FAdV-4通过lnc87774-MDM2-p53通路诱导鸡肝细胞凋亡的分子机制

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作者 肖雅清 董雯雯 +3 位作者 袁小远 李桂明 刘明超 孟凯 《山东农业科学》 北大核心 2025年第1期142-150,173,共10页

由禽腺病毒4型(FAdV-4)引起的禽心包积液性肝炎综合征近年来在我国频频发生,给我国家禽养殖业造成了巨大损失。长链非编码RNA(lncRNA)是病毒感染期间宿主免疫反应的关键调节因子,为揭示其在FAdV-4感染时对宿主细胞的作用及机理,本研究... 由禽腺病毒4型(FAdV-4)引起的禽心包积液性肝炎综合征近年来在我国频频发生,给我国家禽养殖业造成了巨大损失。长链非编码RNA(lncRNA)是病毒感染期间宿主免疫反应的关键调节因子,为揭示其在FAdV-4感染时对宿主细胞的作用及机理,本研究以鸡肝癌细胞系LMH为对象,通过芯片测序、生物信息学分析及Real-time PCR等方法筛选病毒感染过程中的关键lncRNA分子,并通过荧光定位杂交、编码-非编码基因共表达(CNC)分析、Real-time PCR、酶联免疫吸附(ELISA)、RNA pull-down和蛋白免疫共沉淀(RIP)、流式细胞分析等分子生物学手段对其进行亚细胞定位及互作蛋白的筛选、验证和功能分析。结果表明,筛选出了FAdV-4感染引起的关键lncRNA分子lnc87774,其主要定位在细胞质,其靶向结合互作蛋白为E3泛素连接酶MDM2,过表达lnc87774,MDM2和Bcl-2的相对表达量显著上升,p53和Bax的相对表达量显著下降,显著抑制细胞凋亡;沉默lnc87774,上述基因表现出相反的变化趋势且显著促进细胞凋亡;进一步沉默MDM2后,p53的表达量显著上调,但同时过表达/沉默lnc87774对FAdV-4引起的细胞凋亡没有影响,表明FAdV-4感染LMH细胞过程中lnc87774通过MDM2靶向调控p53介导的细胞凋亡进程。该研究结果将增加我们对FAdV-4与宿主细胞互作的认识,为宿主抗病毒防御机制提供理论支持。 展开更多

关键词 禽腺病毒4型 长链非编码RNA 蛋白互作 细胞凋亡 先天性免疫 致病机理

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鸡传染性喉气管炎病毒SYBR Green Ⅰ实时荧光定量PCR检测方法的建立与应用

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作者 张玉霞 董雯雯 +2 位作者 袁小远 孟凯 徐怀英 《山东农业科学》 北大核心 2024年第6期128-132,共5页

鸡传染性喉气管炎病毒(Infectious laryngotracheitis virus,ILTV)以往多感染蛋鸡,近年来在蛋种鸡、商品肉鸡中连续多发,表明该病毒感染谱有扩大风险,因此有必要加强对ILTV的监测。为建立高效、灵敏的ILTV检测方法,本研究以ILTV的TK基... 鸡传染性喉气管炎病毒(Infectious laryngotracheitis virus,ILTV)以往多感染蛋鸡,近年来在蛋种鸡、商品肉鸡中连续多发,表明该病毒感染谱有扩大风险,因此有必要加强对ILTV的监测。为建立高效、灵敏的ILTV检测方法,本研究以ILTV的TK基因为靶基因设计引物,扩增并构建pMD18-T-TK质粒标准品,建立SYBR GreenⅠ实时荧光定量PCR检测方法和标准曲线,对其特异性、敏感性和重复性进行验证,并对临床疑似病例进行检测。结果发现,该检测方法特异性良好,与其他常见症状相似病原无交叉反应;最低检测浓度为1.55拷贝/μL,灵敏度是普通PCR方法的10倍;重复性好,批内、批间变异系数在0.79%~1.83%之间。表明本研究建立的ILTV实时荧光定量PCR方法特异性强、灵敏度高,可为ILTV的临床诊断和流行病学研究等提供有效的检测方法。 展开更多

关键词 鸡喉气管炎病毒 TK基因 实时荧光定量PCR 特异性 敏感性 重复性

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降解黄曲霉毒素B_(1)芽孢杆菌的分离鉴定及其特性研究

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作者 刘蓓 董雯雯 +4 位作者 肖雅清 袁小远 李桂明 刘明超 孟凯 《山东农业科学》 北大核心 2024年第12期105-112,共8页

