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紫色不结球白菜花色苷合酶基因BrcANS的克隆与表达分析 被引量:5
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作者 许玉超 侯喜林 +4 位作者 徐玮玮 沈露露 张仕林 刘世拓 胡春梅 《作物学报》 CAS CSCD 北大核心 2016年第6期850-859,共10页
以不结球白菜紫色品系NJZX1-3和其绿色突变体NJZX1-0及其后代F_2的2个株系NJZX2-1和NJZX2-2为材料,研究花色苷合酶基因在紫色不结球白菜叶片花色苷合成途径中的作用。利用同源克隆的方法,分别在NJZX1-3及NJZX1-0中克隆到花色苷合酶基因... 以不结球白菜紫色品系NJZX1-3和其绿色突变体NJZX1-0及其后代F_2的2个株系NJZX2-1和NJZX2-2为材料,研究花色苷合酶基因在紫色不结球白菜叶片花色苷合成途径中的作用。利用同源克隆的方法,分别在NJZX1-3及NJZX1-0中克隆到花色苷合酶基因;经序列比对发现,花色苷合酶基因的核苷酸和氨基酸序列在2种材料和大白菜中完全一致,长度为1077 bp,编码358个残基,第211~第307肽段具有2OG-Fe(Ⅱ)双加氧酶家族基因的结构域,被命名为BrcANS。BrcANS蛋白与同科芥菜的同源性高达99%,进化关系亦与其最相近。在全部4种材料鲜叶中,总花色苷的含量(TAC)与叶片紫色程度是一致的,其中,NJZX1-3叶片中总花色苷含量最高,达到80.15±5.74 mg 100g^(–1) FW;BrcANS表达量为NJZX1-0<NJZX2-1<NJZX2-2<NJZX1-3,与其总花色苷含量呈正相关。BrcANS的mRNA在NJZX1-3和NJZX1-0两种材料的不同组织中特异性表达:在叶片中高度表达,而在其他组织中表达较弱;另外,在两种材料间的表达亦存在显著差异,在NJZX1-3叶片中的表达丰度显著高于NJZX1-0。随着叶龄的增大,紫色不接球白菜叶片紫色变浅,BrcANS的表达量下降,且在NJZX1-3和NJZX1-0间的表达差异亦明显减小。以上结果表明,BrcANS基因是紫色不结球白菜中花色苷合成的关键基因之一,其mRNA表达量与叶片紫色直接相关,可能在其转录水平上调控叶片中紫色的形成。 展开更多
关键词 不结球白菜 花色苷合酶 同源克隆 序列分析 总花色苷含量 基因表达
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洋葱不同组织RNA提取方法比较分析 被引量:1
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作者 张仕林 许玉超 +2 位作者 帅强 邓鹏 王建军 《江苏农业科学》 北大核心 2016年第10期95-95,96,97,共3页
探讨洋葱不同组织总RNA提取的最优方法,以期为今后开展洋葱的分子生物学研究奠定基础。以洋葱品种W470发育旺盛时期的叶片、根、鳞茎为材料,比较Ta KaRa试剂盒法、TIANGEN试剂盒法、TRIzol法、p BIOZOL法等4种RNA提取方法提取洋葱RNA的... 探讨洋葱不同组织总RNA提取的最优方法,以期为今后开展洋葱的分子生物学研究奠定基础。以洋葱品种W470发育旺盛时期的叶片、根、鳞茎为材料,比较Ta KaRa试剂盒法、TIANGEN试剂盒法、TRIzol法、p BIOZOL法等4种RNA提取方法提取洋葱RNA的效果。凝胶电泳结果显示,除了TIANGEN试剂盒法不能提取洋葱根的总RNA,其他方法在洋葱不同组织中均可提取到不同质量的RNA。对不同方法提取洋葱RNA浓度、纯度进行检测发现,Ta KaRa试剂盒法提取洋葱叶片的总RNA浓度为342.31μg/g,p Biozol法提取洋葱鳞茎、根的总RNA浓度分别为1 119.39、171.85μg/m L。经RT-PCR验证,Ta KaRa试剂盒法提取的洋葱叶片总RNA、p BIozol法提取洋葱鳞茎、根的总RNA均成功扩出洋葱β-actin基因片段。由结果可知,Ta KaRa试剂盒适合提取洋葱叶片的总RNA,p BIOZOL法适合提取洋葱鳞茎、根的总RNA且质量能够满足后续试验要求。 展开更多
关键词 洋葱 总RNA RNA提取 RT-PCR
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不结球白菜过氧化还原蛋白基因Brc2-Cys Prx的克隆和表达分析 被引量:4
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作者 刘世拓 肖栋 +5 位作者 许玉超 侯喜林 徐玮玮 韩克 董慧杰 胡春梅 《南京农业大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2017年第1期40-47,共8页
