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牦牛源产气荚膜梭菌β2基因的原核表达及生物信息学分析
1
作者
索朗斯珠
黄家旗
+4 位作者
罗润波
吴丹
蔡重振
李宇鹏
叶丽君
《高原农业》
2023年第4期359-371,共13页
为了原核表达一株牦牛源产气荚膜梭菌Qinghai-1的β2基因及了解其编码蛋白的生物信息。首先利用PCR扩增技术、基因克隆技术构建原核表达质粒并通过高通量测序、双酶切技术、SDS-PAGE检测和Western blotting方法对表达情况进行鉴定,其次...
为了原核表达一株牦牛源产气荚膜梭菌Qinghai-1的β2基因及了解其编码蛋白的生物信息。首先利用PCR扩增技术、基因克隆技术构建原核表达质粒并通过高通量测序、双酶切技术、SDS-PAGE检测和Western blotting方法对表达情况进行鉴定,其次利用生物信息学分析的方法对β2毒素蛋白的一级结构、二级结构、蛋白特殊区域、三级结构及B细胞线性抗原表位等多方面进行预测分析。原核表达结果显示:牦牛源产气荚膜梭菌β2基因在温度为37℃,IPTG浓度为1.5 mmoL/L,培养时间为8 h~10 h的条件下可得到大小约为28KD的可溶于细胞质的不含信号肽的目的蛋白。生物信息学分析结果显示:牦牛源产气荚膜梭菌β2基因大小为798 bp,共编码265个氨基酸,与印度的产气荚膜梭(FR687302.1)的β2毒素基因相似性最高;其分子式为C_(1392)H_(2136)N_(356)O_(418)S_(11),分子量为30.9 ku,pI=6.04,负电荷(Asp+Glu)残基总数36个,正电荷(Arg+Lys)残基总数35个,脂肪指数:74.64,不稳定指数:28.52,亲水性总平均值(GRAVY):-0.478;拥有1个跨膜螺旋和35个潜在磷酸化位点;为含跨膜结构的、含信号肽的、含磷酸化位点的、含多个B细胞线性抗原表位的、稳定的亲水性蛋白。研究结果旨在准确预测牦牛源产气荚膜梭菌β2毒素抗原表位,为进一步研究牦牛源产气荚膜梭菌β2毒素致病机理提供重要理论依据。
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关键词
牦牛
产气荚膜梭菌
β2基因
原核表达
生物信息学分析
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职称材料
西藏那曲市羊源大肠杆菌分离鉴定及耐药性研究
被引量：
16
2
作者
陈家露
蔡重振
+4 位作者
次旦
高家登
扎西次仁
索朗斯珠
罗润波
《中国畜牧兽医》
CAS
北大核心
2019年第12期3759-3767,共9页
为了解西藏那曲市羊大肠杆菌的耐药情况,指导临床进行合理用药,本试验从那曲市采集羊新鲜无污染腹泻物92份,进行大肠杆菌显色培养基分离、革兰氏染色镜检、生化鉴定、分子生物学鉴定、致泻性大肠杆菌生化鉴定、药敏试验及耐药基因检测...
为了解西藏那曲市羊大肠杆菌的耐药情况,指导临床进行合理用药,本试验从那曲市采集羊新鲜无污染腹泻物92份,进行大肠杆菌显色培养基分离、革兰氏染色镜检、生化鉴定、分子生物学鉴定、致泻性大肠杆菌生化鉴定、药敏试验及耐药基因检测。结果显示,分离菌株在大肠杆菌显色培养基上呈蓝色菌落、革兰氏染色为粉红色的短杆菌,通过生化鉴定及23S rRNA的PCR检测得到26株羊源大肠杆菌,分离率为28.3%;其中25株符合致泻性大肠杆菌生化特性,致泻菌株分离率为27.2%。药敏试验结果显示,所得25株羊源大肠杆菌对氨苄西林的耐药性较高,耐药率为24.0%;对羧苄西林、卡那霉素的耐药性次之,耐药率为8%;对哌拉西林、头孢呋辛、庆大霉素、四环素、米诺霉素等药物耐药率为4%;对诺氟沙星、氧氟沙星、环丙沙星等药物极为敏感,可作为临床用药。5种耐药基因检测结果显示,bla TEM基因检出率为100%,表明分离菌均含有相应的耐药基因。以上结果表明,西藏那曲市羊源大肠杆菌对多种药物耐药,提示在临床实践过程中应注重合理用药、联合用药,减缓大肠杆菌耐药性的产生。
