猪流行性腹泻的病理学研究——免疫酶组化法(间接法)抗原定位的研究 被引量：2

1

作者 薄清如 郑兆荣 +1 位作者 邱震东 刘宝岩 《畜牧兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 1989年第S1期101-105,共5页

本试验给8头3日龄同窝仔猪经口感染猪流行性腹泻病毒“吉”毒株的猪胎肠上皮原代单层细胞培养物,于感染后在第18、30、45、96小时扑杀。以免疫组化法(间接法)进行抗原定位的研究。研究表明:猪流行性腹泻病毒主要侵袭、感染仔猪小肠绒毛... 本试验给8头3日龄同窝仔猪经口感染猪流行性腹泻病毒“吉”毒株的猪胎肠上皮原代单层细胞培养物,于感染后在第18、30、45、96小时扑杀。以免疫组化法(间接法)进行抗原定位的研究。研究表明:猪流行性腹泻病毒主要侵袭、感染仔猪小肠绒毛上皮细胞,此外还感染大肠粘膜上皮细胞、肠腺上皮细胞、肠系膜淋巴结的巨噬细胞,而与TCE的全身感染不同;以感染30小时,腹泻10小时左右,空肠中、后部阳性细胞最多;腹泻10小时后,小肠绒毛上皮有的变成矮立方形、扁平上皮,有的空泡化,还有的仍为柱状,但这些细胞中都见有阳性反＊，闪而证明这些细胞都畜病毒抗原存在。腹泻1则、时左右的病猪，取其空肠中、后部等病料，用hU切氏液固定、、蜡包埋切片，免疫酶组化法（间接法）染色，可作为流行性腹泻病猪死后诊断的一种特异性方法；石蜡切片以O．15％胰酶在37”C温箱湿盒中消化45分钟最为适宜；为防止脱片，使用乳白胶（工呵OQ）粘片效果最佳；组织切片制备中使用甲苯作为透明剂其免疫酶组化法染色效果优于二甲苯；使用IIRpspA’i呐标免抗猪几G，二行效果无明显差异。 展开更多

关键词 猪流行性腹泻 病理学研究 流行性腹泻病 小肠绒毛 细胞培养物 间接法 组化 乳白胶 大肠粘膜 腺上皮细胞

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养殖对虾病毒病PCR诊断方法的建立及在流行病学调查中的应用 被引量：1

2

作者 薄清如 吴小伦 +6 位作者 黄建珍 徐海聂 朱建洪 王小玉 黄云君 周思波 陈静静 《中国畜牧兽医》 CAS 2004年第10期38-41,共4页

利用分子生物学技术 ,建立了一种快速、准确、实用的养殖对虾白斑病和斑节对虾杆状病毒的 PCR检测方法 ,通过特异性试验和敏感性试验 ,并经测序 ,其 PCR产物与目的基因符合率为 99% ,证实该方法具有良好的特异性。本项目还将该方法应用... 利用分子生物学技术 ,建立了一种快速、准确、实用的养殖对虾白斑病和斑节对虾杆状病毒的 PCR检测方法 ,通过特异性试验和敏感性试验 ,并经测序 ,其 PCR产物与目的基因符合率为 99% ,证实该方法具有良好的特异性。本项目还将该方法应用于对虾育苗过程的各个环节 ,并对珠海地区养殖场养殖对虾、市场销售的对虾和进出口对虾等进行了对虾白斑病毒和斑节对虾杆状病毒的流行病学调查。在调查中首次发现虾蛄对虾白斑病毒呈阳性反应 ,说明该病毒可以感染除对虾外的节肢动物。 展开更多

关键词 养殖对虾病毒病 PCR诊断方法 应用

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突破技术壁垒限制 提高动物性食品出口竞争力

3

作者 薄清如 《中国畜牧兽医》 CAS 2004年第8期3-5,共3页

加入WTO后,美日欧等发达国家以技术贸易壁垒限制中国动物性产品出口。如何跨越技术壁垒,提高我国产品出口竞争力已成为当前一项十分紧迫的任务。作者介绍了发达国家技术壁垒概况,分析了我国动物性食品安全现状及技术性贸易壁垒对我国出... 加入WTO后,美日欧等发达国家以技术贸易壁垒限制中国动物性产品出口。如何跨越技术壁垒,提高我国产品出口竞争力已成为当前一项十分紧迫的任务。作者介绍了发达国家技术壁垒概况,分析了我国动物性食品安全现状及技术性贸易壁垒对我国出口动物性食品的冲击,提出了加强我国动物性食品安全工作突破技术壁垒限制的措施。 展开更多

