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构建及鉴定携带角蛋白启动子和人乳头瘤病毒16E6/E7基因的重组腺病毒
被引量：
3
1
作者
潘巍巍
赖国旗
+6 位作者
易发平
成海恩
张溢
左国伟
李成华
马永平
宋方洲
《西安交通大学学报（医学版）》
CAS
CSCD
北大核心
2006年第5期421-425,共5页
目的利用AdEasy系统构建携带人角蛋白启动子的人乳头瘤病毒-16(HPV-16)E6/E7基因重组腺病毒,并通过RT-PCR方法检测E6/E7基因的表达。方法应用PCR方法从含有HPV-16全基因序列的质粒上扩增E6/E7基因,构建pCDNA3.1(-)-K14-E6/E7-polA载体,...
目的利用AdEasy系统构建携带人角蛋白启动子的人乳头瘤病毒-16(HPV-16)E6/E7基因重组腺病毒,并通过RT-PCR方法检测E6/E7基因的表达。方法应用PCR方法从含有HPV-16全基因序列的质粒上扩增E6/E7基因,构建pCDNA3.1(-)-K14-E6/E7-polA载体,扩增、酶切获得K14-E6/E7-polA片段插入腺病毒穿梭载体质粒pAdTrack上,构建重组穿梭载体pAdTrack-K14-E6/E7-polA,线性化后与骨架载体AdEasy-1在细菌BJ5183内同源重组得到腺病毒质粒pAd-K14-E6/E7-polA,经人胚肾293细胞包装后得到重组腺病毒pAd-K14-E6/E7-polA。氢化铯(CsCl)梯度离心纯化病毒,提取病毒再感染后的293细胞总RNA,通过RT-PCR方法检测E6/E7基因的表达。结果通过同源重组的方法构建了腺病毒pAd-K14-E6/E7-polA载体,经酶切和测序鉴定该质粒构建成功。293细胞包装3d后观察到绿色荧光蛋白(GFP)表达,CsCl梯度离心纯化最终获得7.2×1010pfu/mL滴度的重组病毒;用该滴度病毒重新感染293细胞3d后,提取细胞总RNA,RT-PCR检测E6/E7有表达。结论利用新型腺病毒载体AdEasy系统可在短期内制备同时表达GFP和E6/E7的重组腺病毒pAd-K14-E6/E7-polA。这将为进一步研究HPV-16E6/E7基因功能及利用基因治疗女性宫颈癌奠定了基础。
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关键词
人乳头瘤病毒
腺病毒
角蛋白启动子
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职称材料
医学院校实验动物学教学改革探讨
被引量：
7
2
作者
何明忠
谭毅
+2 位作者
赖国旗
王胜
潘永全
《西北医学教育》
2004年第5期422-423,共2页
实验动物学是高等医学教育的一门新兴基础课,教学改革成功与否直接关系到教学任务的完成、教学目标的实现和教学质量的提高.为推动实验动物学科的发展,培养合格的人才,教研室从教师队伍的培养、教学改革和学生创新能力培养等方面进行了...
实验动物学是高等医学教育的一门新兴基础课,教学改革成功与否直接关系到教学任务的完成、教学目标的实现和教学质量的提高.为推动实验动物学科的发展,培养合格的人才,教研室从教师队伍的培养、教学改革和学生创新能力培养等方面进行了一些探索.
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关键词
教学改革
培养
教师队伍
教研室
医学院校
教学任务
学生创新能力
实验动物学科
高等医学教育
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职称材料
不同营养水平日粮及添加剂对动物生长繁殖的影响
3
作者
潘永全
韦克
+2 位作者
谭毅
何明忠
赖国旗
《粮食与饲料工业》
CAS
北大核心
1998年第8期32-33,共2页
将不同蛋白水平日粮及添加剂应用于小鼠生长繁殖，并对其生长效果及繁殖情况进行观察研究。结果表明：１６．５０％蛋白日粮配合１％添加剂用于生长效果较佳，优于稍高蛋白日粮组，饲养成本最低；２０．４０％蛋白日粮用于繁殖生产可行...