[目的]双半胱氨酸型硫氧还蛋白过氧化物酶Brc2-Cys Prx是过氧化还原蛋白Peroxiredoxins(Prxs)的亚家族。Prxs是植物抗氧化酶防御系统的成员,对清除植物体内活性氧具有重要作用。本文旨在克隆和研究Brc2-Cys Prx基因在不结球白菜处于不... [目的]双半胱氨酸型硫氧还蛋白过氧化物酶Brc2-Cys Prx是过氧化还原蛋白Peroxiredoxins(Prxs)的亚家族。Prxs是植物抗氧化酶防御系统的成员,对清除植物体内活性氧具有重要作用。本文旨在克隆和研究Brc2-Cys Prx基因在不结球白菜处于不同胁迫条件下的表达模式。[方法]以不结球白菜霜霉病抗病自交系‘苏州青’和霜霉病感病自交系‘矮脚黄’为试验材料,利用RACE技术克隆得到不结球白菜Brc2-Cys Prx基因。利用生物信息学方法对该基因进行信息学分析。采用qRT-PCR技术对不结球白菜叶片Brc2-Cys Prx基因在霜霉病菌侵染及NaCl、CdCl_2、PEG6000和ABA等非生物胁迫处理条件下的表达模式进行研究。[结果]Brc2-Cys Prx基因的c DNA全长为999 bp,其中开放阅读框长度为810 bp,共编码270个氨基酸。该蛋白不存在信号肽序列,预测相对分子质量为28.15×10~3,理论等电点为5.87。不结球白菜Brc2-Cys Prx蛋白的二级结构主要由α-螺旋和无规则卷曲构成。该蛋白含有1个PRX_Typ2cys结构域,属于硫氧还蛋白超家族。系统进化分析表明:不结球白菜Brc2-Cys Prx蛋白与同属植物的进化关系相近,其中与大白菜和甘蓝型油菜进化关系最近。霜霉病菌侵染条件下,Brc2-Cys Prx基因表达呈逐渐上调趋势,在‘矮脚黄’中的表达与‘苏州青’相比上调迟钝,且该基因在‘矮脚黄’中的表达量一直低于‘苏州青’。0.2 mol·L^(-1)NaCl和200 g·L^(-1)PEG6000处理抑制Brc2-Cys Prx基因的表达;150μmol·L^(-1)CdCl_2处理促进Brc2-Cys Prx基因的表达,在24 h达到最大值;100μmol·L^(-1)ABA处理后,Brc2-Cys Prx基因表达上调,而12 h后,表达受抑制。[结论]霜霉病菌侵染条件下,Brc2-Cys Prx在抗性系‘苏州青’和感病系‘矮脚黄’中的表达存在差异,并且在抗病系中的表达量较高,推测Brc2-Cys Prx基因的高转录水平是抗病品种较之感病品种对霜霉病菌侵染具有更高抗性的原因之一。在非生物胁迫条件下,Brc2-Cys Prx基因具有不同的应答模式,推测可能是涉及到不同的物质或信号途径的原因。 展开更多
关键词 不结球白菜 霜霉病菌 活性氧 抗氧化防御系统 Brc2-Cys Prx基因 基因表达
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水分胁迫对紫色不结球白菜花色苷合成及相关基因表达的影响 被引量:6
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作者 沈露露 胡春梅 +2 位作者 许玉超 王岩 徐玮玮 《西北农业学报》 CAS CSCD 北大核心 2016年第4期588-594,共7页
用250g·L-1的聚乙二醇(PEG 6000)溶液模拟水分胁迫处理‘紫冠1号’紫色不结球白菜,运用液质联用和荧光定量PCR方法,分析水分胁迫下其叶片中花色苷质量分数、成分的变化以及花色苷合成基因BcPAL、BcCHS、BcCHI、BcF3H、BcDFR、BcANS... 用250g·L-1的聚乙二醇(PEG 6000)溶液模拟水分胁迫处理‘紫冠1号’紫色不结球白菜,运用液质联用和荧光定量PCR方法,分析水分胁迫下其叶片中花色苷质量分数、成分的变化以及花色苷合成基因BcPAL、BcCHS、BcCHI、BcF3H、BcDFR、BcANS和BcUFGT的表达特性。结果显示:1水分胁迫诱导不结球白菜积累花色苷;2共检测到11种主要的花色苷组分,分为矢车菊素类花色苷和飞燕草素类花色苷2大类,水分胁迫对不同花色苷质量分数的影响作用不同;3水分胁迫条件下,BcPAL、BcCHS和BcDFR基因的表达先升后降,BcF3H和BcUFGT基因在水分胁迫下被持续诱导表达,BcANS和BcCHI基因的表达量在胁迫初期有所下降,随后又逐渐升高。 展开更多
关键词 不结球白菜 水分胁迫 花色苷 基因表达
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不结球白菜雄蕊瓣化相关AP3基因的克隆和表达分析 被引量:3
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作者 黄和喜 王岩 +4 位作者 许玉超 徐玮玮 刘世拓 侯喜林 胡春梅 《南京农业大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2015年第5期748-756,共9页
