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犬冠状病毒S1蛋白特异性小分子抗体Fab的制备被引量：1: 1; 作者薛姣雄赵婷芳 +9 位作者张倩唐青海高翠翠赵铖张妍全飞杨刘婷杨灿杨海王文秀《浙江农业学报》 CSCD 北大核心 2023年第11期2568-2583,共16页; 为表达犬冠状病毒(canine coronavirus,CCV)S1蛋白,制备其特异性小分子抗体Fab,为CCV的防治提供新材料。采用PCR扩增CCV S 1基因全长及其截短片段,分别克隆到原核表达载体pET28a或pGEX4T-1中,转到BL21(DE3)或Rosetta(DE3)感受态细胞构... 展开更多; 关键词犬冠状病毒原核表达佐剂卵黄抗体小分子抗体Fab; 在线阅读下载PDF 职称材料

猪CD163基因的克隆及截短原核表达: 2; 作者刘雪晴张可 +6 位作者唐青海薛姣雄隆泽桧高翠翠刘之睿苏荣唐斯萍《湖南畜牧兽医》 2023年第2期30-36,共7页; (目的)研究旨在克隆猪CD163 (pCD163)基因、体外表达CD163蛋白。(方法)采用RT-PCR扩增猪CD163基因,运用生物信息学软件分析其核苷酸和编码氨基酸序列,将猪CD163的两个截短基因片段(1-1749 bp和1717-3348 bp)克隆至原核表达载体pGEX-4T-1... 展开更多; 关键词猪CD163蛋白进化分析诱导表达包涵体; 在线阅读下载PDF 职称材料

猪表皮生长因子的原核表达及纯化: 3; 作者刘庭汤慧 +6 位作者唐青海刘莎薛姣雄吴广艳马洁赵婷芳唐斯萍《湖南畜牧兽医》 2022年第2期45-50,共6页; [目的]:提高重组猪表皮生长因子(pEGF)的表达量和纯化量,为后续研究pEGF对仔猪生长发育的影响奠定基础。[方法]:将人工合成的pEGF基因克隆至pEGF4T-1载体,转化至大肠杆菌Rossetta(DE3)中,得到重组菌株Rossetta(DE3)-pGEX-pEGF,IPTG诱导... 展开更多; 关键词猪表皮生长因子诱导表达 GST标签蛋白纯化条件优化融合表达; 在线阅读下载PDF 职称材料

一种犬瘟热病毒强弱毒株鉴别PCR检测方法的建立和初步应用: 4; 作者张可薛姣雄 +5 位作者喻娇唐青海曾繁荣刘雪晴隆泽桧侯鑫军《湖南畜牧兽医》 2021年第4期45-50,共6页; 为了建立犬瘟热病毒(CDV)强弱毒株的鉴别PCR检测方法,根据犬瘟热病毒强弱毒株H基因的保守区域各设计了两对特异性引物,制备阳性对照模板,优化反应体系及反应程序;采集CDV自然感染犬只病料样本,利用该方法和胶体金试纸条进行对比检测。... 展开更多; 关键词犬瘟热病毒聚合酶链反应强弱毒株胶体金试纸条鉴别; 在线阅读下载PDF 职称材料

