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Adipsin腺病毒载体构建及对2型糖尿病大鼠的治疗作用
被引量：
3
1
作者
张磊
周艳
+4 位作者
闫姗姗
解裕萍
耿盼盼
孙茂盛
李鸿钧
《生物学杂志》
CAS
CSCD
2016年第5期58-62,共5页
脂肪因子adipsin是由脂肪细胞分泌的一类细胞信号蛋白,其在刺激胰岛素分泌、控制血糖中具有重要的调控作用。以重组腺病毒系统作为载体,将adipsin转移至Zucker Diabetic Fatty(ZDF)2型糖尿病大鼠体内,对大鼠进行基因治疗探索,为进一步...
脂肪因子adipsin是由脂肪细胞分泌的一类细胞信号蛋白,其在刺激胰岛素分泌、控制血糖中具有重要的调控作用。以重组腺病毒系统作为载体,将adipsin转移至Zucker Diabetic Fatty(ZDF)2型糖尿病大鼠体内,对大鼠进行基因治疗探索,为进一步研究脂肪因子adipsin与代谢性疾病如2型糖尿病等之间相互作用机制提供了前期的基础。首先,通过构建携带adipsin的重组腺病毒质粒p Ad Easy-CMV-adipsin,并在HEK293细胞中成功包装出重组腺病毒Ad-adipsin;其次,通过PCR和Western blotting检测ADIPSIN蛋白在HEK293细胞中的表达;最后,测定重组腺病毒Ad-adipsin滴度,并通过尾静脉注射的方式,将重组腺病毒Ad-adipsin导入2型糖尿病模型大鼠体内,评价脂肪因子adipsin的基因治疗作用。研究结果显示,2型糖尿病模型大鼠ZDF(fa/fa)的空腹血糖值(FPG)、空腹胰岛素值(FINS)、血清总胆固醇(TC)、甘油三脂(TG)、低密度脂蛋白(LDL-c)等与注射重组腺病毒Ad-lac Z的对照组相比有显著下降(P<0.05),并且胰岛素抵抗指数(HOMA-IR)显著降低(P<0.05),以上结果表明,重组腺病毒Ad-adipsin可以有效改善2型糖尿病模型ZDF大鼠的糖、脂质代谢紊乱,对大鼠2型糖尿病发生发展具有一定的保护效果。
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关键词
adipsin
ZDF大鼠
2型糖尿病
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职称材料
恒河猴miR-125a-3p慢病毒载体的构建、鉴定以及功能研究
2
作者
刘雅琳
周艳
+4 位作者
耿盼盼
解裕萍
乔洪图
孙茂盛
李鸿钧
《生物学杂志》
CAS
CSCD
2017年第3期1-5,共5页
构建携带miR-125a-3p过表达与抑制表达shRNA的慢病毒,研究miR-125a-3p对轮状病毒感染乳鼠导致的腹泻的影响,为进一步研究miR-125a-3p对轮状病毒增殖过程中的影响及探究其机制提供前期研究基础。设计miR-125a-3p前体序列及其反向互补序列...
构建携带miR-125a-3p过表达与抑制表达shRNA的慢病毒,研究miR-125a-3p对轮状病毒感染乳鼠导致的腹泻的影响,为进一步研究miR-125a-3p对轮状病毒增殖过程中的影响及探究其机制提供前期研究基础。设计miR-125a-3p前体序列及其反向互补序列,与慢病毒骨架质p LVshRNA-EGFP(2A)Puro载体进行酶切连接,构建过表达与抑制表达miR-125a-3p的慢病毒表达载体。利用HEK293Ta细胞包装慢病毒颗粒,测定病毒滴度后,将获得的miR-125a-3p过表达慢病毒颗粒感染MA104细胞和灌胃感染乳鼠,检测miR-125a-3p的表达。同时对乳鼠进行轮状病毒攻毒试验,观察腹泻情况。研究成功构建了过表达及抑制miR-125a-3p表达的慢病毒载体,获得高效的过表达及抑制miR-125a-3p的慢病毒颗粒,成功感染MA104细胞,以及在乳鼠小肠组织有表达。同时发现miR-125a-3p过表达慢病毒感染乳鼠后对轮状病毒引起的腹泻有明显的抑制作用。
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关键词
miR-125a-3p
慢病毒
过表达载体
抑制表达载体
乳鼠
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职称材料
下调人脐带间充质干细胞Mbd3基因shRNA慢病毒的构建及鉴定
3
作者
闫姗姗
周艳
+4 位作者
李溪
张磊
孙茂盛
解裕萍
李鸿钧
《生物学杂志》
CAS
CSCD
2015年第3期15-20,共6页
研究构建靶向抑制人Mbd3表达的sh RNA慢病毒颗粒,感染人脐带间充质干细胞并用嘌呤霉素筛选获得Mbd3稳定下调的细胞系,为进一步探讨Mbd3在诱导型多潜能干细胞形成中的作用提供实验基础。研究根据Gene Bank中公布的Mbd3基因序列设计特异性...
