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实时荧光PCR检测17-AAG对人RPE细胞Akt等基因表达的调控 被引量:3
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作者 许志洋 姚家奇 +1 位作者 刘庆淮 李建民 《国际眼科杂志》 CAS 2008年第9期1792-1794,共3页
目的:建立检测17-AAG对人RPE细胞不同处理条件下mRNA的SYBR Green实时PCR方法,观察17-AAG对人RPE细胞中Akt,Raf,Hsp90,Hsp70基因表达的调控。方法:体外培养人RPE细胞株。当加入处理因素17-AAG并作用不同浓度及时间梯度后,收集细胞,抽提... 目的:建立检测17-AAG对人RPE细胞不同处理条件下mRNA的SYBR Green实时PCR方法,观察17-AAG对人RPE细胞中Akt,Raf,Hsp90,Hsp70基因表达的调控。方法:体外培养人RPE细胞株。当加入处理因素17-AAG并作用不同浓度及时间梯度后,收集细胞,抽提RNA进行反转录。同时根据Akt,Raf,Hsp90,Hsp70的基因序列,设计Akt1,Raf1,Hsp90,Hsp70的引物,利用ABI 7300PCR仪和SYBR Green,建立实时荧光PCR反应条件,通过比较Ct进行基因表达的相对定量分析。结果:熔解曲线分析和琼脂糖凝胶电泳结果证明了PCR反应的特异性;相对定量结果显示,17-AAG可以下调Akt及Raf基因的表达,上调Hsp90及Hsp70基因表达。结论:应用SYBR Green实时荧光PCR可以特异、准确地分析RPE细胞相关增殖基因表达差异,为系统研究17-AAG治疗PVR的复杂调控机制创造有力条件。 展开更多
关键词 SYBR Green 实时荧光PCR 17-AAG 视网膜色素上皮 增生性玻璃体视网膜病变 热休克蛋白90
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基于FLUENT6.0的圆管内部流场解析 被引量:10
2
作者 许志洋 郭永存 王仲勋 《煤矿机械》 北大核心 2006年第6期979-980,共2页
应用FLUENT软件模拟圆管中的流场得到出口速度,并与理论值进行比较。结果显示,应用FLUENT软件模拟圆管内部流场是可靠的。在前处理软件GAMBIT中将圆管流场划分为41 132个计算单元。计算中采用可实现κ-ε双方程模型。为FLUENT6.0软件在... 应用FLUENT软件模拟圆管中的流场得到出口速度,并与理论值进行比较。结果显示,应用FLUENT软件模拟圆管内部流场是可靠的。在前处理软件GAMBIT中将圆管流场划分为41 132个计算单元。计算中采用可实现κ-ε双方程模型。为FLUENT6.0软件在流体理论研究中的应用提供了参考。 展开更多
关键词 速度场 数值模拟 FLUENT软件 圆管
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基于曲面的变螺距螺纹加工方法的研究 被引量:4
3
作者 许志洋 丁丹 《煤矿机械》 北大核心 2011年第12期137-138,共2页
数控车削加工中常见的螺纹加工有普通螺纹、锥螺纹、管螺纹、内螺纹等,但在曲面上加工螺纹很难实现,以椭圆曲面为例,在其表面进行变螺距螺纹的加工,以此体现一些特殊螺纹的一般加工方法,为生产加工提供参考。
关键词 椭圆 螺纹 宏程序
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数控车削加工中过切问题的研究 被引量:1
4
作者 许志洋 丁丹 《煤矿机械》 北大核心 2011年第3期129-130,共2页
在数控车削加工中,由于刀具选择不当和插补程序计算方法不合理都会出现加工过切现象,加工不出合格的产品,以带有圆弧加工的旋转体工件为例分析产生过切的原因及提出一些解决的方法,用以指导生产加工。
关键词 加工过切 数控车削 工艺过程
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17-AAG对人RPE细胞PDGFR和EGFR基因表达的调控
5
