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HER2靶向重组截短型Bid片段融合蛋白对骨肉瘤细胞的促凋亡作用
被引量：
1
1
作者
纪振钢
裘秀春
+7 位作者
杨彤涛
龙华
马保安
周勇
张明华
许彦鸣
杨安钢
范清宇
《医学研究生学报》
CAS
2007年第2期120-122,127,I0001,共5页
目的:观察人上皮细胞生长因子受体2(HER2)靶向重组的活性截短型Bid(tBid)融合蛋白对骨肉瘤SOSP-9607细胞的促凋亡作用。方法:将抗HER2单链抗体基因e23sFv、与绿脓杆菌外毒素(PE)的转膜结构域基因(PEII)和tbid基因连接,构建成immuno-tbid...
目的:观察人上皮细胞生长因子受体2(HER2)靶向重组的活性截短型Bid(tBid)融合蛋白对骨肉瘤SOSP-9607细胞的促凋亡作用。方法:将抗HER2单链抗体基因e23sFv、与绿脓杆菌外毒素(PE)的转膜结构域基因(PEII)和tbid基因连接,构建成immuno-tbid(e23sFv-PEII-tbid)基因,将其克隆入真核表达载体pCMV中,转染SOSP-9607细胞,间接免疫荧光法检测目的蛋白表达和细胞形态学变化,通过AnnexinⅤ染色、流式细胞仪检测观察其促凋亡作用。结果:转染SOSP-9607细胞后,间接免疫荧光染色检测出tB id的表达,SOSP-9607细胞出现明显的固缩,核浓缩等凋亡特征。AnnexinⅤ染色、流式细胞仪检测可见明显的凋亡细胞,凋亡率为42%,对照组细胞仅6%,表明细胞膜表面有磷脂酰丝氨酸外翻,提示重组immuno-tbid基因表达后有促凋亡作用。结论:重组immuno-tbid基因可在转染的SOSP-9607细胞中表达,并诱导其细胞凋亡。
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关键词
截短型Bid片段
人上皮细胞生长因子受体2
融合蛋白
骨肉瘤SOSP-9607细胞
细胞凋亡
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职称材料
重组LacZ复制缺陷型腺病毒的构建和鉴定
被引量：
1
2
作者
裘秀春
许彦鸣
+7 位作者
马保安
周勇
单乐群
杨彤涛
于翠娟
孟艳玲
杨安钢
范清宇
《医学研究生学报》
CAS
2006年第11期963-966,I0009,共5页
目的:构建表达LacZ基因的复制缺陷型腺病毒。方法:用AdEasy-1TM系统,在大肠杆菌中同源重组,构建表达LacZ基因的复制缺陷型腺病毒载体(Ad-LacZ)。重组腺病毒在HEK293细胞内包装并扩增,测定病毒滴度、电镜鉴定病毒存在、斑点杂交检测其复...
目的:构建表达LacZ基因的复制缺陷型腺病毒。方法:用AdEasy-1TM系统,在大肠杆菌中同源重组,构建表达LacZ基因的复制缺陷型腺病毒载体(Ad-LacZ)。重组腺病毒在HEK293细胞内包装并扩增,测定病毒滴度、电镜鉴定病毒存在、斑点杂交检测其复制缺陷性,然后感染HeLa细胞X-gal染色检测LacZ的表达情况。结果:成功构建了重组LacZ腺病毒表达载体,包装获得的重组腺病毒的滴度为1.58×109PFU/m l。在转染的细胞和感染的靶细胞内均可检测到LacZ的表达。电镜下可见感染的HEK293细胞核内含晶格状结构的腺病毒包函体。斑点杂交提示重组病毒为复制缺陷型,其基因转移百分率和感染强度和感染时间有一定的相关性。结论:成功构建了表达LacZ基因的复制缺陷型腺病毒。
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关键词
腺病毒表达载体
LACZ
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职称材料
题名
HER2靶向重组截短型Bid片段融合蛋白对骨肉瘤细胞的促凋亡作用
被引量：
1
1
作者
纪振钢
裘秀春
杨彤涛
龙华
马保安
周勇
张明华
许彦鸣
杨安钢
范清宇
机构
第四军医大学唐都医院骨科中心
第四军区大学生物化学与分子生物学教研室
第四军区大学免疫学教研室
出处
《医学研究生学报》
CAS
2007年第2期120-122,127,I0001,共5页
基金
国家自然科学基金资助项目(批准号:30330610)