本研究旨在从不同来源的样本中分离出对黄曲霉毒素B_(1)(AFB_(1))具有降解作用的芽孢杆菌,为降解AFB_(1)的芽孢杆菌开发利用提供理论依据。采集鸡的肠道、肛拭子和土壤样本,富集后利用MYP固体培养基和初筛培养基筛选出疑似芽孢杆菌的菌... 本研究旨在从不同来源的样本中分离出对黄曲霉毒素B_(1)(AFB_(1))具有降解作用的芽孢杆菌,为降解AFB_(1)的芽孢杆菌开发利用提供理论依据。采集鸡的肠道、肛拭子和土壤样本,富集后利用MYP固体培养基和初筛培养基筛选出疑似芽孢杆菌的菌落,通过分析细菌对AFB_(1)的降解率复筛,选出对AFB_(1)具有降解作用的菌株,通过16S rRNA测序鉴定细菌种属,然后对筛选出的芽孢杆菌的溶血性、抗生素敏感性、生长曲线、耐酸和耐胆盐性进行测试。结果显示,共筛选出20株对AFB_(1)具有降解作用的芽孢杆菌。结合细菌测序和溶血试验结果,选择3株降解率高的地衣芽孢杆菌(S51、S48、S8-2)进行试验,结果表明,3株芽孢杆菌对多种抗生素较敏感,其中S51的生长速度最快,菌液浓度最大,对酸和胆盐的耐受性均强于另外两株菌。本研究筛选出1株对AFB_(1)有较好降解作用的地衣芽孢杆菌,具有良好的安全性和耐受性,有望作为微生态制剂应用到AFB_(1)降解过程中。 展开更多

关键词 黄曲霉毒素B_(1) 降解 芽孢杆菌

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肉鸽新城疫病毒山东分离株的分离鉴定及其F基因的分子特性分析 被引量：1

4

作者 袁小远 徐绍建 +2 位作者 曲新泽 张玉霞 秦卓明 《浙江农业学报》 CSCD 北大核心 2010年第1期20-24,共5页

从山东某发病肉鸽的体内分离到一株新城疫病毒(Newcastle disease virus,NDV),命名为Pigeon-Shandong-JN-08(简写JN08),对其融合蛋白(fusion,F)进行序列和分子特性的分析,以了解肉鸽NDV的遗传起源和分子特性。JN08经病毒蚀斑克隆纯化后... 从山东某发病肉鸽的体内分离到一株新城疫病毒(Newcastle disease virus,NDV),命名为Pigeon-Shandong-JN-08(简写JN08),对其融合蛋白(fusion,F)进行序列和分子特性的分析,以了解肉鸽NDV的遗传起源和分子特性。JN08经病毒蚀斑克隆纯化后动物回归试验可产生典型的NDV病变。研究结果发现,F蛋白多肽裂解位点的序列为112RRQKRF117,符合鸽源NDV强毒氨基酸基序。F基因分型及同源性比较显示:JN08与绝大多数鸽源毒株同属于基因Ⅵ型;其F基因与基因Ⅱ型毒株LaSota,B1,Bingham,TEX-48氨基酸同源性为89.9%,89.7%,90.4%,89.7%,与基因Ⅰ型毒株Ulster67的氨基酸同源性为91.3%,与基因Ⅲ型传统强毒F48E9的氨基酸同源性为92.8%;与国内鸽分离株P1-03,CH98-98,JS1-06,PB01-96和GZ-07的氨基酸同源性分别为91.3%,94.6%,94.8%,95.1%,94.0%;与国外鸽分离株Capital3-97,Tigre6-99,1166-02,IT227-97,2736-00,NY-84,TX3503-04,248VB-98的同源性分别为96.2%,93.8%,98.0%,96.8%,97.1%,96.8%,96.8%,98.4%。从F基因遗传进化树上发现:JN08与国外分离株的遗传距离较近,处于同一基因亚型上,而与国内分离株的遗传距离较远。 展开更多

关键词 鸽 新城疫病毒 F基因 分子特性

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新城疫病毒SGM01分离株F基因多肽重复区的序列分析和初步表达 被引量：1

