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缺氧预处理诱导大鼠心肌细胞差异表达microRNA的芯片筛选与生物信息学分析 被引量:4
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作者 何淑芳 朱海娟 +3 位作者 程洁 许士进 杨婉 张野 《中国药理学通报》 CAS CSCD 北大核心 2015年第7期940-944,共5页
目的筛选缺氧预处理(hypoxia preconditioning,HPC)诱导成年大鼠心肌细胞差异表达的microRNA(miRNA),并预测分析miRNA调控的靶基因与功能。方法体外分离培养成年大鼠心室肌细胞,分为对照组(CON)和缺氧预处理组(HPC),CON组细胞正常培养,... 目的筛选缺氧预处理(hypoxia preconditioning,HPC)诱导成年大鼠心肌细胞差异表达的microRNA(miRNA),并预测分析miRNA调控的靶基因与功能。方法体外分离培养成年大鼠心室肌细胞,分为对照组(CON)和缺氧预处理组(HPC),CON组细胞正常培养,HPC组细胞经历10 min缺氧和30 min再给氧,提取心肌细胞总RNA,行miRNA芯片筛选,qRT-PCR验证芯片结果。利用软件预测差异表达miRNA调控的靶基因,分析靶基因富集的基因功能(gene ontology,GO)和信号通路(pathway)。结果与CON组相比,HPC可诱导大鼠心肌细胞miRNA表达谱发生明显改变,共有12个miRNA上调,14个miRNA下调(P<0.01,FDR<0.05);选择其中荧光信号值>500的7个miRNA,用于生物信息学分析。qRT-PCR检测miR-133b-5p、miR-664-1-5p、miR-6216水平,变化趋势与芯片结果一致。生物信息学分析显示差异表达miRNA所调控的靶基因功能明显富集于27个GO和6条信号通路。结论 HPC可诱导成年大鼠心肌细胞miRNA表达谱明显改变,这些差异表达miRNA可能通过调控靶基因参与HPC介导的心肌细胞保护作用。 展开更多
关键词 心肌细胞 成年大鼠 缺氧预处理 MICRORNA 芯片 生物信息学
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多柔比星对心肌细胞的损伤作用及对microRNA的影响 被引量:2
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作者 杨婉 金世云 +2 位作者 许士进 张野 何淑芳 《安徽医科大学学报》 CAS 北大核心 2017年第1期86-90,共5页
目的探讨多柔比星对原代乳鼠心肌细胞的损伤作用及其对微小RNA(miRNA)表达的影响。方法原代培养SD大鼠乳鼠心肌细胞,随机分为6组:对照组,不同浓度多柔比星(0.125、0.25、0.5、1、2μmol/L)处理组。对照组细胞正常培养,处理组细胞使用终... 目的探讨多柔比星对原代乳鼠心肌细胞的损伤作用及其对微小RNA(miRNA)表达的影响。方法原代培养SD大鼠乳鼠心肌细胞,随机分为6组:对照组,不同浓度多柔比星(0.125、0.25、0.5、1、2μmol/L)处理组。对照组细胞正常培养,处理组细胞使用终浓度分别为0.125、0.25、0.5、1、2μmol/L的多柔比星处理24 h。倒置显微镜下观察心肌细胞搏动频率,CCK-8法检测细胞活力,微板法检测细胞培养液中乳酸脱氢酶(LDH)活性,荧光定量RT-PCR(qRTPCR)法检测心肌细胞miR-133a-5p、miR-133b-5p、miR-6216和miR-30e-5p表达水平。结果与对照组相比,多柔比星减慢心肌细胞搏动频率,降低细胞活力,升高LDH活性(P<0.05)。qRT-PCR结果显示,与对照组相比,多柔比星1μmol/L处理组心肌细胞miR-133b-5p、miR-6216和miR-30e-5p表达显著上调,miR-133a-5p表达显著下调。结论多柔比星对原代乳鼠心肌细胞具有损伤作用,其机制可能与调控miR-133a-5p、miR-133b-5p、miR-6216和miR-30e-5p等miRNA表达有关。 展开更多
关键词 多柔比星 心肌毒性 乳鼠心肌细胞 微小RNA
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利用定量加压充气球囊制备大鼠心肌缺血再灌注损伤模型 被引量:1
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作者 许士进 何淑芳 +2 位作者 金世云 胡军 张野 《安徽医科大学学报》 CAS 北大核心 2015年第8期1180-1183,共4页
雄性SD大鼠随机分为3组,每组20只:假手术组(SHAM组)、球囊缺血再灌注组(SI/R组)、经典缺血再灌注组(I/R组)。3组均在冠状动脉左前降支下穿线,SHAM组仅将未充气的球囊固定于穿线处;SI/R组固定球囊后,通过加压泵对球囊充气和放气建立缺血... 雄性SD大鼠随机分为3组,每组20只:假手术组(SHAM组)、球囊缺血再灌注组(SI/R组)、经典缺血再灌注组(I/R组)。3组均在冠状动脉左前降支下穿线,SHAM组仅将未充气的球囊固定于穿线处;SI/R组固定球囊后,通过加压泵对球囊充气和放气建立缺血再灌注损伤模型;I/R组采用传统的造模方法。记录血流动力学和心电图的特异性改变,再灌注2 h后取心脏进行TTC染色测心肌梗死面积。结果显示,SI/R和I/R组均可造成显著心肌缺血,两组死亡率和心肌梗死体积(IS/ARR)的差异无统计学意义。 展开更多
