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磁性纳米颗粒Fe_3O_4@PEI介导靶向自杀基因联合磁流体热疗对肝癌移植瘤的抑制作用 被引量：6
1
作者 袁晨燕 安艳丽 王玲 《中国肿瘤生物治疗杂志》 CAS CSCD 北大核心 2018年第9期913-919,共7页
目的:探讨磁性纳米颗粒Fe_3O_4@PEI介导靶向自杀基因联合磁流体热疗对肝癌移植瘤的特异性杀伤作用。方法:亚克隆基因重组法构建靶向肝癌的自杀基因p[HRE]AFP-HSVTK和肿瘤细胞成像报告基因载体p[HRE]AFP-Luc,并用限制性内切酶凝胶电泳法... 目的:探讨磁性纳米颗粒Fe_3O_4@PEI介导靶向自杀基因联合磁流体热疗对肝癌移植瘤的特异性杀伤作用。方法:亚克隆基因重组法构建靶向肝癌的自杀基因p[HRE]AFP-HSVTK和肿瘤细胞成像报告基因载体p[HRE]AFP-Luc,并用限制性内切酶凝胶电泳法检测重组质粒是否构建成功。共沉淀法制备Fe_3O_4纳米粒并以聚乙烯亚胺(PEI)修饰后得到磁性纳米颗粒Fe_3O_4@PEI,将其作为肿瘤基因治疗的载体和磁流体热疗的介质,并利用透射电镜、粒径仪、傅里叶转换红外光谱等对Fe_3O_4@PEI进行表征鉴定。利用小动物活体成像仪检测Fe_3O_4@PEI系统运送报告基因p[HRE]AFP-Luc至荷瘤裸鼠后的生物发光信号。p[HRE]AFP-HSVTK/Fe_3O_4@PEI作用于肝癌细胞后,以MTT法检测细胞增殖抑制率,流式细胞仪检测凋亡细胞比例,动物实验验证体内肿瘤生长速度及瘤体质量抑制效果,并用透射电镜分析肿瘤组织的亚细胞结构。结果:成功构建磁性纳米颗粒Fe_3O_4@PEI以及重组载体p[HRE]AFP-HSVTK和p[HRE]AFP-Luc,经尾静脉注射Fe_3O_4@PEI运送的p[HRE]AFP-Luc后,活体成像系统显示仅能在裸鼠肿瘤组织检测到明显的成像信号,其主要器官病理组织分析无明显病理损伤。在体外肿瘤细胞杀伤试验中,联合治疗组细胞增殖抑制率分别高于磁流体热疗组和基因治疗组([76.02±7.33)%vs (42.31±4.28)%、(47.76±4.81)%,均P<0.05],联合治疗组瘤细胞的凋亡率高于单独热疗组和基因治疗组([34.05±3.41)%vs (14.41±1.55)%、(11.64±1.20)%,均P<0.01]。体内治疗实验显示,联合治疗组移植瘤体积增长明显减慢甚至下降,瘤块质量显著小于其他单独治疗组(P<0.05);瘤块细胞亚结构出现明显的凋亡形态。结论:自杀基因p[HRE]AFP-HSVTK对肝癌细胞具有选择性杀伤作用,Fe_3O_4@PEI可以作为有效的基因治疗载体和磁流体热疗的介质,其介导的肝癌靶向治疗联合磁流体热疗能特异地抑制肝癌移植瘤。 展开更多
关键词 磁性纳米颗粒 Fe3O4@PEI 靶向基因治疗 磁流体热疗 联合治疗
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荧光载体CS-Qdots的构建及生物相容性分析 被引量：3
2
作者 袁晨燕 王玲 安艳丽 《南京医科大学学报（自然科学版）》 CSCD 北大核心 2017年第10期1227-1233,1250,共8页
目的:构建一种可通过荧光成像进行体内外示踪的纳米基因载体,并对其生物相容性进行初步评价。方法:在量子点Qdots表面修饰壳聚糖后形成荧光纳米颗粒CS-Qdots,检测其电镜形态、光学特征、表面电荷和傅里叶转换近红外光谱(FTIR),并将其注... 目的:构建一种可通过荧光成像进行体内外示踪的纳米基因载体,并对其生物相容性进行初步评价。方法:在量子点Qdots表面修饰壳聚糖后形成荧光纳米颗粒CS-Qdots,检测其电镜形态、光学特征、表面电荷和傅里叶转换近红外光谱(FTIR),并将其注射入裸鼠移植瘤内观察体内成像信号;以凝胶阻滞电泳检测CS-Qdots携带质粒DNA的能力,并利用激光共聚焦显微镜观察其转染报告基因绿色荧光蛋白在细胞内的表达情况。