题名犬冠状病毒S1蛋白特异性小分子抗体Fab的制备被引量：1: 1; 作者薛姣雄赵婷芳张倩唐青海高翠翠赵铖张妍全飞杨刘婷杨灿杨海王文秀; 机构衡阳师范学院生命科学学院滨州市沾化区科技创新发展研究中心山东省滨州畜牧兽医研究院; 出处《浙江农业学报》 CSCD 北大核心 2023年第11期2568-2583,共16页; 基金国家级大学创新创业训练计划(校科字〔2021〕1-9/cxcy2022001) 2022年中央引导地方科技发展资金项目(2022ZYC091) +1 种基金湖南省教育厅科学研究项目重点项目(21A0442)。; 文摘为表达犬冠状病毒(canine coronavirus,CCV)S1蛋白,制备其特异性小分子抗体Fab,为CCV的防治提供新材料。采用PCR扩增CCV S 1基因全长及其截短片段,分别克隆到原核表达载体pET28a或pGEX4T-1中,转到BL21(DE3)或Rosetta(DE3)感受态细胞构建重组表达菌株;用异丙基-β-D-硫代半乳糖苷(IPTG)诱导目的蛋白表达,通过十二烷基硫酸钠聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE)和Western blot鉴定分析重组蛋白;纯化蛋白分别与ISA71AVG或ISA201VG佐剂配伍乳化后制备免疫原,免疫蛋鸡,用聚乙二醇(PEG)沉淀法提取得到CCV S1蛋白的卵黄抗体,通过Western blot检测抗体滴度,用胃蛋白酶水解卵黄抗体制备小分子抗体Fab。结果显示,S1蛋白全长无表达,CCV S1-a和CCV S1-b分子量分别为79 ku和68 ku。在免疫后第35天2种佐剂组的卵黄抗体滴度可达1∶128000。制备小分子抗体Fab最佳酶切条件为卵黄抗体与胃蛋白酶混合质量比20∶1、pH值4.1、37℃酶切8 h。完整的IgY可以与CCV呈特异性反应,胃蛋白酶处理后制备的小分子抗体Fab可以有效阻断CCV的感染性。综上,本研究成功表达了CCV S1的2个截短片段蛋白,制备了卵黄抗体及其小分子抗体Fab,为进一步开展犬冠状病毒病的诊断和防治技术研究奠定了基础。; 关键词犬冠状病毒原核表达佐剂卵黄抗体小分子抗体Fab; Keywords canine coronavirus prokaryotic expression adjuvant egg yolk antibody small molecule antibody Fab; 分类号 S855.3 [农业科学—临床兽医学]; 在线阅读下载PDF 职称材料

题名猪CD163基因的克隆及截短原核表达: 2; 作者刘雪晴张可唐青海薛姣雄隆泽桧高翠翠刘之睿苏荣唐斯萍; 机构衡阳师范学院生命科学学院; 出处《湖南畜牧兽医》 2023年第2期30-36,共7页; 基金国家级大学生创新创业训练计划项目(202110546001,“互联网+”[2021]-24号) 湖南省自然科学基金面上项目(2021JJ30060) +2 种基金湖南省重点研发计划(2021NK2026) 2022年中央引导地方科技发展资金项目(2022ZYC091)。; 文摘 (目的)研究旨在克隆猪CD163 (pCD163)基因、体外表达CD163蛋白。(方法)采用RT-PCR扩增猪CD163基因,运用生物信息学软件分析其核苷酸和编码氨基酸序列,将猪CD163的两个截短基因片段(1-1749 bp和1717-3348 bp)克隆至原核表达载体pGEX-4T-1,构建重组原核表达载体,转化Transetta(DE3)菌株,IPTG诱导蛋白表达,采用SDS-PAGE和Western blot进行蛋白鉴定。(结果)结果表明,pCD163开放阅读框为3348 bp(GenBank:OM321546),编码1116 aa,蛋白分子量为120.5 kDa,该基因与已经测定的人、绿猴、牛、狼的CD163的核苷酸相似性依次为87.8%、88%、87.4%和88%,pCD163基因与抹香鲸和牛的CD163基因亲缘关系最近,与人、狼和绿猴的亲缘关系相对较近;pCD163截短片段1-1749蛋白分子量为92 kDa,截短片段1717-3348蛋白分子量为85 kDa,均以包涵体形式表达。(结论)试验成功克隆了pCD163基因,两个截短基因片段在原核细胞中均以包涵体形式表达,为后续开展该蛋白生物学功能研究提供了基础材料。; 关键词猪CD163蛋白进化分析诱导表达包涵体; Keywords Porcine CD163 protein evolutionary analysis induced express inclusions; 分类号 Q786 [生物学—分子生物学]; 在线阅读下载PDF 职称材料