关键词 技术壁垒 动物性食品 出口竞争力

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口蹄疫研究概况 被引量：14

4

作者 汪洋 亢文华 +1 位作者 白永平 薄清如 《中国畜牧兽医》 CAS 2004年第9期47-48,i001,共3页

口蹄疫是偶蹄兽以口、舌、唇、蹄、乳房等部位发生水疱和溃烂为特征的一种急性热性高度接触性传染病 ,作者综述了近年来口蹄疫的病原、流行特点、临床症状、病理变化、防制等研究进展。

关键词 口蹄疫 流行特点 防疫 病原 流行特点 临床症状 病理变化

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口蹄疫病毒群特异性荧光PCR检测方法研究 被引量：10

5

作者 杨素 吴小伦 +5 位作者 花群义 徐自忠 周晓黎 贾建军 薄清如 潘文波 《中国畜牧兽医》 CAS 2004年第11期44-46,共3页

应用荧光 PCR技术 ,利用 O型口蹄疫病毒 (FMDV)的 5′端 UTR区的 IRES片段设计和合成了可检测 7个血清型FMDV群特异性引物和 Taqman探针 ,建立了 1种敏感性高、特异性强、快速的检测方法 ,耗时仅为 4 h,克服了传统的病毒分离鉴定方法耗... 应用荧光 PCR技术 ,利用 O型口蹄疫病毒 (FMDV)的 5′端 UTR区的 IRES片段设计和合成了可检测 7个血清型FMDV群特异性引物和 Taqman探针 ,建立了 1种敏感性高、特异性强、快速的检测方法 ,耗时仅为 4 h,克服了传统的病毒分离鉴定方法耗时长 ,敏感性和准确性较差 ,而且容易造成病毒扩散及环境污染的缺点 ,可广泛应用于动物的大批量、快速检疫。 展开更多

关键词 口蹄疫病毒 群特异性 检测 荧光PCR 检疫

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猪繁殖与呼吸综合征RT-LAMP检测方法研究 被引量：5

6

作者 杨素 沙才华 +6 位作者 顾海洋 董尚智 廖秀云 徐海聂 薄清如 罗宝正 陈伟生 《中国畜牧兽医》 CAS 北大核心 2011年第6期136-141,共6页

应用反转录环介导等温扩增技术(RT-LAMP),利用猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)核衣壳蛋白(N蛋白)ORF7基因保守序列的6个区域设计2对特异引物,经反应体系、反应条件优化及敏感性和特异性试验,建立了PRRSV RT-LAMP检测方法。研究结果表明,... 应用反转录环介导等温扩增技术(RT-LAMP),利用猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)核衣壳蛋白(N蛋白)ORF7基因保守序列的6个区域设计2对特异引物,经反应体系、反应条件优化及敏感性和特异性试验,建立了PRRSV RT-LAMP检测方法。研究结果表明,该检测方法不需要复杂仪器,仅用一台普通恒温水浴锅,在等温条件(63℃)保温1 h,即可完成核酸扩增反应,加入核酸染料SYBR GreenⅠ后,用肉眼即可对试验结果进行准确判定,为田间和基层部门检测猪繁殖与呼吸综合征病毒提供了一种廉价、简便、快速、敏感、特异的新方法。 展开更多

关键词 猪繁殖与呼吸综合征病毒 RT-LAMP 检测方法 研究

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抗H5N1型禽流感病毒单克隆抗体的制备与鉴定 被引量：6

7

作者 连晓雯 杜惠芬 +4 位作者 李克生 崔燕 徐海聂 薄清如 黄新民 《甘肃农业大学学报》 CAS CSCD 2007年第2期26-29,共4页

制备抗H5N1型禽流感病毒单克隆抗体并对其进行鉴定.采用纯化抗原免疫BALB/c小鼠,取免疫小鼠脾细胞与骨髓瘤细胞融合,筛选分泌抗AIV-H5N1的单克隆抗体细胞株,将阳性细胞株接种小鼠腹腔制备单克隆抗体腹水并对腹水抗体进行纯化,测定抗体亚... 制备抗H5N1型禽流感病毒单克隆抗体并对其进行鉴定.采用纯化抗原免疫BALB/c小鼠,取免疫小鼠脾细胞与骨髓瘤细胞融合,筛选分泌抗AIV-H5N1的单克隆抗体细胞株,将阳性细胞株接种小鼠腹腔制备单克隆抗体腹水并对腹水抗体进行纯化,测定抗体亚类,并对其抗原结合位点进行分析.共获得了5株单克隆抗体杂交瘤细胞株,均为抗AIV-H5N1的特异性单克隆抗体,而且与H9N1型禽流感病毒,H13型禽流感病毒,鸡新城疫病毒,产蛋下降综合征病毒,鸡传染性支气管炎病毒均无交叉反应. 展开更多