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作者 袁小远 欧阳文军 +2 位作者 张玉霞 金维江 秦卓明 《山东农业科学》 2009年第8期104-106,共3页

从新城疫病毒(Newcastle disease virus,NDV)SGM01强毒分离株的F基因克隆出两段七肽重复序列(Heptad Repeat Region,HR)HR1和HR2,通过氨基酸序列分析显示:SGM01分离株的HR1区与F48E9、La-Sota的同源性分别为95.2%、93.7%;HR2区与F48E9、... 从新城疫病毒(Newcastle disease virus,NDV)SGM01强毒分离株的F基因克隆出两段七肽重复序列(Heptad Repeat Region,HR)HR1和HR2,通过氨基酸序列分析显示:SGM01分离株的HR1区与F48E9、La-Sota的同源性分别为95.2%、93.7%;HR2区与F48E9、LaSota的同源性分别为89.1%、85.5%。将HR1和HR2分别插入融合表达载体pGEX-6p-1,在大肠杆菌BL21(DE3)中表达,得到预期大小的目的蛋白。这为研究HR1和HR2的结构以及其在F蛋白融合过程中所起的作用奠定了基础。 展开更多

关键词 新城疫病毒 多肽重复区 序列分析 表达

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鸡传染性支气管炎病毒山东株的遗传变异分析 被引量：1

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作者 袁小远 金维江 +2 位作者 徐怀英 张玉霞 秦卓明 《山地农业生物学报》 2009年第2期146-150,共5页

采用RT-PCR方法对1株传染性支气管炎病毒（Infectious Bronchitis Virus,IBV）Chicken-SD-E-04的S1和N基因进行扩增、克隆测序。通过序列分析发现：该分离株的N基因相对较为保守,与参考毒株的氨基酸同源性在87.1%-91.2%;从N基因的遗传... 采用RT-PCR方法对1株传染性支气管炎病毒（Infectious Bronchitis Virus,IBV）Chicken-SD-E-04的S1和N基因进行扩增、克隆测序。通过序列分析发现：该分离株的N基因相对较为保守,与参考毒株的氨基酸同源性在87.1%-91.2%;从N基因的遗传关系树上分析显示Chicken-SD-E-04与其他多数分离株间及疫苗株的遗传距离较远。而就S1基因而言,分离株与参考毒株的氨基酸同源性在73.2%-80.1%;从S1基因的遗传关系树上分析发现Chicken-SD-E-04与疫苗株的遗传距离较远,且处于不同的分支上。其结果说明这株山东分离株具有明显的地域性;而且也从分子水平上证实了目前山东流行毒株与传统疫苗株的遗传距离较远。 展开更多

关键词 传染性支气管炎病毒 N基因 S1基因 遗传变异

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新城疫病毒SD强毒株全长cDNA克隆的构建及序列分析

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作者 袁小远 杨金兴 +3 位作者 张玉霞 孟凯 王友令 艾武 《山东农业科学》 2017年第7期12-15,共4页

将新城疫病毒SD强毒株的全基因组cDNA序列进行分段扩增,并将各个片段通过In-Fusion技术连于克隆载体pBR322上,获得了SD毒株的全基因组cDNA克隆。通过分段PCR扩增鉴定及全长测序分析,结果表明,SD毒株的全基因组cDNA克隆构建成功,并且成... 将新城疫病毒SD强毒株的全基因组cDNA序列进行分段扩增,并将各个片段通过In-Fusion技术连于克隆载体pBR322上,获得了SD毒株的全基因组cDNA克隆。通过分段PCR扩增鉴定及全长测序分析,结果表明,SD毒株的全基因组cDNA克隆构建成功,并且成功引入T7启动子序列,全长基因组序列与亲本毒氨基酸序列的一致性为99.9%。单个序列比对发现,全基因组cDNA克隆中有11处碱基突变,其中只有2处引起氨基酸序列发生改变;整个序列未出现基因的缺失、插入变化,因此全长氨基酸的位数未发生任何变化。SD毒株全长cDNA克隆的成功构建和序列分析为后续的反向遗传操作奠定了关键的技术基础。 展开更多

关键词 新城疫病毒 基因组全长cDNA 重组质粒 序列分析

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鸡感染传染性支气管炎病毒的免疫机理

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作者 袁小远 马保臣 秦卓明 《动物医学进展》 CSCD 2006年第10期19-22,共4页

