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3种去势疫苗的构建及稳定性研究: 1; 作者彭静娜刘丽娟 +5 位作者吕志远于志蓉孙旭阳许学林荆焕松熊家军《中国畜牧兽医》 CSCD 北大核心 2024年第1期255-267,共13页; 【目的】试验旨在构建不同种类的新型免疫去势DNA疫苗,分别为KISS1、神经激肽B(NKB)单表达基因疫苗和促性腺激素释放激素(GnRH)、KISS1和NKB 3个基因共表达的三表达基因疫苗,注射到动物体内后能激发免疫反应,产生相应的抗体,从而达到通... 展开更多; 关键词基因疫苗免疫去势 GNRH KISS1 NKB; 在线阅读下载PDF 职称材料

双表达去势DNA疫苗的构建及其稳定性研究被引量：2: 2; 作者许学林杨波 +4 位作者荆焕松胡映红王风华孙培皓熊家军《中国畜牧兽医》 CAS 北大核心 2021年第5期1745-1754,共10页; 试验旨在构建一种更安全有效的新型免疫去势DNA疫苗,通过选取下丘脑-垂体-性腺轴(hypot halamic-pituitary-gonadal axis,HPG)的上游调控基因吻素1(KISS1)和促性腺激素释放激素(GnRH)作为靶标,借助2A肽的自剪切功能,引入平衡致死系统代... 展开更多; 关键词 DNA疫苗 KISS1 GNRH 2A肽免疫去势稳定性; 在线阅读下载PDF 职称材料

外源褪黑素对鹿茸软骨细胞生长发育的影响被引量：5: 3; 作者李可可孙旭阳 +5 位作者陈超荆焕松许学林游思赵靖波熊家军《中国畜牧兽医》 CAS 北大核心 2020年第7期1997-2004,共8页; 试验旨在探讨褪黑素对体外培养的鹿茸软骨细胞增殖、周期及凋亡的影响。利用甲苯胺蓝、茜素红S、阿利新蓝染色鉴定软骨细胞,采用外源添加褪黑素的方法,用不同浓度(0、400、800、1200、1600和2000 pg/mL)、不同时间(24、48和72 h)处理鹿... 展开更多; 关键词鹿茸褪黑素软骨细胞增殖; 在线阅读下载PDF 职称材料

一例中华穿山甲孕期激素监测和双胞胎卵型鉴定被引量：2: 4; 作者燕洪美许学林 +3 位作者安富宇王凯夏彦玲华彦《林业与环境科学》 2022年第3期18-24,共7页; 2020年8月,广东省野生动物监测救护中心救护的一只成体雌性中华穿山甲Manis pentadactyla,在人工饲养条件下自然受孕,妊娠约11周后产出无生命体征的双胞胎。在合圈前及孕期,收集雌性的粪便,采用酶联免疫法(Elisa),测定激素促黄体素、促... 展开更多; 关键词人工饲养中华穿山甲双胞胎异卵; 在线阅读下载PDF 职称材料

救护前期穿山甲的日常行为表达被引量：1: 5; 作者冉重阳龙永彬 +4 位作者许学林安富宇吕春贺王鹤华彦《林业与环境科学》 2022年第5期38-43,共6页; 穿山甲作为习性特化的动物,对外界刺激极其敏感。新救护个体经过长途运输或圈禁,容易因应激反应剧烈导致动物拒食或死亡。为了解救护前期穿山甲的行为特点,进而提高穿山甲的救护存活率,利用目标动物取样法对处于救护前期的中华穿山甲Man... 展开更多; 关键词中华穿山甲马来穿山甲救护前期行为表达; 在线阅读下载PDF 职称材料