作者 许志洋 姚家奇 +2 位作者 刘庆淮 李建民 王强 《国际眼科杂志》 CAS 2008年第12期2431-2434,共4页
目的:通过检测17-AAG对人RPE细胞不同处理条件下mRNA的SYBR Green实时PCR方法,观察17-AAG对人RPE细胞中PDGFR和EGFR基因表达的调控。方法:体外培养人RPE细胞株。当加入17-AAG并作用0,2,5,10μmol/L及0,16,24,48h后,收集细胞,抽提RNA进... 目的:通过检测17-AAG对人RPE细胞不同处理条件下mRNA的SYBR Green实时PCR方法,观察17-AAG对人RPE细胞中PDGFR和EGFR基因表达的调控。方法:体外培养人RPE细胞株。当加入17-AAG并作用0,2,5,10μmol/L及0,16,24,48h后,收集细胞,抽提RNA进行反转录。同时根据PDGFR、EGFR的基因序列,设计PDGFR、EGFR的引物,利用ABI7300PCR仪和SYBR Green,建立实时荧光PCR反应条件,通过比较Ct值进行基因表达的相对定量分析。结果:熔解曲线分析和琼脂糖凝胶电泳结果证明了PCR反应的特异性;相对定量结果显示,17-AAG可以下调PDGFR基因的表达(P<0.05),上调EGFR基因表达(P<0.05)。结论:SYBR Green实时荧光PCR可特异、准确地分析RPE细胞相关增殖基因表达差异,为系统研究17-AAG治疗PVR的复杂调控机制创造有力条件。 展开更多
关键词 SYBR Green 实时荧光PCR 17-AAG 视网膜色素上皮细胞 增生性玻璃体视网膜病变 热休克蛋白90
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基于倾斜曲面零件的数控加工研究
6
作者 许志洋 《煤矿机械》 北大核心 2013年第9期152-153,共2页
数控车削加工中,常见的零件加工类型有:轴类、盘类和套类,这些零件对称中心与机床主轴平行,便于编程加工,但如果曲面有一倾斜角度的话,采用正常的做法就难以实现加工,以倾斜椭圆曲面零件为例研究它们的手工编程加工方法,为加工此类零件... 数控车削加工中,常见的零件加工类型有:轴类、盘类和套类,这些零件对称中心与机床主轴平行,便于编程加工,但如果曲面有一倾斜角度的话,采用正常的做法就难以实现加工,以倾斜椭圆曲面零件为例研究它们的手工编程加工方法,为加工此类零件提供参考。 展开更多
关键词 椭圆曲面 坐标系变换 手工编程
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淮北平原浅层地下水氟的水化学特征及影响因素分析 被引量:22
7
作者 丁丹 许光泉 +2 位作者 何晓文 梁修雨 许志洋 《水资源保护》 CAS 2009年第2期64-68,共5页
以淮北平原浅层地下水中的氟离子为研究对象,在分析地形地貌、水文地质条件、地下水化学成分(总硬度、矿化度、氟离子等)、水化学类型特征等基础上,运用统计方法分析了氟离子浓度与pH值、K++Na+浓度、Ca2+浓度、ρ(K++Na+)/ρ(Ca2+)比值... 以淮北平原浅层地下水中的氟离子为研究对象,在分析地形地貌、水文地质条件、地下水化学成分(总硬度、矿化度、氟离子等)、水化学类型特征等基础上,运用统计方法分析了氟离子浓度与pH值、K++Na+浓度、Ca2+浓度、ρ(K++Na+)/ρ(Ca2+)比值、Mg2+浓度之间的关系。结果表明氟离子浓度随地下水pH值的增大而增大,与ρ(K++Na+)/ρ(Ca2+)比值之间存在着正相关关系,但是与K++Na+浓度、Ca2+浓度、Mg2+浓度之间并无明显的相关性。最后讨论了氟离子的影响因素,提出合理利用地下水的建议。 展开更多
关键词 淮北平原 水化学成分 水化学类型 氟离子 矿化度
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强直性脊柱炎湿热痹阻证血清差异蛋白组学研究 被引量:12
8
作者 孙志岭 徐骁 +3 位作者 王玲 王富强 许志洋 纪伟 《南京中医药大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2015年第5期412-415,共4页