[目的]APETALA3(AP3)转录因子是特异性作用于花瓣和雄蕊的MIKCc-型植物MADS转录因子。通过分离和检测不结球白菜雄蕊变异系的Bc AP3基因,探究不结球白菜稳定雄性不育系的机制。[方法]利用同源克隆基因的方法,以不结球白菜突变系和保持... [目的]APETALA3(AP3)转录因子是特异性作用于花瓣和雄蕊的MIKCc-型植物MADS转录因子。通过分离和检测不结球白菜雄蕊变异系的Bc AP3基因,探究不结球白菜稳定雄性不育系的机制。[方法]利用同源克隆基因的方法,以不结球白菜突变系和保持系的早期花蕾总RNA为研究对象,克隆出2个AP3同源基因Bc AP3-1和Bc AP3-2,然后利用生物信息学方法对这2个基因的核苷酸和蛋白氨基酸序列结构和组成进行信息学分析。采用半定量PCR技术,对不结球白菜中2个AP3家族基因在不同发育时期及不同组织部位的表达进行了研究。[结果]Bc AP3-1基因的c DNA全长为698 bp,编码231个氨基酸,且在突变系和保持系中序列一致。Bc AP3-2基因在突变系中克隆到的c DNA全长为698 bp,编码231个氨基酸;而在保持系中克隆到的c DNA全长为674 bp,编码223个氨基酸。生物信息学分析结果表明:Bc AP3基因属于典型的MADS-box基因家族的Ⅱ类MIKCc-型基因,属于eu AP3家系。不同花器官RT-PCR结果表明:Bc AP3-1基因在2种材料的花瓣和雄蕊中均有表达,而Bc AP3-2只在突变系的雄蕊中表达,在保持系雄蕊中无表达。花发育不同时期RT-PCR结果表明:在突变系中,Bc AP3-2基因的表达量变化与雄蕊退化现象相一致。[结论]Bc AP3-2基因可能与不结球白菜雄蕊瓣化性状密切相关。 展开更多
关键词 不结球白菜 雄蕊瓣化 AP3基因 基因表达
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沼液在土壤改良上的应用研究 被引量:23
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作者 王康 许玉超 +5 位作者 戴辉 练梅华 向新跃 宗德富 鞠军华 束剑峰 《江苏农业科学》 2019年第24期299-303,共5页
为了研究沼液对盐碱地和滩涂的改良效果,在临港产业园从未种植过的土壤上进行沼液喷洒灌溉试验。结果表明,施用300 t/hm 2鸡粪沼液,能够促进碱蓬和芦苇等植被的生长;0~15 cm表层土壤和15~30 cm深层土壤的容重降低7.1%和3.6%,电导率降低7... 为了研究沼液对盐碱地和滩涂的改良效果,在临港产业园从未种植过的土壤上进行沼液喷洒灌溉试验。结果表明,施用300 t/hm 2鸡粪沼液,能够促进碱蓬和芦苇等植被的生长;0~15 cm表层土壤和15~30 cm深层土壤的容重降低7.1%和3.6%,电导率降低77.9%和75.6%,氯离子含量降低81.5%和78.7%,pH值增加2.1%和1.7%,有机质含量增加63.4%和72.8%;表层土壤的有效氮、有效磷、速效钾含量分别降低1.4%、16.1%、5.4%,而深层土壤分别增加21.6%、12.9%、31.2%;表层土壤中总活菌数、芽孢杆菌数量上升了1个数量级,霉菌数量增加了3倍,放线菌数量达到2.0×10^5 CFU/g。 展开更多
关键词 沼液 盐碱土 改良 滩涂 土壤养分 土壤微生物
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沼液培肥(休耕)+水稻的种植模式 被引量:2
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作者 王康 李稀 +4 位作者 束剑峰 戴辉 练梅华 张雨 许玉超 《浙江农业科学》 2020年第11期2221-2225,共5页
为了更安全有效地在水稻上资源化利用沼液,本研究以“稻麦轮作”种植模式下全部施用化肥的CK1处理和施用沼液和化肥的CK2处理为对照,探究在“沼液培肥(休耕)+水稻”的种植模式下的全部施用沼液的CL处理的效果。结果表明,在水稻收获后,C... 为了更安全有效地在水稻上资源化利用沼液,本研究以“稻麦轮作”种植模式下全部施用化肥的CK1处理和施用沼液和化肥的CK2处理为对照,探究在“沼液培肥(休耕)+水稻”的种植模式下的全部施用沼液的CL处理的效果。结果表明,在水稻收获后,CL处理的土壤各项指标明显优于CK1和CK2处理,有机质、碱解氮、有效磷和速效钾得到提高,全盐量下降,pH维持稳定;水稻收获后,CL处理的土壤中重金属含量均未超过GB 15618—2018《国家土壤环境质量标准》风险限定值规定,不会造成土壤重金属污染;CL处理的水稻产量最高,达到10215 kg·hm^-2,分别较CK1和CK2提高6.2%和6.6%;相比于CK1和CK2处理,CL处理的大米中脂肪、氨基酸和矿质元素Fe、Ca、Cu和Zn含量均大幅增加,Na含量较低,其中氨基酸含量分别是CK1和CK2处理的3.4和1.5倍,Ca含量分别是CK1和CK2处理的95.3和2.0倍。 展开更多
关键词 沼液培肥 水稻 营养
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