通过MTT试验检测细胞相对增殖率(RGR)、测定溶血率和小鼠急性毒性试验评价CS-Qdots的生物相容性。结果:电镜观察显示CS-Qdots纳米颗粒粒径为20~30 nm,zeta电位分析其表面电位为(28.02±1.15)m V,FTIR图谱显示出壳聚糖的特征谱带,发射光谱分析CS-Qdots最大发射峰值在630 nm。凝胶阻滞电泳显示纳米颗粒和DNA的比例大于10∶1混合以后不再向正极泳动,激光共聚焦观察CS-Qdots能携带质粒p EGFP-C1在Hep G2细胞内表达绿色荧光蛋白,小鼠活体成像中CS-Qdots在裸鼠移植瘤内有较强荧光成像信号。MTT试验显示,50、100、200和400μg/m L的CS-Qdots共孵育的细胞RGR分别为1.000、1.000、0.917和0.875,而相应浓度的Qdots孵育细胞RGR为1.000、0.850、0.621和0.326;浓度在100μg/m L以上的Qdots量子点溶血率均大于5%,而CS-Qdots纳米颗粒在400μg/m L以内溶血率均小于5%。小鼠尾静脉注射CS-Qdots 72 h急性毒性试验显示,与生理盐水对照组相比,没有明显的脏器病理损伤,肝肾功能正常,血细胞计数正常。结论:成功构建了荧光纳米颗粒CS-Qdots,它能有效转染基因在细胞内表达,具有较高的生物相容性,并可在体内外进行荧光成像,是可示踪基因的运送纳米载体。 展开更多
关键词 量子点 荧光纳米颗粒 可示踪基因运送 生物相容性
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p[5HRE]AFPp-p53/PEI-Fe_3O_4磁性纳米颗粒联合磁流体热疗对肝癌细胞的抑制作用 被引量：5
3
作者 赵成桂 袁晨燕 吴国球 《中国肿瘤生物治疗杂志》 CAS CSCD 北大核心 2016年第1期44-51,共8页
目的:建立p[5HRE]AFPp-p53/PEI-Fe_3O_4磁性纳米颗粒靶向基因治疗和磁流体热疗系统用于肝癌的联合治疗,以提高治疗的安全性和有效性。方法:亚克隆基因重组法构建靶向肝癌的治疗基因p[5HRE]AFPp-p53,并用限制性内切酶凝胶电泳法检测重组... 目的:建立p[5HRE]AFPp-p53/PEI-Fe_3O_4磁性纳米颗粒靶向基因治疗和磁流体热疗系统用于肝癌的联合治疗,以提高治疗的安全性和有效性。方法:亚克隆基因重组法构建靶向肝癌的治疗基因p[5HRE]AFPp-p53,并用限制性内切酶凝胶电泳法检测重组质粒是否构建成功;用共沉淀法制备磁性纳米颗粒PEI-Fe_3O_4,利用透射电镜、粒径仪、傅里叶转换红外光谱仪等对PEI-Fe_3O_4进行表征检测。MTT法检测PEI-Fe_3O_4转染p[HRE]AFPp-p53至不同细胞系后的细胞增殖及磁流体热疗和基因治疗联合作用对肝癌细胞Hep G2的增值抑制作用。结果:成功制备载有靶向治疗基因的p[5HRE]AFPp-p53/PEI-Fe_3O_4磁性纳米颗粒,由其介导的基因治疗组与阴性及纳米颗粒对照组相比,明显抑制肝癌Hep G2(AFP阳性)细胞[(0.592±0.041)vs(1.052±0.031)、(1.012±0.021),P<0.01]和SMMC7721(AFP阴性)细胞(0.813±0.042)vs(1.073±0.032)、(1.182±0.052),P<0.01]的增殖活性,但对非肝癌细胞(L929和Lovo)增殖抑制作用无明显影响(P>0.05)。基因治疗和磁流体热疗联合组与单独使用热疗组及基因治疗组相比显著增加Hep G2细胞的增殖抑制率(76.11%vs 35.22%、42.92%,均P<0.01)。结论:p[5HRE]AFPp-p53/PEI-Fe_3O_4磁性纳米颗粒对肝癌细胞具有特异性杀伤作用,并且能与磁流体热疗产生协同效应,是一种选择性高、治疗效果好的肿瘤治疗方法。 展开更多