关键词 禽流感病毒 单克隆抗体 ELISA

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TaqMan探针荧光RT-PCR检测狂犬病病毒 被引量：5

8

作者 王振全 罗宝正 +5 位作者 薄清如 周昌芳 白鸽 许远靖 王冲 吴殿君 《中国畜牧兽医》 CAS 北大核心 2012年第6期79-82,共4页

根据GenBank已公布的狂犬病病毒(rabies virus,RV)核蛋白(N)基因序列设计并合成一对特异性的引物和探针,建立基于TaqMan探针的荧光RT-PCR检测狂犬病病毒方法。对狂犬病疫苗提取核酸后进行RT-PCR扩增,将目的条带切胶回收,克隆测序,重组... 根据GenBank已公布的狂犬病病毒(rabies virus,RV)核蛋白(N)基因序列设计并合成一对特异性的引物和探针,建立基于TaqMan探针的荧光RT-PCR检测狂犬病病毒方法。对狂犬病疫苗提取核酸后进行RT-PCR扩增,将目的条带切胶回收,克隆测序,重组质粒作为标准阳性对照。对建立的TaqMan探针荧光RT-PCR方法做灵敏度、特异性、重复性及稳定性试验。结果显示,该方法可以达到10拷贝/μL的灵敏度,可以将狂犬病病毒与犬瘟热病毒、犬细小病毒、犬腺病毒、犬冠状病毒和犬副流感病毒分开,方法重复性好,稳定可靠。 展开更多

关键词 狂犬病病毒 TAQMAN探针 荧光RT-PCR

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新型基因芯片检测禽流感病毒、鸡新城疫病毒和鸡减蛋综合征病毒 被引量：3

9

作者 廖秀云 陶虹 +5 位作者 邵建宏 罗宝正 薄清如 刘国昌 徐海聂 沙才华 《动物医学进展》 CSCD 北大核心 2013年第10期15-20,共6页

建立了可同时筛选禽流感病毒(AIV)通用型、H4、H5、H6、H7、H9、N1、N2、N9亚型及鸡新城疫病毒(NDV)、鸡减蛋综合征病毒(EDSV)的基因芯片检测方法。从GenBank中下载相关序列,利用分子生物学软件设计特异性引物和杂交探针。使用Dr.chip... 建立了可同时筛选禽流感病毒(AIV)通用型、H4、H5、H6、H7、H9、N1、N2、N9亚型及鸡新城疫病毒(NDV)、鸡减蛋综合征病毒(EDSV)的基因芯片检测方法。从GenBank中下载相关序列,利用分子生物学软件设计特异性引物和杂交探针。使用Dr.chip系统进行芯片点样、杂交、显色、读数,优化反应条件后做灵敏度、特异性试验,然后应用于临床检验。结果显示,各病原间无交叉反应,探针可特异性识别靶基因;病原的最低浓度为4.83pg/μL,灵敏度较高;每个梯度的两个反应结果一致,重复性良好。对临床样品检验,结果同病毒分离鉴定方法一致。本研究建立的基因芯片检测方法可用于禽流感通用型、H4、H5、H6、H7、H9、N1、N2、N9亚型及NDV、EDSV的鉴别检测。 展开更多

关键词 基因芯片 禽流感病毒 新城疫病毒 鸡减蛋综合征病毒

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实时荧光RT-PCR鉴别检测美洲型PRRSV及其变异株 被引量：3

10

作者 罗宝正 王连想 +3 位作者 薄清如 王爱民 徐海聂 黄好兴 《动物医学进展》 CSCD 北大核心 2011年第5期18-21,共4页

本研究建立了美洲型猪繁殖与呼吸障碍综合征病毒（Porcine reproductive and respiratory syn-drome virus,PRRSV）通用实时荧光RT-PCR和PRRSV变异株特异性实时荧光RT-PCR检测方法,对方法的灵敏度和特异性进行了验证,并对24个临床可疑... 本研究建立了美洲型猪繁殖与呼吸障碍综合征病毒（Porcine reproductive and respiratory syn-drome virus,PRRSV）通用实时荧光RT-PCR和PRRSV变异株特异性实时荧光RT-PCR检测方法,对方法的灵敏度和特异性进行了验证,并对24个临床可疑样品进行检测。结果显示,实时荧光RT-PCR可以检测到0.47 TCID50的病毒培养液,灵敏度略高于病毒分离方法;两个实时荧光RT-PCR都具有良好的特异性,无交叉反应。在对24个临床可疑样品的检测中,阳性率与病毒分离方法一致（21/24）,检测时间也缩短为70 min。本研究建立的方法有潜力应用于传统美洲型PRRSV及其变异株（NSP2 1594~1680缺失）感染引起的PRRS和高致病性PRRS的监测和鉴别诊断。 展开更多