关键词 动物模型 心脏 缺血再灌注 充气 球囊
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吗啡预处理对H9c2心肌细胞缺氧/复氧时microRNA表达的影响 被引量:10
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作者 韩正怡 何淑芳 +3 位作者 程洁 许士进 杨婉 张野 《中国药理学通报》 CAS CSCD 北大核心 2015年第11期1552-1557,共6页
目的探讨吗啡预处理(morphine preconditioning,MPC)对H9c2心肌细胞缺氧/复氧(hypoxia reoxygenation,H/R)时microRNA(miRNA)表达的影响,为明确其机制提供参考。方法培养H9c2心肌细胞,随机分为3组(n=4):1正常对照组(CON):H9c2心肌细胞置... 目的探讨吗啡预处理(morphine preconditioning,MPC)对H9c2心肌细胞缺氧/复氧(hypoxia reoxygenation,H/R)时microRNA(miRNA)表达的影响,为明确其机制提供参考。方法培养H9c2心肌细胞,随机分为3组(n=4):1正常对照组(CON):H9c2心肌细胞置于DMEM/F12细胞培养液常规培养;2缺氧/复氧组(H/R):对心肌细胞行缺氧5h/复氧1h处理;3吗啡预处理组(MPC+H/R):在H/R前,应用1μmol·L^(-1)吗啡预处理10 min。处理结束后,采用CCK-8法检测细胞增殖、化学比色法检测细胞培养液中乳酸脱氢酶(LDH)活性、Annexin-V-FITC/PI双染法检测细胞凋亡、Western blot法检测细胞内Fas蛋白表达、荧光定量RT-PCR法检测细胞miRNA表达水平。结果与CON组比,H/R组细胞活力降低,LDH活性升高,细胞凋亡率增加,Fas蛋白水平升高(P<0.01);MPC可明显提高细胞活力,降低LDH活性,抑制细胞凋亡,降低Fas蛋白水平(P<0.01)。qRT-PCR结果显示,与CON组相比,H/R组miR-133a-5p、miR-133b-5p、miR-664-1-5p、miR-6216和let-7e-5p表达明显下调,而MPC能明显地抑制H/R对这些miRNA表达的下调作用(P<0.01)。结论吗啡预处理减轻H9c2心肌细胞缺氧/复氧损伤可能与调控miR-133a-5p、miR-133b-5p、miR-664-1-5p、miR-6216和let7e-5p等miRNA表达有关。 展开更多
关键词 吗啡预处理 H9C2心肌细胞 缺氧/复氧 凋亡 FAS 微小RNA
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特定药物激活受体介导PVN谷氨酸能神经元抑制对小鼠心肌缺血/再灌注损伤的影响 被引量:2
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作者 陈振星 何淑芳 +2 位作者 许士进 王斌 张野 《中国药理学通报》 CAS CSCD 北大核心 2022年第1期47-53,共7页
目的探究通过化学遗传特定药物激活受体(designer receptors exclusively activated by designer drugs,DREADDs)抑制下丘脑室旁核(hypothalamic paraventricular nucleus,PVN)谷氨酸能神经元兴奋性对小鼠心肌缺血/再灌注损伤(ischemia ... 目的探究通过化学遗传特定药物激活受体(designer receptors exclusively activated by designer drugs,DREADDs)抑制下丘脑室旁核(hypothalamic paraventricular nucleus,PVN)谷氨酸能神经元兴奋性对小鼠心肌缺血/再灌注损伤(ischemia reperfusion,IR)的影响。方法建立小鼠PVN置管模型单笼饲养3 d后,PVN注射抑制病毒rAAV-CaMKⅡα-hM4D(Gi)-EGFP或对照病毒rAAV-CaMKⅡα-EGFP。病毒感染3周后,建立小鼠IR模型。通过术前1 h腹腔注射氯氮平-N氧化物,诱导PVN谷氨酸能神经元抑制。测定心肌梗死面积、血清cTnI浓度,监测小鼠心电图,检测心肌内ERK、cleaved caspase-3水平,观察PVN内EGFP、CaMKII和c-Fos表达。结果与Sham组相比,IR组IS/AAR增大,血清cTnI浓度升高,PVN内c-fos表达增加,心肌组织cleaved caspase-3表达增加,pERK水平降低。然而,hM4D(Gi)DREADD介导的PVN谷氨酸能神经元抑制可明显减少IS/AAR,降低cTnI浓度,抑制PVN内c-fos表达,并降低心肌cleaved caspase-3表达,升高pERK水平。结论通过化学遗传术DREADD抑制PVN谷氨酸能神经元兴奋性可减轻小鼠IR损伤。 展开更多
关键词 化学遗传 下丘脑室旁核 谷氨酸能神经元 心肌缺血/再灌注损伤 ERK 腺相关病毒
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