由于鸡传染性支气管炎病毒极易发生点突变、基因缺失、插入及重组,导致病毒不断产生变异,新的血清型和基因型不断出现,使得实际生产中免疫接种失败的现象不断发生。而鸡感染传染性支气管炎病毒的免疫机制一直是国内外研究的热点之一,它... 由于鸡传染性支气管炎病毒极易发生点突变、基因缺失、插入及重组,导致病毒不断产生变异,新的血清型和基因型不断出现,使得实际生产中免疫接种失败的现象不断发生。而鸡感染传染性支气管炎病毒的免疫机制一直是国内外研究的热点之一,它的免疫反应包括非特异性免疫和体液免疫、细胞免疫及黏膜免疫,这些免疫反应相互作用、互相补充,各自发挥着重要作用。文章从机体针对该病毒感染的免疫基础、分子基础和其激发的多种免疫反应等角度阐述了该病毒感染机体的免疫机制。 展开更多

关键词 鸡传染性支气管炎病毒 免疫机制 免疫基础

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1株鸭坦布苏病毒人工感染雏鸭的病理学研究 被引量：10

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作者 王友令 袁小远 +6 位作者 杨金兴 于可响 徐怀英 张玉霞 艾武 秦卓明 李玉峰 《畜牧兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2013年第1期66-70,共5页

7日龄雏鸭经肌肉接种坦布苏病毒BZ株1周后,发病率100%,死亡率为80%。接种鸭全身多数器官出现充血、出血、坏死等症状,病理学变化主要表现在肝实质严重变性、坏死;脾淋巴细胞局部减少;肾小管上皮细胞肿胀;肺淤血,内有大量细胞渗出;胰腺... 7日龄雏鸭经肌肉接种坦布苏病毒BZ株1周后,发病率100%,死亡率为80%。接种鸭全身多数器官出现充血、出血、坏死等症状,病理学变化主要表现在肝实质严重变性、坏死;脾淋巴细胞局部减少;肾小管上皮细胞肿胀;肺淤血,内有大量细胞渗出;胰腺中可见凝固性坏死灶;大脑软脑膜充血、水肿,小脑脑膜上炎性细胞浸润。鸭接种该病毒后,攻毒组的丙氨酸氨基转移酶、天门冬氨酸氨基转移酶、谷氨酰胺转移酶、乳酸脱氢酶水平和血清尿酸的浓度较对照组明显升高。结果表明:坦布苏病毒BZ株可造成全身多器官的病理性损伤以及主要血液生化指标的显著变化,这可能是该病毒致病性的重要机制之一。 展开更多

关键词 鸭 坦布苏病毒 病理学研究 血清酶

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中国水禽新城疫病毒F和HN基因的变异趋势 被引量：6

10

作者 徐怀英 秦卓明 +5 位作者 王友令 欧阳文军 谭雷涛 何叶峰 金维江 袁小远 《畜牧兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2009年第3期394-401,共8页

选取中国1996-2005年的8株鹅、鸭等水禽NDV流行株,克隆其融合蛋白(F)和血凝素-神经氨酸酶(HN)基因,参考GenBank中具有F和HN核苷酸全长的16株国内外NDV代表株、16株国内水禽流行株以及12株只具有F基因的水禽毒株序列,参照传统F基因分型方... 选取中国1996-2005年的8株鹅、鸭等水禽NDV流行株,克隆其融合蛋白(F)和血凝素-神经氨酸酶(HN)基因,参考GenBank中具有F和HN核苷酸全长的16株国内外NDV代表株、16株国内水禽流行株以及12株只具有F基因的水禽毒株序列,参照传统F基因分型方法,分别对F和HN基因进行分型,同时进行相关比较、核苷酸和氨基酸同源性以及系统发育分析。结果表明:16株国内外代表株F和HN基因分型基本一致,但24株水禽NDV流行株中只有15株相同,符合率为62.5%,不同占37.5%(9/24)。系统发育和同源比较发现:水禽NDV流行株HN基因高度同源,同属Ⅶ型,而F基因则分属不同的基因型。通过对24株NDVF和HN基因氨基酸全长以及进行F基因分型的F基因47-420位核苷酸的同源性相关性比较证实:F基因前47-420位核苷酸的遗传变异与F基因氨基酸全长变异密切相关,r=0.916,但与HN基因的氨基酸变异不相关,显示出NDV在演变过程中F和HN基因具有相对的独立性。水禽NDV是家禽NDV的重要储存宿主,应高度重视水禽NDV的变异。 展开更多

