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犬细小病毒核酸疫苗、重组活载体疫苗与弱毒疫苗免疫犬实验研究 被引量:9
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作者 谢之景 杨松涛 +5 位作者 夏咸柱 闫芳 赵忠鹏 高玉伟 邹啸环 黄耕 《畜牧兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2008年第11期1562-1566,共5页
分别用犬细小病毒(CPV)核酸疫苗(pVCPV-VP2)、CPV重组活载体疫苗(CAV2/CPV)与CPV弱毒疫苗对犬进行了免疫试验,以检测不同CPV疫苗的免疫原性。采用CPV ELISA、CPV HI与CPV微量中和试验检测免疫犬的体液免疫水平,采用淋巴细胞转化试验检... 分别用犬细小病毒(CPV)核酸疫苗(pVCPV-VP2)、CPV重组活载体疫苗(CAV2/CPV)与CPV弱毒疫苗对犬进行了免疫试验,以检测不同CPV疫苗的免疫原性。采用CPV ELISA、CPV HI与CPV微量中和试验检测免疫犬的体液免疫水平,采用淋巴细胞转化试验检测犬的细胞免疫水平。结果,pVCPV-VP2和CAV2/CPV均能诱导机体产生抗CPV ELISA抗体与抗CPV中和抗体,但是pVCPV-VP2不能诱导机体产生可检测的抗CPV HI抗体,而CAV2/CPV能够诱导机体产生抗CPV HI抗体。淋巴细胞转化试验结果,pVCPV-VP2和CAV2/CPV免疫犬的外周血淋巴细胞对ConA与CPV的刺激均出现明显的增殖反应。结果表明,pVCPV-VP2和CAV2/CPV免疫犬均能诱导机体产生抗CPV的特异性体液免疫反应和细胞免疫反应,两者所表达的VP2蛋白均具有较好的免疫原性。CAV2/CPV以及pVCPV-VP2和CAV2/CPV联合免疫犬的抗CPV体液免疫水平和细胞免疫水平均比用pVCPV-VP2单独免疫犬的体液免疫水平和细胞免疫水平高。但CAV2/CPV诱导机体产生的抗CPV特异性免疫反应仍然比CPV弱毒疫苗诱导机体产生的抗CPV特异性免疫反应弱。另外,CAV2/CPV还能诱导机体产生抗CAV-2的特异性免疫反应。 展开更多
关键词 犬细小病毒 核酸疫苗 重组活载体疫苗
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犬细小病毒分离鉴定及其基因型调查的基础研究 被引量:12
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作者 谢之景 夏咸柱 +4 位作者 扈荣良 范泉水 叶俊华 徐在品 黄耕 《中国动物保健》 2003年第12期21-23,共3页
用F81细胞从不同地区送检的25份肠炎犬病料中分离出10株细小病毒,经形态学、理化学、生物学和分子病毒学等鉴定。结果这10株病毒均能在F81细胞上生长,产生细胞肿胀、变圆、破碎、脱落等细胞病变;病毒粒子呈立体对称,直径为20~24nm,无囊... 用F81细胞从不同地区送检的25份肠炎犬病料中分离出10株细小病毒,经形态学、理化学、生物学和分子病毒学等鉴定。结果这10株病毒均能在F81细胞上生长,产生细胞肿胀、变圆、破碎、脱落等细胞病变;病毒粒子呈立体对称,直径为20~24nm,无囊膜,抗氯仿,耐酸,耐热,能被5-IUDR抑制,可凝集猪、马、猫的红细胞,不能凝集人、鸡、豚鼠、兔的红细胞,HA试验能被抗CPV的特异性抗体所抑制。用犬细小病毒(CPV)特异性引物对10株病毒进行PCR扩增,结果扩增片段与阳性对照大小一致(771bp)。用PV/犬/JL/1/02、PV/犬/BJ/1/99和PV/犬/GZ/1/02三个毒株进行人工感染犬试验,结果人工感染犬在接种后白细胞总数出现短期不同程度的下降,在攻毒后4~14d粪便PCR检测阳性,其中接种PV/犬/BJ/1/99的一只犬出现严重的肠炎症状并死亡,其余接种犬没有出现明显的临床症状,但血清抗体均升高(大于5倍),而对照组的白细胞总数和血清抗体没有明显的变化,粪便PCR检测阴性。表明所分离毒株能够感染犬。鉴定结果证明,CPV在我国犬群中仍广泛存在。 展开更多
关键词 细小病毒 分离鉴定 基因型 形态学 理化学 生物学 分子病毒学 人工感染
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犬瘟热病毒H、F、N基因试验免疫研究 被引量:13
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作者 闫芳 夏咸柱 +4 位作者 扈荣良 谢之景 赵忠鹏 高玉伟 黄耕 《畜牧兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2006年第1期50-55,共6页