题名3种去势疫苗的构建及稳定性研究: 1; 作者彭静娜刘丽娟吕志远于志蓉孙旭阳许学林荆焕松熊家军; 机构华中农业大学动物科学技术学院; 出处《中国畜牧兽医》 CSCD 北大核心 2024年第1期255-267,共13页; 基金国家自然科学基金(31972533)。; 文摘【目的】试验旨在构建不同种类的新型免疫去势DNA疫苗,分别为KISS1、神经激肽B(NKB)单表达基因疫苗和促性腺激素释放激素(GnRH)、KISS1和NKB 3个基因共表达的三表达基因疫苗,注射到动物体内后能激发免疫反应,产生相应的抗体,从而达到通过调控生殖轴来降低雄激素的目的。【方法】选取下丘脑-垂体-性腺轴(hypothalamic pituitary gonadal axis)上的GnRH及其上游调控基因KISS1和NKB作为靶标,并引入平衡致死系统代替抗生素筛选构建重组质粒,其中三表达重组质粒借助2A肽的自剪切功能使目的基因共表达。将重组质粒转染293T细胞后提取细胞RNA,验证其能否在机体内正常表达,随后将构建成功的质粒电转到减毒猪霍乱沙门菌(Salmonella Choleraesuis)C500感受态细胞中,获得重组活菌疫苗,构建的工程菌在体外连续传代50次,选取第0、2、5、10、20、30、40、50代的菌株进行稳定性研究。【结果】重组质粒pVAX-2A/KISS1-asd、pVAX-2A/S-NKB-asd和pVAX-S/GnRH-2A/S-NKB-2A/KISS1-asd酶切分别获得大小为498、1 146和2 622 bp的条带,与目的基因一致;测序结果与目的序列比对后显示大小、方向一致,目的基因的插入方向和序列完全正确。将上述重组质粒转染293T细胞后进行RT-PCR,获得大小分别为498、1 146、1 349 bp的目的条带,表明目的基因在真核细胞内能正常转录。上述重组质粒电转到减毒猪霍乱沙门菌C500感受态细胞后,提取质粒酶切后获得大小分别为498、1 146和2 622 bp的条带,测序结果与目的序列比对后显示大小、方向一致,表明重组质粒成功导入减毒猪霍乱沙门菌C500中。每2 h检测的工程菌和减毒猪霍乱沙门菌C500对照菌D600 nm值接近,差异不显著;生长曲线检测结果显示,工程菌在体外连续传代50次的过程中,工程菌和减毒猪霍乱沙门菌对照菌C500对数生长期均在0~10 h, 10~14 h为生长平缓期,约16 h以后进入平台期,工程菌生长特性与减毒猪霍乱沙门菌C500的生长特性一致,未因携带质粒而改变。同时,各代菌液沙门菌种属标志基因invA和毒力基因crp的扩增条带大小均分别为580和599 bp,表明工程菌多次传代后仍具有沙门菌的特性,其减毒特性也无变化。各代质粒酶切片段大小均分别为498、1 146和2 622 bp,表明多次传代并不影响质粒的稳定性,且重组质粒能在沙门菌C500中维持正常拷贝功能。【结论】本研究构建的重组质粒和工程菌疫苗均具有良好的稳定性,且在导入机体后能正常表达,可用于动物免疫去势的研究。; 关键词基因疫苗免疫去势 GNRH KISS1 NKB; Keywords gene vaccine immune castration GnRH KISS1 NKB; 分类号 S852.4 [农业科学—基础兽医学]; 在线阅读下载PDF 职称材料