关键词 猪繁殖与呼吸综合征病毒 变异株 实时荧光RT-PCR 鉴别诊断

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大肠杆菌O157志贺毒素1胶乳凝集试剂的研制 被引量：1

11

作者 刘建青 周志江 +2 位作者 韩烨 郑峰 薄清如 《食品科学》 EI CAS CSCD 北大核心 2006年第1期29-33,共5页

根据大肠杆菌933W志贺毒素1(STX1)基因的序列,设计合成寡核苷酸引物,以国内分离的大肠杆菌O157菌株94H的DNA为摸板,经PCR扩增志贺毒素1A亚基基因,扩增的基因克隆到原核表达载体pET-28a,在E.coliBL21中进行表达。用表达的STX1A产物免疫兔... 根据大肠杆菌933W志贺毒素1(STX1)基因的序列,设计合成寡核苷酸引物,以国内分离的大肠杆菌O157菌株94H的DNA为摸板,经PCR扩增志贺毒素1A亚基基因,扩增的基因克隆到原核表达载体pET-28a,在E.coliBL21中进行表达。用表达的STX1A产物免疫兔子,制备STX1A抗血清,从中提取IgG。合成胶乳,用提取的IgG与胶乳交连反应,研制出了敏感和简便的检测大肠杆菌O157STX1产生的胶乳检测试剂。 展开更多

关键词 大肠杆菌O157 志贺毒素1 A亚基 原核表达 胶乳试剂

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多重荧光PCR鉴别诊断猪瘟病毒和非洲猪瘟病毒 被引量：9

12

作者 陈静静 罗宝正 +5 位作者 沙才华 廖秀云 王振全 陈伟生 徐海聂 薄清如 《湖北畜牧兽医》 2012年第2期4-6,9,共4页

为了建立一种快速、灵敏、特异的能够同时检测猪瘟病毒和非洲猪瘟病毒的多重荧光PCR方法,根据GenBank中公布的猪瘟病毒基因序列,设计一套特异性的引物和探针,对猪瘟病料提取RNA,经RT-PCR扩增后将产物回收,克隆至pMD18-T构建pMD18-T-CSF... 为了建立一种快速、灵敏、特异的能够同时检测猪瘟病毒和非洲猪瘟病毒的多重荧光PCR方法,根据GenBank中公布的猪瘟病毒基因序列,设计一套特异性的引物和探针,对猪瘟病料提取RNA,经RT-PCR扩增后将产物回收,克隆至pMD18-T构建pMD18-T-CSFV阳性质粒;非洲猪瘟的目的片段序列采用化学合成,构建pMD18-T-ASFV阳性质粒。以两种阳性质粒为模板对建立的多重荧光PCR方法做特异性、灵敏度和重复性试验,结果表明该方法可以将猪瘟病毒和非洲猪瘟病毒同口蹄疫病毒、猪传染性胃肠炎病毒、猪繁殖与呼吸综合征病毒、猪水泡病病毒、猪圆环病毒2型区分开,灵敏度可以达到10拷贝的数量级,而且方法稳定。对2份已知猪瘟阳性血清样品和120份猪内脏、猪鼻腔拭子及血清样品检测后,发现对已知阳性样品的检测结果符合预期目标,未知样品检出猪瘟病毒3份阳性,未检出非洲猪瘟病毒阳性。 展开更多

关键词 猪瘟病毒 非洲猪瘟病毒 多重荧光PCR 检测

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H5N1禽流感病毒核酸多重RT-PCR检测方法的建立 被引量：1

13

作者 廖秀云 徐海聂 +4 位作者 徐博文 沙才华 罗宝正 薄清如 杨素 《湖北畜牧兽医》 2013年第4期5-7,共3页

根据禽流感病毒的基质蛋白(M)基因序列和H5亚型禽流感病毒血凝素(HA)基因、神经氨酸酶(NA)基因设计并合成了三对特异性引物,用于建立H5N1禽流感病毒核酸的RT-PCR分型鉴定方法。试验证明,建立的多重PCR方法可以将H5N1与H6N2、H9N2有效区... 根据禽流感病毒的基质蛋白(M)基因序列和H5亚型禽流感病毒血凝素(HA)基因、神经氨酸酶(NA)基因设计并合成了三对特异性引物,用于建立H5N1禽流感病毒核酸的RT-PCR分型鉴定方法。试验证明,建立的多重PCR方法可以将H5N1与H6N2、H9N2有效区分。该方法具有较好的灵敏度和特异性,适合在基层动物防疫和监督部门进行H5N1禽流感病毒核酸的检测。 展开更多

