/1毒株H基因,将其克隆至供体质粒pFB-LIC-Bse中,测序验证后将重组质粒pFB-LIC-Bse-PPRV-H转化至DH10Bac感受态细胞中,经同源重组获得重组杆状病毒穿梭质... 为表达小反刍兽疫病毒(PPRV)H蛋白,并探讨其免疫原性,通过RT-PCR克隆PPRV Nigeria75/1毒株H基因,将其克隆至供体质粒pFB-LIC-Bse中,测序验证后将重组质粒pFB-LIC-Bse-PPRV-H转化至DH10Bac感受态细胞中,经同源重组获得重组杆状病毒穿梭质粒bacmid-PPRV-H,将其转染昆虫细胞sf21获得含有PPRV H基因的重组杆状病毒。采用SDS-PAGE、Western blot、IFA及小鼠免疫试验鉴定表达产物的反应原性及免疫原性。结果表明,在杆状病毒表达系统中表达的PPRV H蛋白能与His-tag单克隆抗体及PPRV阳性血清发生特异性反应,其相对分子质量为68ku;表达产物接种小鼠可诱导其产生特异性抗体和抗小反刍兽疫病毒中和抗体,淋巴细胞增殖试验检测结果表明重组杆状病毒rBacmid-H能与相应抗体和致敏的效应淋巴细胞发生较强的特异性反应。本试验获得的重组杆状病毒表达的PPRV H蛋白具有良好的免疫原性及反应原性,可诱导小鼠产生保护性中和抗体,该试验为进一步开发小反刍兽疫亚单位疫苗奠定了基础。 展开更多
关键词 小反刍兽疫病毒 H蛋白 杆状病毒表达系统 免疫性检测
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生物模板法合成铁钴纳米材料的研究 被引量:1
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作者 谢银德 侯保森 +2 位作者 赵占中 张冰 赵霞 《郑州大学学报(工学版)》 CAS 北大核心 2015年第6期34-37,共4页
采用脱铁铁蛋白为生物模板,以硝酸钴和硫酸亚铁铵为原材料,利用硼氢化钠为还原剂合成了蛋白质包覆的铁钴纳米材料,并通过透射电子显微镜、EDS能谱分析、电子衍射和紫外光谱分析对制得的样品进行了表征.实验结果表明,采用脱铁铁蛋白生物... 采用脱铁铁蛋白为生物模板,以硝酸钴和硫酸亚铁铵为原材料,利用硼氢化钠为还原剂合成了蛋白质包覆的铁钴纳米材料,并通过透射电子显微镜、EDS能谱分析、电子衍射和紫外光谱分析对制得的样品进行了表征.实验结果表明,采用脱铁铁蛋白生物模板制备的铁钴复合纳米颗粒为无定型的非晶体,具有高度的单分散性,其直径大约为5~7 nm,粒径分布较为均匀,且研究结果进一步表明了脱铁铁蛋白是一种良好的制备纳米材料的模板. 展开更多
关键词 脱铁铁蛋白 生物模板 铁钴 纳米颗粒
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犬瘟热病毒截短P蛋白单克隆抗体的制备与鉴定 被引量:1
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作者 袁维峰 贾红 +5 位作者 于萍萍 侯绍华 郭晓宇 史利军 赵占中 朱鸿飞 《中国畜牧兽医》 CAS 北大核心 2013年第4期22-25,共4页
为制备针对犬瘟热病毒(canine distemper virus,CDV)P1蛋白的单克隆抗体(McAb),本研究利用重组犬瘟热病毒P1蛋白免疫BALB/c小鼠,并将其脾淋巴细胞与SP2/0进行融合,用CDV包被ELISA板,通过间接ELISA法筛选出两株稳定分泌抗CDV-P1的杂交瘤... 为制备针对犬瘟热病毒(canine distemper virus,CDV)P1蛋白的单克隆抗体(McAb),本研究利用重组犬瘟热病毒P1蛋白免疫BALB/c小鼠,并将其脾淋巴细胞与SP2/0进行融合,用CDV包被ELISA板,通过间接ELISA法筛选出两株稳定分泌抗CDV-P1的杂交瘤细胞株(E9E4C10、E9F8D9)。间接ELISA检测腹水效价均为1∶106,亚类鉴定结果均为IgG2b。Western blotting和间接免疫荧光(IFA)分析结果表明,两株单克隆抗体均能与重组P1蛋白和CDV发生反应;ELISA叠加试验增殖结果表明,两株单克隆抗体识别的抗原表位不同。本研究制备的特异性抗CDV-P1的单克隆抗体为建立CDV免疫学检测方法和P蛋白的功能研究奠定了基础。 展开更多