关键词 新城疫病毒 F基因 HN基因 同源性 遗传变异 相关性

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新城疫GM2分离株蚀斑克隆纯化及毒力测定 被引量：4

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作者 王友令 杨金兴 +2 位作者 袁小远 徐怀英 秦卓明 《浙江农业学报》 CSCD 北大核心 2009年第6期565-568,共4页

新城疫(newcastle disease,ND)是世界公认的最重要的家禽疫病之一,伴随着NDV活疫苗的广泛使用,野外分离的新城疫病毒往往由多种强弱病毒混合而成。为了避免不同分离株干扰,必须通过蚀斑纯化将混杂在一起的不同NDV毒株区分开来。文章采... 新城疫(newcastle disease,ND)是世界公认的最重要的家禽疫病之一,伴随着NDV活疫苗的广泛使用,野外分离的新城疫病毒往往由多种强弱病毒混合而成。为了避免不同分离株干扰,必须通过蚀斑纯化将混杂在一起的不同NDV毒株区分开来。文章采用蚀斑纯化技术对野外分离毒新城疫GM2进行蚀斑纯化,并对蚀斑纯化前后病毒的生物学特性进行测定,结果显示,该分离毒蚀斑纯化前MDT,ICPI,IVPI分别为50.5,1.78,2.41,蚀斑纯化后MDT,ICPI,IVPI分别为47.5,1.89,2.65。 展开更多

关键词 新城疫病毒 蚀斑纯化

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PRRS V SD-1株ORF7基因的克隆、测序及原核表达载体的构建 被引量：2

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作者 李俊 王金宝 +4 位作者 任慧英 朱新产 袁小远 周顺 张祯涛 《动物医学进展》 CSCD 2006年第4期64-68,共5页

参照PRRSV ATCC VR2332株基因序列设计1对引物P1、P2,经RT-PCR扩增出PRRSV SD-1株ORF7基因,经与PMD18-T Vector连接后筛选出阳性克隆株测序。把PRRSV SD-1株ORF7 cDNA亚克隆到PQE上构建PQE-N原核重组表达载体。结果表明,PRRSV SD-1株ORF... 参照PRRSV ATCC VR2332株基因序列设计1对引物P1、P2,经RT-PCR扩增出PRRSV SD-1株ORF7基因,经与PMD18-T Vector连接后筛选出阳性克隆株测序。把PRRSV SD-1株ORF7 cDNA亚克隆到PQE上构建PQE-N原核重组表达载体。结果表明,PRRSV SD-1株ORF7核甘酸序列与PRRSV ATCC VR2332株ORF7核甘酸序列完全一致,与欧洲株LV符合率为58%。成功构建原核表达载体PQE-N,为N蛋白的研究和制备诊断性抗原奠定了基础。 展开更多

关键词 猪繁殖与呼吸综合征SD-1株 开放阅读框 原核表达载体 构建

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p53基因3′UTR双荧光素酶报告质粒的构建及其与miRNA-2127靶向关系的验证 被引量：2

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作者 张玉霞 袁小远 +1 位作者 王友令 孟凯 《山东农业科学》 2019年第1期14-17,共4页

为了验证miRNA-2127与p53基因的靶向关系,利用生物信息学软件预测p53与miRNA-2127的结合位点,全基因合成法合成该结合位点的野生型与突变型模板,并将其克隆到pmiR-RB-REPORT^(TM)双荧光素酶报告载体中,构建野生型与突变型重组双荧光素... 为了验证miRNA-2127与p53基因的靶向关系,利用生物信息学软件预测p53与miRNA-2127的结合位点,全基因合成法合成该结合位点的野生型与突变型模板,并将其克隆到pmiR-RB-REPORT^(TM)双荧光素酶报告载体中,构建野生型与突变型重组双荧光素酶报告质粒。将293T细胞分为4组,分别共转染野生型报告质粒+阴性对照(NC)、野生型报告质粒+miRNA-2127、突变型报告质粒+NC、突变型报告质粒+miRNA-2127。检测各组细胞中荧光素酶活性差异,结果显示:共转染了野生型报告质粒+miRNA-2127的293T细胞与共转染了野生型报告质粒+NC组相比,荧光素酶活性显著降低(P<0.05);且突变型报告质粒+miRNA-2127组的相对荧光素酶活性显著高于野生型报告质粒+miRNA-2127(P<0.05),说明miRNA-2127能够靶向调控p53基因,且结合位点位于3′UTR区369—375间。 展开更多

