构建一种基于杂交链式反应(hybridization chain reaction,HCR)扩增的适配体磁珠荧光传感器。巧妙设计序列HP和发卡序列H1、H2,其中HP是由适配体序列与触发序列结合而成的,并且序列互补形成稳定的二级结构。然后采用戊二醇反应和亲和素...构建一种基于杂交链式反应(hybridization chain reaction,HCR)扩增的适配体磁珠荧光传感器。巧妙设计序列HP和发卡序列H1、H2,其中HP是由适配体序列与触发序列结合而成的,并且序列互补形成稳定的二级结构。然后采用戊二醇反应和亲和素-生物素反应进行适配体功能化磁珠的制备。将阪崎肠杆菌与适配体磁珠一起孵育,HP中的适配体序列识别靶标,引起HP构象变化,露出触发序列,通过HCR触发H1和H2的链状组装,产生长双链DNA。荧光指示剂SYBR Green I以插层和小槽结合的方式与HCR产物的长双链结合。最后加入氧化石墨烯(graphene oxide,GO)后,游离的H1、H2和SYBR Green I将通过π-π堆积紧密吸附在GO表面,荧光信号被猝灭。HCR产物不能被吸附在GO表面,因此与HCR产物结合的SYBR Green I发出依赖于靶浓度的强荧光信号,从而实现阪崎肠杆菌的定量检测。本方法在纯培养条件下的检出限为2CFU/mL,对奶粉的检出限为8CFU/g,对奶粉样品的检测结果与传统微生物培养法具有良好的一致性。该方法具有无需DNA提取,快速、稳定性高、高特异性和高灵敏度等优点,因此为阪崎肠杆菌的现场快速检测提供了一种很有潜力的方法。展开更多
通过热水浸提法从荞麦中提取水溶性多糖,并用离子交换柱和凝胶过滤柱对荞麦多糖进行分离纯化、测定其分子量。结果表明,荞麦多糖粗品用Savag法脱蛋白后,采用DEAE-Sepharose Fast Flow和Sephacryl S-400HR柱层析纯化,得到荞麦多糖(FEP),...通过热水浸提法从荞麦中提取水溶性多糖,并用离子交换柱和凝胶过滤柱对荞麦多糖进行分离纯化、测定其分子量。结果表明,荞麦多糖粗品用Savag法脱蛋白后,采用DEAE-Sepharose Fast Flow和Sephacryl S-400HR柱层析纯化,得到荞麦多糖(FEP),经过凝胶柱色谱分析表明,FEP为均一多糖。用苯酚硫酸法测定多糖的含量,用AKTA快速液相蛋白层析仪的紫外检测器在280nm波长处检测蛋白质含量。最后根据用不同分子量标准葡聚糖做出的标准曲线,测定出FEP分子量(Mw)为1720442D。展开更多
文摘构建一种基于杂交链式反应(hybridization chain reaction,HCR)扩增的适配体磁珠荧光传感器。巧妙设计序列HP和发卡序列H1、H2,其中HP是由适配体序列与触发序列结合而成的,并且序列互补形成稳定的二级结构。然后采用戊二醇反应和亲和素-生物素反应进行适配体功能化磁珠的制备。将阪崎肠杆菌与适配体磁珠一起孵育,HP中的适配体序列识别靶标,引起HP构象变化,露出触发序列,通过HCR触发H1和H2的链状组装,产生长双链DNA。荧光指示剂SYBR Green I以插层和小槽结合的方式与HCR产物的长双链结合。最后加入氧化石墨烯(graphene oxide,GO)后,游离的H1、H2和SYBR Green I将通过π-π堆积紧密吸附在GO表面,荧光信号被猝灭。HCR产物不能被吸附在GO表面,因此与HCR产物结合的SYBR Green I发出依赖于靶浓度的强荧光信号,从而实现阪崎肠杆菌的定量检测。本方法在纯培养条件下的检出限为2CFU/mL,对奶粉的检出限为8CFU/g,对奶粉样品的检测结果与传统微生物培养法具有良好的一致性。该方法具有无需DNA提取,快速、稳定性高、高特异性和高灵敏度等优点,因此为阪崎肠杆菌的现场快速检测提供了一种很有潜力的方法。
文摘通过热水浸提法从荞麦中提取水溶性多糖,并用离子交换柱和凝胶过滤柱对荞麦多糖进行分离纯化、测定其分子量。结果表明,荞麦多糖粗品用Savag法脱蛋白后,采用DEAE-Sepharose Fast Flow和Sephacryl S-400HR柱层析纯化,得到荞麦多糖(FEP),经过凝胶柱色谱分析表明,FEP为均一多糖。用苯酚硫酸法测定多糖的含量,用AKTA快速液相蛋白层析仪的紫外检测器在280nm波长处检测蛋白质含量。最后根据用不同分子量标准葡聚糖做出的标准曲线,测定出FEP分子量(Mw)为1720442D。