关键词 犬瘟热病毒 重组P蛋白 单克隆抗体 鉴定
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两广部分地区仔猪腹泻死亡的流行病学调查 被引量:2
7
作者 罗亚坤 练斯南 +5 位作者 蔺文成 梁琳 史利军 赵占中 白挨泉 崔尚金 《养猪》 2016年第1期101-104,共4页
研究旨在分析广东、广西地区2015年1—10月份腹泻仔猪群中猪流行性腹泻病毒(PEDV)、猪伪狂犬病病毒(PRV)发病情况和流行特征,以便为今后的防控提供理论数据。分别采用RT-PCR检测PEDV、用Nano PCR方法检测PRV,对2015年1—10月份广东、广... 研究旨在分析广东、广西地区2015年1—10月份腹泻仔猪群中猪流行性腹泻病毒(PEDV)、猪伪狂犬病病毒(PRV)发病情况和流行特征,以便为今后的防控提供理论数据。分别采用RT-PCR检测PEDV、用Nano PCR方法检测PRV,对2015年1—10月份广东、广西地区7个地市临床送检的56份组织样品(包括心、肝、脾、肺、肾、淋巴等,其中有35份含有小肠样品)进行病原核酸检测。病原核酸检测结果显示:PEDV的阳性率为14.28%,PRV的阳性率为53.6%;PEDV与PRV混合感染率为8.57%。对PEDV阳性样品的S1基因进行遗传进化分析,结果显示,研究获得PEDV阳性样品的S1基因与2015年广东分离的CH-HGC-01-2015的亲缘关系较近。由此可见,广东、广西地区PRV发病率较高,PEDV的发展呈新的流行态势,并且存在PEDV和PRV的混合感染。 展开更多
关键词 猪病流行性腹泻病毒 猪伪狂犬病病毒 流行病学调查 克隆 序列分析
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基于狂犬病病毒重组蛋白的ELISA检测方法比较研究
8
作者 程朝飞 宫苗苗 +4 位作者 田康乐 王勇 赵占中 史利军 李刚 《畜牧兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2012年第12期1925-1930,共6页
原核表达狂犬病病毒的基质蛋白(M),并以此作为包被抗原建立间接ELISA检测方法,与以狂犬病病毒磷蛋白(P)作为包被抗原建立的间接ELISA方法进行比较。根据GenBank中公布的狂犬病病毒LEP-Flury株M基因序列设计特异性引物并引入SmaⅠ和Not... 原核表达狂犬病病毒的基质蛋白(M),并以此作为包被抗原建立间接ELISA检测方法,与以狂犬病病毒磷蛋白(P)作为包被抗原建立的间接ELISA方法进行比较。根据GenBank中公布的狂犬病病毒LEP-Flury株M基因序列设计特异性引物并引入SmaⅠ和NotⅠ酶切位点,经RT-PCR扩增得到目的基因,连接pCR 2.1载体,构建重组质粒pCR-RV-M,重组质粒用SmaⅠ和NotⅠ进行双酶切,酶切产物定向克隆至原核表达载体pGEX-6P-1中,构建重组表达载体pGEX-RV-M。将重组表达载体转化E.coli BL21(DE3)感受态细胞,使用IPTG诱导表达目的蛋白,SDS-PAGE分析表明蛋白表达量较大,且主要以可溶性的形式表达。亲和层析纯化目的蛋白,Westernblot表明融合蛋白具有良好的反应原性,使用纯化的融合蛋白作为包被抗原建立了间接ELISA方法并检测了95份血清,同时使用带有His标签的重组狂犬病病毒磷蛋白P(RV-His-P)建立的ELISA方法和商品化的ELISA试剂盒检测该血清。结果表明:与商品化的以全病毒作为包被抗原的ELISA检测试剂盒相比,使用重组P蛋白作为包被抗原建立的间接ELISA检测方法具有更高的符合率,能够代替全病毒作为诊断抗原建立检测方法。 展开更多
关键词 狂犬病病毒 基质蛋白M 原核表达 间接ELISA 磷蛋白P
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