关键词 P53 miRNA-2127 双荧光素酶报告系统

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宿主miRNA-2127靶向p53促进禽流感病毒H9N2亚型体外复制的分子机制 被引量：2

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作者 张玉霞 袁小远 +1 位作者 杨金兴 孟凯 《山东农业科学》 2019年第12期91-95,共5页

为研究鸡体内miRNA-2127对低致病性禽流感病毒(avian influenza virus,AIV)H9N2复制的影响,本研究将化学合成的gga-miR-2127模拟物和抑制剂分别转染DF-1细胞,接种H9N2亚型病毒,检测细胞中病毒含量变化,发现gga-miR-2127能够显著促进病... 为研究鸡体内miRNA-2127对低致病性禽流感病毒(avian influenza virus,AIV)H9N2复制的影响,本研究将化学合成的gga-miR-2127模拟物和抑制剂分别转染DF-1细胞,接种H9N2亚型病毒,检测细胞中病毒含量变化,发现gga-miR-2127能够显著促进病毒的复制。为探索其中的分子机制,用生物信息学软件预测gga-miR-2127的调控位点位于p53基因mRNA的3′UTR区,并用双荧光素酶报告系统对其靶向关系进行了验证。荧光定量RT-PCR法和Western blot试验表明,gga-miR-2127过表达时p53的mRNA水平不变而p53蛋白表达水平降低,细胞天然免疫机能下降。据此推测gga-miR-2127促进H9N2复制的分子作用机理是在p53基因的mRNA转录后,通过gga-miR-2127与其mRNA的3′UTR区结合,抑制p53蛋白的翻译从而抑制抗病毒作用和细胞的天然免疫机能。 展开更多

关键词 H9N2亚型禽流感病毒 gga-miR-2127 分子机制

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3株传染性法氏囊病病毒的分离与鉴定 被引量：1

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作者 孟凯 袁小远 +2 位作者 张玉霞 李莉 王友令 《山东农业科学》 2018年第11期129-132,共4页

本研究于2014—2017年从山东省发生传染性法氏囊病的鸡群中分离到3株传染性法氏囊病病毒(Infectious bursal disease virus,IBDV)毒株,通过RT-PCR技术对3株分离毒株进行鉴定,并测定其ELD50以及对3周龄SPF鸡的致死率。结果如下:3株传染... 本研究于2014—2017年从山东省发生传染性法氏囊病的鸡群中分离到3株传染性法氏囊病病毒(Infectious bursal disease virus,IBDV)毒株,通过RT-PCR技术对3株分离毒株进行鉴定,并测定其ELD50以及对3周龄SPF鸡的致死率。结果如下:3株传染性法氏囊病病毒分离株均可导致70%以上SPF鸡的死亡,属于强毒株。通过特异性引物对3株分离株VP2基因的高变区进行扩增并测序,序列分析结果显示:3株分离株与5个超强毒株均在同一个大的分支上,同源性在96. 3%~99. 3%之间;与疫苗株B87和D78分属于两个分支,同源性仅为88. 7%~90. 6%。本研究为山东地区传染性法氏囊病的防治提供了有益参考。 展开更多

关键词 传染性法氏囊病病毒 分离与鉴定 RT-PCR VP2

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禽腺病毒4型实时荧光PCR检测方法的建立与应用 被引量：2

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作者 杨金兴 张玉霞 +1 位作者 李莉 袁小远 《浙江农业科学》 2018年第6期1024-1025,1056,共3页

本研究建立了可用于检测血清4型禽腺病毒(FAV)的特异性实时荧光PCR方法。试验表明,本方法特异性强,与血清8型FAV无交叉反应。灵敏度试验结果表明,本方法的检测样品最小量可为100拷贝·μL^(-1)。通过临床应用证实,该方法可快速灵敏... 本研究建立了可用于检测血清4型禽腺病毒(FAV)的特异性实时荧光PCR方法。试验表明,本方法特异性强,与血清8型FAV无交叉反应。灵敏度试验结果表明,本方法的检测样品最小量可为100拷贝·μL^(-1)。通过临床应用证实,该方法可快速灵敏准确地检测血清4型FAV,极大地缩短检测时间。 展开更多