关键词 禽流感病毒 H5N1 多重RT-PCR 检测

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Taqman探针荧光PCR检测鲨鱼源性成分 被引量：2

14

作者 陈轩 廖秀云 +6 位作者 陶旻 罗宝正 薄清如 沙才华 黄海超 徐海聂 杨素 《食品与生物技术学报》 CAS CSCD 北大核心 2015年第10期1083-1088,共6页

针对鲨鱼产品掺杂造假增多而缺乏有效鉴定技术的情况,作者根据Gen Bank中鲨鱼基因的线粒体DNA(mt DNA)序列,使用分子生物学软件Primer Express 2.0设计了一套特异性引物和探针,用来建立Taqman探针荧光PCR检测鲨鱼源性成分的方法。结果表... 针对鲨鱼产品掺杂造假增多而缺乏有效鉴定技术的情况,作者根据Gen Bank中鲨鱼基因的线粒体DNA(mt DNA)序列,使用分子生物学软件Primer Express 2.0设计了一套特异性引物和探针,用来建立Taqman探针荧光PCR检测鲨鱼源性成分的方法。结果表明,对13份已鉴定为鲨鱼鱼翅的样品进行检测,全部出现特异性扩增曲线,阴性对照没有荧光增长。方法特异性强,对市场购买的12份鲨鱼源性样品及9份其他鱼类样品进行检测,12份鲨鱼样品均出现荧光扩增曲线,而非鲨鱼样品均未出现荧光增长;方法灵敏度较高,可检测到的最低质粒拷贝数量级为10拷贝/μL;方法快速准确,操作简便,重复性好,稳定可靠,可应用于市场上鱼翅等常见鲨鱼源性产品的真假鉴定。 展开更多

关键词 鲨鱼源性成分 TAQMAN探针 荧光PCR 检测

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狂犬病病毒RT-LAMP检测方法的建立 被引量：2

15

作者 何媛 罗宝正 +6 位作者 邵建宏 薄清如 徐海聂 林瑞庆 沙才华 廖秀云 陈步雲 《动物医学进展》 CSCD 北大核心 2013年第5期1-5,共5页

本研究利用逆转录环介导等温核酸扩增技术(RT-LAMP),以狂犬病病毒的核蛋白基因保守区段设计LAMP引物,建立了狂犬病病毒的RT-LAMP快速检测方法,并对建立的方法进行了特异性、灵敏度和稳定性试验。结果显示,该方法检测结果可直接用肉眼判... 本研究利用逆转录环介导等温核酸扩增技术(RT-LAMP),以狂犬病病毒的核蛋白基因保守区段设计LAMP引物,建立了狂犬病病毒的RT-LAMP快速检测方法,并对建立的方法进行了特异性、灵敏度和稳定性试验。结果显示,该方法检测结果可直接用肉眼判断,重复性好,稳定可靠,可将狂犬病病毒与犬瘟热病毒(CDV)、犬副流感病毒(PIV)、犬腺病毒(CAV)、犬细小病毒(CPV)进行鉴别,对86份犬唾液样品和3种商品化狂犬病疫苗进行检测表明,建立的方法适用于样品中狂犬病病毒的临床检测。 展开更多

关键词 狂犬病病毒 逆转录-环介导等温核酸扩增技术 检测

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加强检疫科研工作 促进检疫事业和地方经济发展──拱北局动检科研工作回顾和展望

16

作者 薄清如 罗财利 《中国动物检疫》 CAS 1998年第5期41-42,共2页

加强检疫科研，提高检疫质量，严防国内国外疫病传入传出，保护我国农林牧渔业生产及人民健康，促进经济贸易的发展是《检疫法》赋予口岸动植物检疫机关的神圣职责。近年来，我局在检疫科研方面做了大量工作，检疫技术、检疫质量不断提... 加强检疫科研，提高检疫质量，严防国内国外疫病传入传出，保护我国农林牧渔业生产及人民健康，促进经济贸易的发展是《检疫法》赋予口岸动植物检疫机关的神圣职责。近年来，我局在检疫科研方面做了大量工作，检疫技术、检疫质量不断提高，为特区经济发展和建设作出了贡献... 展开更多

关键词 动物检疫 植物检疫 科研工作

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