将不同蛋白水平日粮及添加剂应用于小鼠生长繁殖，并对其生长效果及繁殖情况进行观察研究。结果表明：１６．５０％蛋白日粮配合１％添加剂用于生长效果较佳，优于稍高蛋白日粮组，饲养成本最低；２０．４０％蛋白日粮用于繁殖生产可行，配合添加剂应用可改善其生产性能。
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关键词
蛋白质
添加剂
动物
生长
繁殖
饲料
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职称材料
题名
构建及鉴定携带角蛋白启动子和人乳头瘤病毒16E6/E7基因的重组腺病毒
被引量：
3
1
作者
潘巍巍
赖国旗
易发平
成海恩
张溢
左国伟
李成华
马永平
宋方洲
机构
重庆医科大学生物化学与分子生物学教研室
重庆医科大学实验动物中心
出处
《西安交通大学学报（医学版）》
CAS
CSCD
北大核心
2006年第5期421-425,共5页
基金
国家自然科学基金资助项目(No.30371479)
教育部"春晖计划"资助项目(No.Z2004-1-55103)
文摘
目的利用AdEasy系统构建携带人角蛋白启动子的人乳头瘤病毒-16(HPV-16)E6/E7基因重组腺病毒,并通过RT-PCR方法检测E6/E7基因的表达。方法应用PCR方法从含有HPV-16全基因序列的质粒上扩增E6/E7基因,构建pCDNA3.1(-)-K14-E6/E7-polA载体,扩增、酶切获得K14-E6/E7-polA片段插入腺病毒穿梭载体质粒pAdTrack上,构建重组穿梭载体pAdTrack-K14-E6/E7-polA,线性化后与骨架载体AdEasy-1在细菌BJ5183内同源重组得到腺病毒质粒pAd-K14-E6/E7-polA,经人胚肾293细胞包装后得到重组腺病毒pAd-K14-E6/E7-polA。氢化铯(CsCl)梯度离心纯化病毒,提取病毒再感染后的293细胞总RNA,通过RT-PCR方法检测E6/E7基因的表达。结果通过同源重组的方法构建了腺病毒pAd-K14-E6/E7-polA载体,经酶切和测序鉴定该质粒构建成功。293细胞包装3d后观察到绿色荧光蛋白(GFP)表达,CsCl梯度离心纯化最终获得7.2×1010pfu/mL滴度的重组病毒;用该滴度病毒重新感染293细胞3d后,提取细胞总RNA,RT-PCR检测E6/E7有表达。结论利用新型腺病毒载体AdEasy系统可在短期内制备同时表达GFP和E6/E7的重组腺病毒pAd-K14-E6/E7-polA。这将为进一步研究HPV-16E6/E7基因功能及利用基因治疗女性宫颈癌奠定了基础。
关键词
人乳头瘤病毒
腺病毒
角蛋白启动子
Keywords
human papillomavirus
adenovirus
cytokeratin promoter
分类号
R373.39 [医药卫生—病原生物学]
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职称材料
题名
医学院校实验动物学教学改革探讨
被引量：
7
2
作者
何明忠
谭毅
赖国旗
王胜
潘永全
机构
重庆医科大学实验动物中心
出处
《西北医学教育》
2004年第5期422-423,共2页
文摘
实验动物学是高等医学教育的一门新兴基础课,教学改革成功与否直接关系到教学任务的完成、教学目标的实现和教学质量的提高.为推动实验动物学科的发展,培养合格的人才,教研室从教师队伍的培养、教学改革和学生创新能力培养等方面进行了一些探索.
关键词
教学改革
培养
教师队伍
教研室
医学院校
教学任务
学生创新能力
实验动物学科
高等医学教育
分类号
R37-4 [医药卫生—病原生物学]
R96-4 [医药卫生—药理学]
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职称材料
题名
不同营养水平日粮及添加剂对动物生长繁殖的影响
3
作者
潘永全
韦克
谭毅
何明忠
赖国旗
机构
重庆医科大学实验动物中心
出处
《粮食与饲料工业》
CAS
北大核心
1998年第8期32-33,共2页
基金
重庆市科委资助
文摘
将不同蛋白水平日粮及添加剂应用于小鼠生长繁殖，并对其生长效果及繁殖情况进行观察研究。结果表明：１６．５０％蛋白日粮配合１％添加剂用于生长效果较佳，优于稍高蛋白日粮组，饲养成本最低；２０．４０％蛋白日粮用于繁殖生产可行，配合添加剂应用可改善其生产性能。
关键词
蛋白质
添加剂
动物
生长
繁殖
饲料
Keywords
protein additive animal growth reproduction
分类号
S816.15 [农业科学—饲料科学]
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职称材料
题名
作者
出处
发文年
被引量
操作
1
构建及鉴定携带角蛋白启动子和人乳头瘤病毒16E6/E7基因的重组腺病毒
潘巍巍
赖国旗
易发平
成海恩
张溢
左国伟
李成华
马永平
宋方洲
《西安交通大学学报（医学版）》
CAS
CSCD
北大核心
2006
3
在线阅读
下载PDF
职称材料
2
医学院校实验动物学教学改革探讨
何明忠
谭毅
赖国旗
王胜
潘永全
《西北医学教育》
2004
7
在线阅读
下载PDF
职称材料
3
不同营养水平日粮及添加剂对动物生长繁殖的影响
潘永全
韦克
谭毅
何明忠
赖国旗
《粮食与饲料工业》
CAS
北大核心
1998
0
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职称材料
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