研究构建靶向抑制人Mbd3表达的sh RNA慢病毒颗粒,感染人脐带间充质干细胞并用嘌呤霉素筛选获得Mbd3稳定下调的细胞系,为进一步探讨Mbd3在诱导型多潜能干细胞形成中的作用提供实验基础。研究根据Gene Bank中公布的Mbd3基因序列设计特异性si RNA干扰序列并合成可产生sh RNA的双链DNA,经双酶切后克隆至p LVsh RNA-EGFP(2A)Puro载体上构建慢病毒重组质粒,转化DH5α大肠杆菌PCR检测筛选阳性质粒,利用HEK293Ta包装产生含有Mbd3sh RNA的慢病毒颗粒。通过RT-PCR和Western blot检测慢病毒感染人脐带间充质干细胞(h UC-MSC)后Mbd3的转录和蛋白表达情况,进一步检测重组慢病毒对Mbd3的沉默效果并筛选出最佳抑制效果的sh RNA慢病毒载体。结果显示成功构建并筛选出下调Mbd3的最佳慢病毒干扰载体,慢病毒感染人脐带间充质干细胞48h后于荧光显微镜下可见绿色荧光,经嘌呤霉素筛选9 d后,RT-PCR检测Mbd3表达显著降低,Western blot检测Mbd3蛋白表达明显减少。说明构建的sh RNA重组慢病毒包装成功,具有较高的感染活性,可有效抑制人脐带间充质干细胞Mbd3的表达,为后续研究脐带间充质干细胞跨胚层分化打下前期研究基础。
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关键词
Mbd3基因
基因沉默
慢病毒载体
RNA干扰
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职称材料
题名
Adipsin腺病毒载体构建及对2型糖尿病大鼠的治疗作用
被引量：
3
1
作者
张磊
周艳
闫姗姗
解裕萍
耿盼盼
孙茂盛
李鸿钧
机构
中国医学科学院北京协和医学院医学生物学研究所云南省重大传染病疫苗研发重点实验室
出处
《生物学杂志》
CAS
CSCD
2016年第5期58-62,共5页
基金
云南省科技计划项目(2014BC008)
协和青年基金资助和中央高校基本科研业务费专项资金资助(33320140082)
文摘
脂肪因子adipsin是由脂肪细胞分泌的一类细胞信号蛋白,其在刺激胰岛素分泌、控制血糖中具有重要的调控作用。以重组腺病毒系统作为载体,将adipsin转移至Zucker Diabetic Fatty(ZDF)2型糖尿病大鼠体内,对大鼠进行基因治疗探索,为进一步研究脂肪因子adipsin与代谢性疾病如2型糖尿病等之间相互作用机制提供了前期的基础。首先,通过构建携带adipsin的重组腺病毒质粒p Ad Easy-CMV-adipsin,并在HEK293细胞中成功包装出重组腺病毒Ad-adipsin;其次,通过PCR和Western blotting检测ADIPSIN蛋白在HEK293细胞中的表达;最后,测定重组腺病毒Ad-adipsin滴度,并通过尾静脉注射的方式,将重组腺病毒Ad-adipsin导入2型糖尿病模型大鼠体内,评价脂肪因子adipsin的基因治疗作用。研究结果显示,2型糖尿病模型大鼠ZDF(fa/fa)的空腹血糖值(FPG)、空腹胰岛素值(FINS)、血清总胆固醇(TC)、甘油三脂(TG)、低密度脂蛋白(LDL-c)等与注射重组腺病毒Ad-lac Z的对照组相比有显著下降(P<0.05),并且胰岛素抵抗指数(HOMA-IR)显著降低(P<0.05),以上结果表明,重组腺病毒Ad-adipsin可以有效改善2型糖尿病模型ZDF大鼠的糖、脂质代谢紊乱,对大鼠2型糖尿病发生发展具有一定的保护效果。
关键词
adipsin
ZDF大鼠
2型糖尿病
Keywords
adipsin
ZDF rat
type 2 diabetes
分类号
Q785 [生物学—分子生物学]
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职称材料
题名
恒河猴miR-125a-3p慢病毒载体的构建、鉴定以及功能研究
2
作者
刘雅琳
周艳
耿盼盼
解裕萍
乔洪图
孙茂盛
李鸿钧
机构
中国医学科学院北京协和医学院医学生物学研究所云南省重大传染病疫苗研发重点实验室
出处
《生物学杂志》
CAS
CSCD
2017年第3期1-5,共5页
基金
十二五重大新药创制(2014ZX09102041004)
中国医学科学院医学与健康科技创新工程项目(2016-I2M)
+1 种基金
云南省应用基础研究计划项目(2016FB034)
云南省科技计划项目(2014BC008)
文摘