以构建的真核表达载体pVAXLPH、pVAXLPF和pVAXLPN为基因疫苗,分组进行了免疫小鼠试验,对免疫鼠体内免疫应答水平进行了检测。结果显示:所构建的基因疫苗可以诱导小鼠产生特异性免疫应答反应,pVAXLPH+pVAXLPF+pVAXLPN3个基因混合... 以构建的真核表达载体pVAXLPH、pVAXLPF和pVAXLPN为基因疫苗,分组进行了免疫小鼠试验,对免疫鼠体内免疫应答水平进行了检测。结果显示:所构建的基因疫苗可以诱导小鼠产生特异性免疫应答反应,pVAXLPH+pVAXLPF+pVAXLPN3个基因混合免疫小鼠诱导产生了较强的体液免疫和细胞免疫应答,免疫3次后血清中抗CDV ELISA抗体效价为0.332,而免疫前为0.158;抗CDV中和抗体效价为1:(4~16);CD4^+T/CD8^+T比值为2.05±0.38,而对照组为1.99±0.56;免疫小鼠脾细胞对CDVLP及ConA刺激的增殖反应值分别为0.384和0.356。基因疫苗免疫犬试验中,进行了单用基因疫苗免疫和基因疫苗与CDV弱毒疫苗联合免疫效果的比较研究。结果显示,基因疫苗免疫3次后,血清中抗CDVELISA抗体效价为0.296,抗CDV中和抗体效价为1:(8~32)。基因疫苗免疫2次,再使用弱毒疫苗加强免疫1次,血清中抗CDVELISA抗体效价为0.433,抗CDV中和抗体效价为1:(16~64)。 展开更多
关键词 犬瘟热 基因疫苗 犬瘟热病毒H基因 犬瘟热病毒F基因 犬瘟热病毒N基因
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表达犬瘟热病毒H基因的重组犬2型腺病毒免疫原性测定 被引量:4
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作者 闫芳 夏咸柱 +4 位作者 扈荣良 谢之景 赵忠鹏 高玉伟 黄耕 《畜牧兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2007年第3期258-262,共5页
为测定表达犬瘟热病毒(CDV)H基因的重组犬2型腺病毒(CAV-2/CDVLPH)免疫原性,25只45-50日龄犬(抗CDV中和抗体小于1∶2,CAV-2 HI抗体效价小于1∶2)随机分为5组进行免疫犬试验,第1组为CAV-2/CDVLPH免疫组,第2组为pVAXLPH免疫组,第3组为pVAX... 为测定表达犬瘟热病毒(CDV)H基因的重组犬2型腺病毒(CAV-2/CDVLPH)免疫原性,25只45-50日龄犬(抗CDV中和抗体小于1∶2,CAV-2 HI抗体效价小于1∶2)随机分为5组进行免疫犬试验,第1组为CAV-2/CDVLPH免疫组,第2组为pVAXLPH免疫组,第3组为pVAXLPH和CAV-2/CDVLPH联合免疫组,CDV弱毒疫苗组和pVAX1空载体组分别作为阳性和阴性对照组。利用间接ELISA和CDV中和试验检测免疫犬的抗CDV体液免疫水平、CAV-2 HI试验检测免疫犬的抗CAV体液免疫水平、淋巴细胞转化试验检测免疫犬的抗CDV和抗CAV-2细胞免疫水平,分析CAV-2/CDVLPH的免疫性。结果,能够在各试验组免疫犬血清中检测到抗CDV ELISA抗体和抗CDV中和抗体,同时在第1组和第3组免疫犬的血清中检测到抗CAV-2的HI抗体,免疫犬的外周淋巴细胞对特异性和非特异性抗原刺激均有明显增殖,第2组的免疫应答水平低于第3组,第1组又高于第3组,但低于CDV弱毒疫苗免疫组,试验表明CAV-2/CDVLPH可同时诱导免疫犬产生抗CDV和CAV特异性免疫,CAV-2/CDVLPH与pVAXLPH相比能诱导犬产生较高的特异性免疫应答,然而低于CDV弱毒疫苗。 展开更多
关键词 犬瘟热 CDV H基因 CAV-2
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Serological survey on canine coronavirus antibodies in giant pandas by virus neutralization test 被引量:2
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作者 乔军 夏咸柱 +9 位作者 杨松涛 李德生 胡桂学 高玉伟 孙贺廷 赵忠鹏 谢之景 闫芳 贺文琦 黄耕 《Journal of Forestry Research》 SCIE CAS CSCD 2004年第4期295-297,共3页
In order to survey the infectious situation of canine coronavirus (CCV) in giant panda population, a virus neutralization test detecting specific antibodies against CCV in giant panda抯 sera was established by using t... In order to survey the infectious situation of canine coronavirus (CCV) in giant panda population, a virus neutralization test detecting specific antibodies against CCV in giant panda抯 sera was established by using two-fold dilutions of serum and 100 TCID50 of the virus. The 62 sera samples of giant pandas, which were gathered from zoos and reserve region of Sichuan Province, China were detected. The