关键词 禽腺病毒 血清4型 实时荧光PCR

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PRRSV SD2株ORF5/ORF6基因克隆及双基因真核表达载体的构建

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作者 李俊 王金宝 +4 位作者 袁小远 崔尚金 李曦 符芳 周艳君 《动物医学进展》 CSCD 2006年第10期78-81,共4页

以PRRSV细胞培养物为模板,经RT-PCR扩增得到ORF5/ORF6基因,该产物和pIRES真核表达载体分别经双酶切,连接构建pIRES-ORF5/ORF6。经PCR、双酶切鉴定和测序证明成功构建了真核表达载体pIRES-ORF5/ORF6。测得的ORF5/ORF6序列与VR-2332株的... 以PRRSV细胞培养物为模板,经RT-PCR扩增得到ORF5/ORF6基因,该产物和pIRES真核表达载体分别经双酶切,连接构建pIRES-ORF5/ORF6。经PCR、双酶切鉴定和测序证明成功构建了真核表达载体pIRES-ORF5/ORF6。测得的ORF5/ORF6序列与VR-2332株的氨基酸同源性分别为99%和100%,属北美洲型。 展开更多

关键词 猪繁殖与呼吸综合征 SD2株 ORF5/ORF6基因 转移载体

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新城疫病毒在鸡胚成纤维细胞中的培养及纯化

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作者 张玉霞 袁小远 +1 位作者 孟凯 王友令 《浙江农业科学》 2017年第12期2265-2267,共3页

利用鸡胚成纤维细胞对新城疫毒株GM0511株进行增殖培养和蚀斑法纯化,通过对最适细胞密度、病毒最佳接种浓度、覆盖琼脂糖浓度、蚀斑形成时间等条件进行优化摸索,最终获得产斑时间一致,蚀斑大小一致、出斑整齐的纯化新城疫毒株,并使原病... 利用鸡胚成纤维细胞对新城疫毒株GM0511株进行增殖培养和蚀斑法纯化,通过对最适细胞密度、病毒最佳接种浓度、覆盖琼脂糖浓度、蚀斑形成时间等条件进行优化摸索,最终获得产斑时间一致,蚀斑大小一致、出斑整齐的纯化新城疫毒株,并使原病毒血凝效价提高2个滴度,为后续实验奠定基础。 展开更多

关键词 新城疫病毒 鸡胚成纤维细胞 蚀斑纯化

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核酸探针检测山东省鸡群中马立克病毒、传染性贫血病毒、网状内皮增生病病毒和呼肠孤病毒的流行状况 被引量：4

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作者 张玉霞 徐怀英 +2 位作者 欧阳文军 袁小远 秦卓明 《中国畜牧兽医》 CAS 北大核心 2010年第7期140-143,共4页

为对山东家禽业免疫抑制病的流行情况进行调查,从烟台、滨州、临沂、泰安、聊城、青岛大型养殖场共随机收集600只病死鸡的肝脏和脾脏病例组织样品,用斑点杂交的方法检测样品中鸡马立克病毒(Marek's disease virus,MDV)、传染性贫血... 为对山东家禽业免疫抑制病的流行情况进行调查,从烟台、滨州、临沂、泰安、聊城、青岛大型养殖场共随机收集600只病死鸡的肝脏和脾脏病例组织样品,用斑点杂交的方法检测样品中鸡马立克病毒(Marek's disease virus,MDV)、传染性贫血病毒(chicken anemia virus,CAV)、网状内皮增生病病毒(reticuloendotheliosis virus,REV)和呼肠孤病毒(reovirus,REOV)的感染情况。结果发现,MDV、CAV、REV、REOV的感染率分别为5.17%、8.17%、1.17%、2.5%,检出率较以前的研究报道有降低趋势,有多种双重感染和三重感染,表明山东家禽业在免疫抑制病方面总体控制较好,但不同的养殖场发病情况差异极显著,管理水平参差不齐,个别地区发病情况严重,检出率超过其他地区的总和。 展开更多

关键词 鸡 马立克病毒 传染性贫血病毒 网状内皮增生病病毒 呼肠孤病毒 斑点杂交

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