构建携带miR-125a-3p过表达与抑制表达shRNA的慢病毒,研究miR-125a-3p对轮状病毒感染乳鼠导致的腹泻的影响,为进一步研究miR-125a-3p对轮状病毒增殖过程中的影响及探究其机制提供前期研究基础。设计miR-125a-3p前体序列及其反向互补序列,与慢病毒骨架质p LVshRNA-EGFP(2A)Puro载体进行酶切连接,构建过表达与抑制表达miR-125a-3p的慢病毒表达载体。利用HEK293Ta细胞包装慢病毒颗粒,测定病毒滴度后,将获得的miR-125a-3p过表达慢病毒颗粒感染MA104细胞和灌胃感染乳鼠,检测miR-125a-3p的表达。同时对乳鼠进行轮状病毒攻毒试验,观察腹泻情况。研究成功构建了过表达及抑制miR-125a-3p表达的慢病毒载体,获得高效的过表达及抑制miR-125a-3p的慢病毒颗粒,成功感染MA104细胞,以及在乳鼠小肠组织有表达。同时发现miR-125a-3p过表达慢病毒感染乳鼠后对轮状病毒引起的腹泻有明显的抑制作用。
关键词
miR-125a-3p
慢病毒
过表达载体
抑制表达载体
乳鼠
Keywords
miR-125a-3p
lentivirus vector
overexpression vector
suppression vector
suckling mice
分类号
Q78 [生物学—分子生物学]
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职称材料
题名
下调人脐带间充质干细胞Mbd3基因shRNA慢病毒的构建及鉴定
3
作者
闫姗姗
周艳
李溪
张磊
孙茂盛
解裕萍
李鸿钧
机构
中国医学科学院北京协和医学院医学生物学研究所云南省重大传染病疫苗研发重点实验室
昆明医科大学附属第一医院骨科
出处
《生物学杂志》
CAS
CSCD
2015年第3期15-20,共6页
基金
云南省重点新产品开发计划(2012AE001)
协和青年基金和中央高校基本科研业务费专项资金(33320140082)
文摘
研究构建靶向抑制人Mbd3表达的sh RNA慢病毒颗粒,感染人脐带间充质干细胞并用嘌呤霉素筛选获得Mbd3稳定下调的细胞系,为进一步探讨Mbd3在诱导型多潜能干细胞形成中的作用提供实验基础。研究根据Gene Bank中公布的Mbd3基因序列设计特异性si RNA干扰序列并合成可产生sh RNA的双链DNA,经双酶切后克隆至p LVsh RNA-EGFP(2A)Puro载体上构建慢病毒重组质粒,转化DH5α大肠杆菌PCR检测筛选阳性质粒,利用HEK293Ta包装产生含有Mbd3sh RNA的慢病毒颗粒。通过RT-PCR和Western blot检测慢病毒感染人脐带间充质干细胞(h UC-MSC)后Mbd3的转录和蛋白表达情况,进一步检测重组慢病毒对Mbd3的沉默效果并筛选出最佳抑制效果的sh RNA慢病毒载体。结果显示成功构建并筛选出下调Mbd3的最佳慢病毒干扰载体,慢病毒感染人脐带间充质干细胞48h后于荧光显微镜下可见绿色荧光,经嘌呤霉素筛选9 d后,RT-PCR检测Mbd3表达显著降低,Western blot检测Mbd3蛋白表达明显减少。说明构建的sh RNA重组慢病毒包装成功,具有较高的感染活性,可有效抑制人脐带间充质干细胞Mbd3的表达,为后续研究脐带间充质干细胞跨胚层分化打下前期研究基础。
关键词
Mbd3基因
基因沉默
慢病毒载体
RNA干扰
Keywords
Mbd3 gene
gene silencing
lentiviral vector
RNA interference
分类号
Q782 [生物学—分子生物学]
R556.5 [医药卫生—血液循环系统疾病]
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职称材料
题名
作者
出处
发文年
被引量
操作
1
Adipsin腺病毒载体构建及对2型糖尿病大鼠的治疗作用
张磊
周艳
闫姗姗
解裕萍
耿盼盼
孙茂盛
李鸿钧
《生物学杂志》
CAS
CSCD
2016
3
在线阅读
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职称材料
2
恒河猴miR-125a-3p慢病毒载体的构建、鉴定以及功能研究
刘雅琳
周艳
耿盼盼
解裕萍
乔洪图
孙茂盛
李鸿钧
《生物学杂志》
CAS
CSCD
2017
0
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下载PDF
职称材料
3
下调人脐带间充质干细胞Mbd3基因shRNA慢病毒的构建及鉴定
闫姗姗
周艳
李溪
张磊
孙茂盛
解裕萍
李鸿钧
《生物学杂志》
CAS
CSCD
2015
0
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职称材料
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