题名双表达去势DNA疫苗的构建及其稳定性研究被引量：2: 2; 作者许学林杨波荆焕松胡映红王风华孙培皓熊家军; 机构华中农业大学动物科学技术学院; 出处《中国畜牧兽医》 CAS 北大核心 2021年第5期1745-1754,共10页; 基金国家自然科学基金项目(31972533) 国家重点研发计划(2018YFC1706602-05)。; 文摘试验旨在构建一种更安全有效的新型免疫去势DNA疫苗,通过选取下丘脑-垂体-性腺轴(hypot halamic-pituitary-gonadal axis,HPG)的上游调控基因吻素1(KISS1)和促性腺激素释放激素(GnRH)作为靶标,借助2A肽的自剪切功能,引入平衡致死系统代替抗性基因筛选流程,成功将GnRH和KISS1转入非抗性筛选质粒pVAX-asd中,酶切验证和测序对比验证目的基因的插入方向和序列完全正确。重组质粒转染HeLa细胞,反转录后扩增目的基因结果显示,重组质粒在真核细胞内能够正常转录,保证重组质粒在导入机体后能够正常表达,从而引起特异性免疫反应。将构建成功的质粒转入减毒的猪霍乱沙门氏菌C500中,获得可直接口服免疫的活载体疫苗,酶切和测序结果表明,双表达重组质粒成功导入工程菌中。将活菌疫苗在体外连续传代50次,选取0、2、5、10、20、30、40、50代的菌株进行稳定性研究,生长曲线检测结果表明,工程菌在体外连续传代50次的过程中,其生长特性无明显变化,且与减毒猪霍乱沙门氏菌C500的生长特性一致,未因携带质粒发生明显变化;同时将各代菌液扩增沙门氏菌标志基因(invA)和毒力基因(crp),结果表明多次传代后工程菌仍然具有沙门氏菌的特性,其减毒特性也无变化。各代菌液质粒酶切验证显示,多次传代并不影响质粒的稳定性,重组双表达质粒能够在沙门氏菌C500中维持正常拷贝功能。综上所述,该重组质粒和工程菌疫苗均具有良好的稳定性,可直接应用于动物免疫去势的研究。; 关键词 DNA疫苗 KISS1 GNRH 2A肽免疫去势稳定性; Keywords DNA vaccine KISS1 GnRH 2A peptide immune castration stability; 分类号 S852.4 [农业科学—基础兽医学]; 在线阅读下载PDF 职称材料

题名外源褪黑素对鹿茸软骨细胞生长发育的影响被引量：5: 3; 作者李可可孙旭阳陈超荆焕松许学林游思赵靖波熊家军; 机构华中农业大学动物科学技术学院中国农业科学院特产研究所; 出处《中国畜牧兽医》 CAS 北大核心 2020年第7期1997-2004,共8页; 基金国家自然科学基金项目(31972533)。; 文摘试验旨在探讨褪黑素对体外培养的鹿茸软骨细胞增殖、周期及凋亡的影响。利用甲苯胺蓝、茜素红S、阿利新蓝染色鉴定软骨细胞,采用外源添加褪黑素的方法,用不同浓度(0、400、800、1200、1600和2000 pg/mL)、不同时间(24、48和72 h)处理鹿茸软骨细胞,CCK-8法检测细胞增殖。选取800 pg/mL褪黑素处理软骨细胞24 h,利用流式细胞仪检测细胞周期的分布及细胞凋亡情况,采用ELISA试剂盒检测细胞培养液中睾酮含量。结果显示,经不同浓度的褪黑素处理鹿茸软骨细胞不同时间后,800 pg/mL褪黑素处理鹿茸软骨细胞24 h细胞活力极显著增加(P<0.01)。软骨细胞经褪黑素处理后,与对照组相比,褪黑素处理组细胞G1期比例显著降低(P<0.05);G2期比例极显著增加(P<0.01),细胞被阻滞在G2期;褪黑素处理组细胞早期凋亡率无显著变化(P>0.05),晚期凋亡率显著下降(P<0.05);ELISA检测睾酮分泌水平均显著上升(P<0.05)。综上,外源添加800 pg/mL褪黑素可以促进鹿茸软骨细胞的增殖,抑制软骨细胞的晚期凋亡,促进睾酮的分泌;以上结果可为阐明褪黑素参与鹿茸生长发育机制提供参考。; 关键词鹿茸褪黑素软骨细胞增殖; Keywords velvet antler melatonin chondrocytes proliferation; 分类号 S825 [农业科学—畜牧学]; 在线阅读下载PDF 职称材料