国家自然科学基金资助项目(批准号:30471988)
中国博士后基金资助项目(批准号:2005038259)
文摘
目的:观察人上皮细胞生长因子受体2(HER2)靶向重组的活性截短型Bid(tBid)融合蛋白对骨肉瘤SOSP-9607细胞的促凋亡作用。方法:将抗HER2单链抗体基因e23sFv、与绿脓杆菌外毒素(PE)的转膜结构域基因(PEII)和tbid基因连接,构建成immuno-tbid(e23sFv-PEII-tbid)基因,将其克隆入真核表达载体pCMV中,转染SOSP-9607细胞,间接免疫荧光法检测目的蛋白表达和细胞形态学变化,通过AnnexinⅤ染色、流式细胞仪检测观察其促凋亡作用。结果:转染SOSP-9607细胞后,间接免疫荧光染色检测出tB id的表达,SOSP-9607细胞出现明显的固缩,核浓缩等凋亡特征。AnnexinⅤ染色、流式细胞仪检测可见明显的凋亡细胞,凋亡率为42%,对照组细胞仅6%,表明细胞膜表面有磷脂酰丝氨酸外翻,提示重组immuno-tbid基因表达后有促凋亡作用。结论:重组immuno-tbid基因可在转染的SOSP-9607细胞中表达,并诱导其细胞凋亡。
关键词
截短型Bid片段
人上皮细胞生长因子受体2
融合蛋白
骨肉瘤SOSP-9607细胞
细胞凋亡
Keywords
Truncated BH3 interacting death agonist
Human epidermal growth factor receptor 2
Fusion protein
Osteosarcoma SOSP-9607 cell
Apoptosis
分类号
R738.7 [医药卫生—肿瘤]
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职称材料
题名
重组LacZ复制缺陷型腺病毒的构建和鉴定
被引量：
1
2
作者
裘秀春
许彦鸣
马保安
周勇
单乐群
杨彤涛
于翠娟
孟艳玲
杨安钢
范清宇
机构
第四军医大学唐都医院骨肿瘤研究所
第四军医大学基础部生物化学与分子生物学教研室
第四军医大学基础部免疫学教研室
出处
《医学研究生学报》
CAS
2006年第11期963-966,I0009,共5页
基金
国家杰出青年科学基金资助项目(批准号:399Z5036)
国家自然科学基金资助项目(批准号:30471988)
中国博士后基金资助项目(批准号:2005038259)
文摘
目的:构建表达LacZ基因的复制缺陷型腺病毒。方法:用AdEasy-1TM系统,在大肠杆菌中同源重组,构建表达LacZ基因的复制缺陷型腺病毒载体(Ad-LacZ)。重组腺病毒在HEK293细胞内包装并扩增,测定病毒滴度、电镜鉴定病毒存在、斑点杂交检测其复制缺陷性,然后感染HeLa细胞X-gal染色检测LacZ的表达情况。结果:成功构建了重组LacZ腺病毒表达载体,包装获得的重组腺病毒的滴度为1.58×109PFU/m l。在转染的细胞和感染的靶细胞内均可检测到LacZ的表达。电镜下可见感染的HEK293细胞核内含晶格状结构的腺病毒包函体。斑点杂交提示重组病毒为复制缺陷型,其基因转移百分率和感染强度和感染时间有一定的相关性。结论:成功构建了表达LacZ基因的复制缺陷型腺病毒。
关键词
腺病毒表达载体
LACZ
Keywords
Adenoviruses expression vector
LacZ
分类号
R373.1 [医药卫生—病原生物学]
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职称材料
题名
作者
出处
发文年
被引量
操作
1
HER2靶向重组截短型Bid片段融合蛋白对骨肉瘤细胞的促凋亡作用
纪振钢
裘秀春
杨彤涛
龙华
马保安
周勇
张明华
许彦鸣
杨安钢
范清宇
《医学研究生学报》
CAS
2007
1
在线阅读
下载PDF
职称材料
2
重组LacZ复制缺陷型腺病毒的构建和鉴定
裘秀春
许彦鸣
马保安
周勇
单乐群
杨彤涛
于翠娟
孟艳玲
杨安钢
范清宇
《医学研究生学报》
CAS
2006
1
在线阅读
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职称材料
已选择
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