关键词 肝癌 HEPG2细胞 SMMC7721细胞 靶向基因治疗 磁性纳米颗粒 磁流体热疗 联合治疗
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正电荷载基因纳米微泡的超声成像及靶向杀伤肝癌细胞的研究 被引量：2
4
作者 王玲 李嘉 +4 位作者 卢航青 高启 丁粉干 袁晨燕 张东生 《南京医科大学学报（自然科学版）》 CAS CSCD 北大核心 2018年第12期1667-1673,1700,共8页
目的:制备载基因纳米微泡并探讨其体内外超声成像和靶向杀伤肝癌细胞的效果。方法:采用薄膜水化-机械震荡法制备磷脂为壳膜、六氟化硫(suphurhexafluoride,SF6)气体为核心的正电荷纳米微泡,再偶联甲胎蛋白(alpha fetoprotein,AFP)启动... 目的:制备载基因纳米微泡并探讨其体内外超声成像和靶向杀伤肝癌细胞的效果。方法:采用薄膜水化-机械震荡法制备磷脂为壳膜、六氟化硫(suphurhexafluoride,SF6)气体为核心的正电荷纳米微泡,再偶联甲胎蛋白(alpha fetoprotein,AFP)启动子的单纯疱疹病毒胸苷激酶(simplex herpes virus thymidine kinase,HSV-TK)质粒DNA制备载基因纳泡。对其形态、平均粒径、zeta电位、DNA结合力、基因转染进行检测;然后对其体内外超声成像特性进行考察;最后采用CCK-8和流式细胞(FCM)分析检测载基因纳泡联合超声靶向微泡击破(ultrasound-targeted microbubble destruction,UTMD)技术对BEL-7402和SMCC-7721细胞的杀伤作用。结果:电镜显示纳泡呈圆球形壳核结构;平均水合粒径约为667 nm,带正电;琼脂糖凝胶电泳显示质量比≥5时,纳泡可有效结合质粒DNA;体内外超声显示载基因纳泡具有良好的超声对比增强特性;RT-PCR检测显示纳泡联合UTMD能使HSV-TK在AFP阳性肝癌细胞内表达。CCK-8和FCM分析显示载基因纳泡+UTMD组能显著抑制BEL-7402细胞的增殖和诱导其凋亡,与其他组相比差异具有显著性(P <0.05)。结论:具有良好超声成像功能的载基因纳泡能够高效靶向杀伤AFP阳性的肝癌细胞。 展开更多
关键词 纳米微泡 超声成像 甲胎蛋白 基因治疗 超声靶向微泡击破
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C225偶联磁性白蛋白纳米球的制备、表征及联合磁流体热疗体外靶向抗肺癌的研究
5
作者 王玲 高启 +3 位作者 李嘉 丁粉干 袁晨燕 张东生 《南京医科大学学报（自然科学版）》 CAS CSCD 北大核心 2018年第11期1487-1493,1505,共8页
目的:制备抗表皮生长因子受体(epithelial growth factor receptor,EGFR)单抗西妥昔(C225)偶联的磁性白蛋白纳米球,对其表征并联合磁流体热疗观察其体外抑制肺癌细胞的效果。方法:化学共沉淀法制备Fe3O4磁性纳米粒,去溶剂化-交联法制备... 目的:制备抗表皮生长因子受体(epithelial growth factor receptor,EGFR)单抗西妥昔(C225)偶联的磁性白蛋白纳米球,对其表征并联合磁流体热疗观察其体外抑制肺癌细胞的效果。方法:化学共沉淀法制备Fe3O4磁性纳米粒,去溶剂化-交联法制备磁性白蛋白纳米球(magnetic albumin nanospheres,MANs),然后用双功能交联剂N-琥珀酰亚胺-3-(2-吡啶二硫代)丙酸酯[N-succinimidyl-3-(2-pyridyldithio)propionate,SPDP]将C225偶联其上制备C225-MANs。