目的应用蛋白质组学双向电泳和质谱技术,开展强直性脊柱炎湿热痹阻证证候学研究。方法对强直性脊柱炎湿热痹阻证、寒湿痹阻证、正常对照共3组各30例血清,分别进行双向凝胶电泳,软件分析获取湿热痹阻证组和其他2组的差异蛋白质点,二级质... 目的应用蛋白质组学双向电泳和质谱技术,开展强直性脊柱炎湿热痹阻证证候学研究。方法对强直性脊柱炎湿热痹阻证、寒湿痹阻证、正常对照共3组各30例血清,分别进行双向凝胶电泳,软件分析获取湿热痹阻证组和其他2组的差异蛋白质点,二级质谱鉴定获得差异蛋白。应用Western blot验证差异蛋白。结果获得7个湿热痹阻证的共同差异蛋白点,经质谱鉴定和SwissProt数据库检索,获得Fibulin-1、二肽基肽酶1、激肽原1、白细胞介素17F突变型、甘露糖结合蛋白C等5个强直性脊柱炎湿热痹阻证差异蛋白,涉及胞外基质蛋白、蛋白酶类、凝血因子、细胞因子、转运蛋白等。Western blot验证甘露糖结合蛋白C的表达结果与蛋白组学检测结果一致。结论这些蛋白可能涉及强直性脊柱炎湿热痹阻证的发病和病理过程,为进一步研究湿热痹阻证实质提供了依据。 展开更多
关键词 湿热痹阻证 强直性脊柱炎 双向凝胶电泳 质谱 血清
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蛋白质组学技术筛选与鉴定癫痫疾病的差异蛋白质 被引量:2
9
作者 孙志岭 高觉民 +2 位作者 许志洋 王铮 王富强 《高等学校化学学报》 SCIE EI CAS CSCD 北大核心 2010年第10期1970-1975,共6页
应用蛋白质组学双向凝胶电泳(Two-dimensional gel electrophoresis,2DE)和质谱技术,定量分析和鉴定了癫痫组(n=3)和正常组(n=3)脑组织的差异表达蛋白,以从蛋白质水平上揭示癫痫病的发生机制.结果表明,凝胶图谱可辨识2500~3000个蛋白点... 应用蛋白质组学双向凝胶电泳(Two-dimensional gel electrophoresis,2DE)和质谱技术,定量分析和鉴定了癫痫组(n=3)和正常组(n=3)脑组织的差异表达蛋白,以从蛋白质水平上揭示癫痫病的发生机制.结果表明,凝胶图谱可辨识2500~3000个蛋白点,对21个显著差异表达蛋白点进行质谱鉴定和SwissProt数据库检索,得到17个癫痫差异蛋白,其中2个蛋白在癫痫组织中表达上调,15个蛋白表达下调.部分蛋白与癫痫的关系属首次报道.这些蛋白与癫痫的病变相关,可能成为癫痫的分子标志物和药物治疗的靶向蛋白. 展开更多
关键词 癫痫 双向凝胶电泳 质谱 蛋白质组学
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体外17-AAG对人RPE细胞VEGF及其受体的影响 被引量:1
10
作者 姚家奇 刘庆淮 +2 位作者 刘肖艺 许志洋 李建民 《国际眼科杂志》 CAS 2009年第5期833-835,共3页
目的:体外观察17-AAG对人RPE细胞中VEGFA,VEGFB,VEGFR1,VEGFR2基因表达的调控。方法:体外培养人RPE细胞株加入17-AAG并作用不同浓度及时间梯度后,收集细胞,抽提RNA进行反转录。同时根据VEGFA,VEGFB,VEGFR1,VEGFR2的基因序列,设计相应的... 目的:体外观察17-AAG对人RPE细胞中VEGFA,VEGFB,VEGFR1,VEGFR2基因表达的调控。方法:体外培养人RPE细胞株加入17-AAG并作用不同浓度及时间梯度后,收集细胞,抽提RNA进行反转录。同时根据VEGFA,VEGFB,VEGFR1,VEGFR2的基因序列,设计相应的引物,进行RT-PCR,琼脂糖凝胶电泳用于分析引物的特异性,再利用ABI7300PCR仪和SYBRGreen,建立实时荧光PCR反应条件,通过比较Ct进行基因表达的相对定量分析。结果:17-AAG可以下调VEGFA,VEGFB和VEGFR1基因的表达,而VEGFR2只有再高浓度17-AAG作用时才下调。结论:17-AAG可抑制RPE细胞VEGF及其受体基因。 展开更多
关键词 实时荧光定量PCR 17-AAG 视网膜色素上皮细胞 热休克蛋白90 VEGF
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