neutralization antibody titer of 1:4 was recognized as the positive criterion, 8 sera samples were detected to be positive, and the positive rate was 12.9%. The titers of neutralizing antibody ranged from 1:8 to 1:32. It was the first comprehensive investigation on neutralization antibodies against CCV in giant panda population in China. The results of study showed that the infection of CCV in giant panda population was universal, which has posed a threat to the health of giant panda. Therefore, it is incumbent on us to study safe and effective vaccines to protect giant panda against CCV infection. 展开更多
关键词 Serological survey Canine coronavirus Giant panda Neutralization test
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苏格兰牧羊犬股骨骨折内固定
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作者 曹永芝 宿志民 +3 位作者 马卫明 谢之景 杨笃宝 王春璈 《中国畜牧兽医》 CAS 北大核心 2010年第4期225-226,共2页
关键词 苏格兰牧羊犬 骨折内固定 股骨骨折 治疗效果 发达国家 小动物 动物诊疗 国内
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山东省禽源致病性大肠杆菌质粒介导喹诺酮类药物耐药基因的检测 被引量:4
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作者 苏晶 杨芳芳 +5 位作者 孙慧 朱岩丽 王淑静 谢之景 毕海洋 姜世金 《山东农业科学》 2012年第9期5-8,共4页
为了解山东省禽源致病性大肠杆菌质粒介导喹诺酮类药物耐药基因分布情况,对2004~2011年间分离的230株禽源致病性大肠杆菌进行了qnrA、qnrB、qnrS基因的PCR检测,结果发现未检出qnrA和qnrB,qnrS基因的检出率为25.22%(58/230)。对部分检出... 为了解山东省禽源致病性大肠杆菌质粒介导喹诺酮类药物耐药基因分布情况,对2004~2011年间分离的230株禽源致病性大肠杆菌进行了qnrA、qnrB、qnrS基因的PCR检测,结果发现未检出qnrA和qnrB,qnrS基因的检出率为25.22%(58/230)。对部分检出的qnrS基因测序后发现假阳性率较高(8/24),为了提高检测的特异性,建立了检测qnrS基因的套式PCR,测序结果表明该方法检出准确率为100%,使用该方法检出230株细菌中qnrS基因的携带率为16.52%(38/230),表明含qnrS基因的耐药质粒在山东省禽源致病性大肠杆菌中分布较为广泛。 展开更多
关键词 大肠杆菌 喹诺酮类药物 耐药性 qnrS基因 套式PCR
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布鲁氏菌外膜脂蛋白OMP10基因的克隆表达、蛋白纯化及免疫原性研究 被引量:1
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作者 马长胜 丁家波 +5 位作者 杨宏军 何洪彬 宋玲玲 侯佩莉 仲跻峰 谢之景 《山东农业科学》 2012年第8期5-9,共5页
根据GenBank中的牛型布鲁氏杆菌OMP10序列,设计一对引物,以布鲁氏菌疫苗株S2全基因组DNA为模板扩增OMP10基因,将目的基因克隆入pEASY-T3,经测序正确后,与载体pET-32a(+)连接,构建重组表达质粒pET-32a/OMP10,转化E.coli BL21(DE3),用IPT... 根据GenBank中的牛型布鲁氏杆菌OMP10序列,设计一对引物,以布鲁氏菌疫苗株S2全基因组DNA为模板扩增OMP10基因,将目的基因克隆入pEASY-T3,经测序正确后,与载体pET-32a(+)连接,构建重组表达质粒pET-32a/OMP10,转化E.coli BL21(DE3),用IPTG诱导表达融合蛋白pET-32a/OMP10,经SDS-PAGE及Western-blot分析鉴定后,采用Ni-NTA Spin Kit纯化目的蛋白,并免疫小鼠。结果表明,成功构建了含OMP10的表达载体,经多次对表达条件的优化,获得了纯度较高的目的蛋白,为进一步动物免疫试验及研究其免疫原性和抗感染保护作用奠定了基础。 展开更多
关键词 布鲁氏菌 脂蛋白 OMP10基因
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