题名一例中华穿山甲孕期激素监测和双胞胎卵型鉴定被引量：2: 4; 作者燕洪美许学林安富宇王凯夏彦玲华彦; 机构东北林业大学野生动物与自然保护地学院广东省森林培育与保护利用重点实验室/广东省林业科学研究院; 出处《林业与环境科学》 2022年第3期18-24,共7页; 基金广东省林业科技创新项目(2022KJCX008) 国家林业和草原局项目“穿山甲收容救护及其繁育技术研究”。; 文摘 2020年8月,广东省野生动物监测救护中心救护的一只成体雌性中华穿山甲Manis pentadactyla,在人工饲养条件下自然受孕,妊娠约11周后产出无生命体征的双胞胎。在合圈前及孕期,收集雌性的粪便,采用酶联免疫法(Elisa),测定激素促黄体素、促卵泡素、催乳素、孕激素、睾酮和雌二醇的含量。结果发现,雌二醇水平在妊娠第7周达到最高(1 050.14 pmol/L);促黄体素水平在妊娠第4周达到最高(53.95 mIU/mL);促卵泡素水平在妊娠第5周达到最高(26.08 mIU/mL);孕激素含量在妊娠第2周达到最高(22.57 ng/mL)后波动性下降;睾酮水平呈波动变化,但在合圈前后无明显差异;催乳素水平在流产当天最低(797.15 mIU/L)。两胚胎体重分别为25.4 g和18.3 g,总长分别为15.8 cm和13.6 cm;头部、躯干、尾部和四肢均分化良好,但有差异,鳞片覆盖背部、尾部和部分四肢;四爪形状良好,未角质化;眼部未发育完全;唇和舌头具备形态;肋骨具备明显轮廓;可看到部分肠道形状。利用微卫星标记技术鉴定其为异卵双胞胎。; 关键词人工饲养中华穿山甲双胞胎异卵; Keywords captivity Manis pentadactyla twins dizygotie; 分类号 S718.6 [农业科学—林学]; 在线阅读下载PDF 职称材料

题名救护前期穿山甲的日常行为表达被引量：1: 5; 作者冉重阳龙永彬许学林安富宇吕春贺王鹤华彦; 机构广东省森林培育与保护利用重点实验室/广东省林业科学研究院广东省野生动物监测救护中心; 出处《林业与环境科学》 2022年第5期38-43,共6页; 基金珍稀濒危物种调查监管与行业规范项目“穿山甲收容救护及其繁育技术研究” 广东省林业科技创新项目(2022KJCX008)。; 文摘穿山甲作为习性特化的动物,对外界刺激极其敏感。新救护个体经过长途运输或圈禁,容易因应激反应剧烈导致动物拒食或死亡。为了解救护前期穿山甲的行为特点,进而提高穿山甲的救护存活率,利用目标动物取样法对处于救护前期的中华穿山甲Manis pentadactyla和马来穿山甲M.javanica进行行为的观察记录,共得到11636 min有效观察时间,进一步分析发现:穿山甲休息行为出现的频次和时间占比最高,分别为8.25次/d、66.70%;活动行为中行走出现的频次和时间占比最高,分别为3.81次/d、26.01%;由于环境空间的限制和人为因素的影响,穿山甲行为的多样性降低,嗅探、挖土和站立行为的占比仅为2.45%、1.86%、0.99%。因此,应对环境进行丰荣,模拟野外生活环境,从而增加其行为的多样性,减少刻板行为的发生。; 关键词中华穿山甲马来穿山甲救护前期行为表达; Keywords Manis pentadactyla Manis javanica pre-rescue behavioral expression; 分类号 Q95-331 [生物学—动物学]; 在线阅读下载PDF 职称材料

	题名	作者	出处	发文年	被引量	操作
1	3种去势疫苗的构建及稳定性研究	彭静娜刘丽娟吕志远于志蓉孙旭阳许学林荆焕松熊家军	《中国畜牧兽医》 CSCD 北大核心	2024	0	在线阅读下载PDF 职称材料
2	双表达去势DNA疫苗的构建及其稳定性研究	许学林杨波荆焕松胡映红王风华孙培皓熊家军	《中国畜牧兽医》 CAS 北大核心	2021	2	在线阅读下载PDF 职称材料
3	外源褪黑素对鹿茸软骨细胞生长发育的影响	李可可孙旭阳陈超荆焕松许学林游思赵靖波熊家军	《中国畜牧兽医》 CAS 北大核心	2020	5	在线阅读下载PDF 职称材料
4	一例中华穿山甲孕期激素监测和双胞胎卵型鉴定	燕洪美许学林安富宇王凯夏彦玲华彦	《林业与环境科学》	2022	2	在线阅读下载PDF 职称材料
5	救护前期穿山甲的日常行为表达	冉重阳龙永彬许学林安富宇吕春贺王鹤华彦	《林业与环境科学》	2022	1	在线阅读下载PDF 职称材料