题名猪表皮生长因子的原核表达及纯化: 3; 作者刘庭汤慧唐青海刘莎薛姣雄吴广艳马洁赵婷芳唐斯萍; 机构衡阳师范学院生命科学与环境学院\南岳山区生物资源保护与利用湖南省重点实验室\动物微生物新型检测技术及生物制剂衡阳市重点实验室; 出处《湖南畜牧兽医》 2022年第2期45-50,共6页; 基金湖南省教育厅科学研究项目重点项目(21A0442) 湖南省自然科学基金面上项目(2021JJ30060) +1 种基金湖南省重点研发计划(2021NK2026) 国家级大学生创新创业训练计划项目(202110546001)。; 文摘 [目的]:提高重组猪表皮生长因子(pEGF)的表达量和纯化量,为后续研究pEGF对仔猪生长发育的影响奠定基础。[方法]:将人工合成的pEGF基因克隆至pEGF4T-1载体,转化至大肠杆菌Rossetta(DE3)中,得到重组菌株Rossetta(DE3)-pGEX-pEGF,IPTG诱导表达,进行表达条件的优化,用GST-tag亲和层析纯化方法进行纯化。[结果]:pEGF基因大小为159 bp,融合表达蛋白分子量为32k Da,最佳诱导表达条件为IPTG浓度0.01mmol/L、诱导温度15℃和诱导时间24h。流穿液和洗涤液中目的蛋白含量极少,洗脱液得到了高纯度的GST-pEGF融合蛋白,纯化较为成功。[结论]:成功构建了pEGF表达菌株,得到了最优的诱导表达条件和最优的纯化工艺,为pEGF相关产品的开发以及应用奠定了基础。; 关键词猪表皮生长因子诱导表达 GST标签蛋白纯化条件优化融合表达; Keywords Porcine epidermal growth factor Induced expression GST tag Protein purification Conditions optimization Fusion expression; 分类号 S831.4 [农业科学—畜牧学]; 在线阅读下载PDF 职称材料

题名一种犬瘟热病毒强弱毒株鉴别PCR检测方法的建立和初步应用: 4; 作者张可薛姣雄喻娇唐青海曾繁荣刘雪晴隆泽桧侯鑫军; 机构南岳山区生物资源保护与利用湖南省重点实验室衡阳市畜牧水产事务中心; 出处《湖南畜牧兽医》 2021年第4期45-50,共6页; 基金大学生科技创新项目([2021]1-9、S202110546001) 湖南省教育厅优秀青年项目(17B041)。; 文摘为了建立犬瘟热病毒(CDV)强弱毒株的鉴别PCR检测方法,根据犬瘟热病毒强弱毒株H基因的保守区域各设计了两对特异性引物,制备阳性对照模板,优化反应体系及反应程序;采集CDV自然感染犬只病料样本,利用该方法和胶体金试纸条进行对比检测。结果表明,PCR产物扩增判断为356 bp,最佳扩增体系20μL,最佳模板浓度为5ng/μL,最佳引物浓度6.25μmol/L,最佳退火时间为5 s,最佳延伸温度为15 s,最佳循环数40。CDV感染犬表现出明显的神经症状,对血液样本的检测结果表明,该方法和胶体金符合率100%;PCR检测结果显示心脏和脾脏为CDV核酸阳性,肝脏、肺脏、肾脏、十二指肠(含肠内容物)为CDV核酸阴性。该方法扩增效率高、特异性好,可区分疫苗毒株和野生型毒株,为有效诊断CDV并鉴别强弱毒株提供了保证和技术支撑。; 关键词犬瘟热病毒聚合酶链反应强弱毒株胶体金试纸条鉴别; Keywords Canine distemper virus polymerase chain reaction wild-type and vaccine strain colloidal gold test strip Identification; 分类号 S852.655 [农业科学—基础兽医学]; 在线阅读下载PDF 职称材料

	题名	作者	出处	发文年	被引量	操作
1	犬冠状病毒S1蛋白特异性小分子抗体Fab的制备	薛姣雄赵婷芳张倩唐青海高翠翠赵铖张妍全飞杨刘婷杨灿杨海王文秀	《浙江农业学报》 CSCD 北大核心	2023	1	在线阅读下载PDF 职称材料
2	猪CD163基因的克隆及截短原核表达	刘雪晴张可唐青海薛姣雄隆泽桧高翠翠刘之睿苏荣唐斯萍	《湖南畜牧兽医》	2023	0	在线阅读下载PDF 职称材料
3	猪表皮生长因子的原核表达及纯化	刘庭汤慧唐青海刘莎薛姣雄吴广艳马洁赵婷芳唐斯萍	《湖南畜牧兽医》	2022	0	在线阅读下载PDF 职称材料
4	一种犬瘟热病毒强弱毒株鉴别PCR检测方法的建立和初步应用	张可薛姣雄喻娇唐青海曾繁荣刘雪晴隆泽桧侯鑫军	《湖南畜牧兽医》	2021	0	在线阅读下载PDF 职称材料