纳米球的形态、平均粒径、zeta电位、抗体结合率、含铁量、细胞靶向性及磁热动力学均被表征。最后采用CCK-8及流式细胞(flow cytometry,FCM)分析检测C225-MANs介导的体外双靶向磁流体热治疗肺腺癌细胞GLC-82的效果。结果:透射电镜显示制备的C225-MANs为球形,Fe3O4纳米粒被封装其内,Fe含量约2.0 mg/mL;平均水合粒径约为140 nm,带负电;在输出电流20 A、输出频率200 kHz的交变磁场作用下,不同Fe含量的C225-MANs能在60 min内升温到39.3℃～52.0℃,且加热30 min后温度能保持恒定。FCM荧光检测显示抗体结合率为79.74%。免疫荧光实验和细胞MRI成像证实C225-MANs能够靶向GLC-82细胞。CCK-8与FCM分析显示双靶向联合治疗组的细胞增殖率明显低于其他治疗组,而凋亡率明显高于其他治疗组(P <0.05)。结论:C225-MANs对肺腺癌细胞GLC-82具有良好的靶向效应,且双靶向磁流体热疗联合分子靶向治疗在体外能有效抑制肺癌细胞。 展开更多
关键词 磁性纳米粒 白蛋白纳米球 西妥昔单抗(C225) 靶向 热疗
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异补骨脂甲素调控miR-124对小鼠胚胎干细胞向神经细胞分化的影响 被引量：1
6
作者 王贝 袁晨燕 姚瑞芹 《第三军医大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2019年第12期1110-1116,共7页
目的探讨异补骨脂甲素(isobavachin,IBA)调控微小RNA-124(miR-124)对小鼠J1胚胎干细胞向神经细胞分化的影响。方法采用qRT-PCR和免疫荧光染色分别检测IBA干预或抑制miR-124表达的J1细胞中miR-124、八聚体转录因子4(octamer transcriptio... 目的探讨异补骨脂甲素(isobavachin,IBA)调控微小RNA-124(miR-124)对小鼠J1胚胎干细胞向神经细胞分化的影响。方法采用qRT-PCR和免疫荧光染色分别检测IBA干预或抑制miR-124表达的J1细胞中miR-124、八聚体转录因子4(octamer transcription factor-4,OCT4)和神经微丝H(neurofilament-H, NFH)的表达。使用Targetscan在线预测、双荧光素酶报告基因和Western blot实验验证miR-124和锌指蛋白18(zinc finger and BTB domain containing 18, ZBTB18)的靶向关系。在J1细胞中转染pcDNA-ZBTB18或miR-124 mimics、ZBTB18 shRNA,免疫荧光染色检测细胞中OCT4和NFH的表达。结果 IBA可显著抑制J1细胞中OCT4蛋白表达,并上调miR-124和NFH表达;而抑制miR-124表达后所得结果相反。miR-124可靶向调控ZBTB18蛋白表达。在J1细胞中过表达ZBTB18,OCT4阳性表达率升高而NFH阳性表达率降低;敲减ZBTB18可在一定程度上减弱miR-124对IBA干预J1细胞OCT4和NFH表达的促进或抑制作用。结论 IBA能够促进J1细胞中miR-124表达,而miR-124可靶向调控ZBTB18,从而调节OCT4和NFH蛋白表达,这可能是IBA促进小鼠胚胎干细胞分化为神经细胞的作用机制。 展开更多
关键词 异补骨脂甲素 微小RNA-124 锌指蛋白18 小鼠胚胎干细胞 神经细胞 细胞分化
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