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FLT3及FLT3-ITD突变体在HEK293T细胞的表达和纯化
1
作者
杨凡
杜佳慧
+7 位作者
吴洁
袁濮玉
苏倩
撖荣
邱桥成
薛胜利
刘松柏
孙中文
《细胞与分子免疫学杂志》
CAS
CSCD
北大核心
2018年第3期242-246,共5页
目的构建fms相关酪氨酸激酶3(FLT3)及FLT3-内部串联重复序列(FLT3-ITD)突变体的真核表达载体,在HEK293T细胞中稳定表达并通过免疫沉淀技术对蛋白进行纯化。方法从正常人及FLT3-ITD阳性急性髓系白血病患者骨髓干细胞中提取RNA,反转录为cD...
目的构建fms相关酪氨酸激酶3(FLT3)及FLT3-内部串联重复序列(FLT3-ITD)突变体的真核表达载体,在HEK293T细胞中稳定表达并通过免疫沉淀技术对蛋白进行纯化。方法从正常人及FLT3-ITD阳性急性髓系白血病患者骨髓干细胞中提取RNA,反转录为cDNA,使用带有流感病毒血凝素(HA)标签序列的特异性引物,采用PCR扩增出人FLT3及FLT3-ITD突变体编码区全长并克隆到CD530A-T2A-GFP载体上。重组的FLT3及突变体FLT3-ITD表达质粒,通过脂质体polyJ et转染到HEK293T细胞进行表达。使用HA抗体结合微珠沉淀带HA标签的FLT3及FLT3-ITD突变体蛋白。然后,通过HA肽段将蛋白竞争洗脱下来,洗脱下来的蛋白经银染染色。结果 FLT3及FLT3-ITD突变体全长编码序列成功构建到CD530A-T2A-GFP载体上,Western blot法及聚丙烯酰胺凝胶银染法成功检测到FLT3及FLT3-ITD突变体蛋白的表达、纯化。结论在HEK293T细胞中成功表达并纯化FLT3及FLT3-ITD突变体蛋白。
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关键词
FMS样的酪氨酸激酶3
突变体
蛋白纯化
FMS样的酪氨酸激酶3-内部串联重复
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职称材料
题名
FLT3及FLT3-ITD突变体在HEK293T细胞的表达和纯化
1
作者
杨凡
杜佳慧
吴洁
袁濮玉
苏倩
撖荣
邱桥成
薛胜利
刘松柏
孙中文
机构
苏州卫生职业技术学院苏州检验医学生物技术重点实验室
苏州大学附属第一医院血液科
出处
《细胞与分子免疫学杂志》
CAS
CSCD
北大核心
2018年第3期242-246,共5页
基金
国家自然科学基金(81470296,31701198)
江苏省自然科学基金(BK20170386)
+5 种基金
江苏省“科教强卫工程”青年医学人才项目(QNRC2016719,QNRC2016771)
江苏省卫生计生委医学科研课题面上项目(H2017074)
江苏省六大人才高峰(2016-WSN-123)
江苏省教育厅大学生实践创新训练项目(201712688003Y)
江苏省教育厅“青蓝工程”项目(2016)
苏州卫生职业技术学院重点项目(szwzy201701)
文摘
目的构建fms相关酪氨酸激酶3(FLT3)及FLT3-内部串联重复序列(FLT3-ITD)突变体的真核表达载体,在HEK293T细胞中稳定表达并通过免疫沉淀技术对蛋白进行纯化。方法从正常人及FLT3-ITD阳性急性髓系白血病患者骨髓干细胞中提取RNA,反转录为cDNA,使用带有流感病毒血凝素(HA)标签序列的特异性引物,采用PCR扩增出人FLT3及FLT3-ITD突变体编码区全长并克隆到CD530A-T2A-GFP载体上。重组的FLT3及突变体FLT3-ITD表达质粒,通过脂质体polyJ et转染到HEK293T细胞进行表达。使用HA抗体结合微珠沉淀带HA标签的FLT3及FLT3-ITD突变体蛋白。然后,通过HA肽段将蛋白竞争洗脱下来,洗脱下来的蛋白经银染染色。结果 FLT3及FLT3-ITD突变体全长编码序列成功构建到CD530A-T2A-GFP载体上,Western blot法及聚丙烯酰胺凝胶银染法成功检测到FLT3及FLT3-ITD突变体蛋白的表达、纯化。结论在HEK293T细胞中成功表达并纯化FLT3及FLT3-ITD突变体蛋白。
关键词
FMS样的酪氨酸激酶3
突变体
蛋白纯化
FMS样的酪氨酸激酶3-内部串联重复
Keywords
FLT3
mutation
protein purification
FLT3-1TD
分类号
R392.11 [医药卫生—免疫学]
Q512 [生物学—生物化学]
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题名
作者
出处
发文年
被引量
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1
FLT3及FLT3-ITD突变体在HEK293T细胞的表达和纯化
杨凡
杜佳慧
吴洁
袁濮玉
苏倩
撖荣
邱桥成
薛胜利
刘松柏
孙中文
《细胞与分子免疫学杂志》
CAS
CSCD
北大核心
2018
0
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