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关键词
羊
大肠杆菌
分离鉴定
药敏试验
耐药基因
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职称材料
题名
牦牛源产气荚膜梭菌β2基因的原核表达及生物信息学分析
1
作者
索朗斯珠
黄家旗
罗润波
吴丹
蔡重振
李宇鹏
叶丽君
机构
西藏农牧学院动物科学院
出处
《高原农业》
2023年第4期359-371,共13页
基金
财政部和农业农村部:国家现代农业产业技术体系(CARS-37)。
文摘
为了原核表达一株牦牛源产气荚膜梭菌Qinghai-1的β2基因及了解其编码蛋白的生物信息。首先利用PCR扩增技术、基因克隆技术构建原核表达质粒并通过高通量测序、双酶切技术、SDS-PAGE检测和Western blotting方法对表达情况进行鉴定,其次利用生物信息学分析的方法对β2毒素蛋白的一级结构、二级结构、蛋白特殊区域、三级结构及B细胞线性抗原表位等多方面进行预测分析。原核表达结果显示:牦牛源产气荚膜梭菌β2基因在温度为37℃,IPTG浓度为1.5 mmoL/L,培养时间为8 h~10 h的条件下可得到大小约为28KD的可溶于细胞质的不含信号肽的目的蛋白。生物信息学分析结果显示:牦牛源产气荚膜梭菌β2基因大小为798 bp,共编码265个氨基酸,与印度的产气荚膜梭(FR687302.1)的β2毒素基因相似性最高;其分子式为C_(1392)H_(2136)N_(356)O_(418)S_(11),分子量为30.9 ku,pI=6.04,负电荷(Asp+Glu)残基总数36个,正电荷(Arg+Lys)残基总数35个,脂肪指数:74.64,不稳定指数:28.52,亲水性总平均值(GRAVY):-0.478;拥有1个跨膜螺旋和35个潜在磷酸化位点;为含跨膜结构的、含信号肽的、含磷酸化位点的、含多个B细胞线性抗原表位的、稳定的亲水性蛋白。研究结果旨在准确预测牦牛源产气荚膜梭菌β2毒素抗原表位,为进一步研究牦牛源产气荚膜梭菌β2毒素致病机理提供重要理论依据。
关键词
牦牛
产气荚膜梭菌
β2基因
原核表达
生物信息学分析
Keywords
yak
Clostridium perfringens
β2 gene
prokaryotic expression
bioinformatics analysis
分类号
S852.616.3 [农业科学—基础兽医学]
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职称材料
题名
西藏那曲市羊源大肠杆菌分离鉴定及耐药性研究
被引量：
16
2
作者
陈家露
蔡重振
次旦
高家登
扎西次仁
索朗斯珠
罗润波
机构
西藏农牧学院动物科学学院
西藏那曲市畜牧兽医技术推广站
西藏那曲市班戈县农牧科学技术服务站
出处
《中国畜牧兽医》
CAS
北大核心
2019年第12期3759-3767,共9页
基金
兽医学创新创业平台建设
2019年自治区级大学生创新创业训练计划项目
班戈县畜牧业综合发展关键技术研究
文摘
为了解西藏那曲市羊大肠杆菌的耐药情况,指导临床进行合理用药,本试验从那曲市采集羊新鲜无污染腹泻物92份,进行大肠杆菌显色培养基分离、革兰氏染色镜检、生化鉴定、分子生物学鉴定、致泻性大肠杆菌生化鉴定、药敏试验及耐药基因检测。结果显示,分离菌株在大肠杆菌显色培养基上呈蓝色菌落、革兰氏染色为粉红色的短杆菌,通过生化鉴定及23S rRNA的PCR检测得到26株羊源大肠杆菌,分离率为28.3%;其中25株符合致泻性大肠杆菌生化特性,致泻菌株分离率为27.2%。药敏试验结果显示,所得25株羊源大肠杆菌对氨苄西林的耐药性较高,耐药率为24.0%;对羧苄西林、卡那霉素的耐药性次之,耐药率为8%;对哌拉西林、头孢呋辛、庆大霉素、四环素、米诺霉素等药物耐药率为4%;对诺氟沙星、氧氟沙星、环丙沙星等药物极为敏感,可作为临床用药。5种耐药基因检测结果显示,bla TEM基因检出率为100%,表明分离菌均含有相应的耐药基因。以上结果表明,西藏那曲市羊源大肠杆菌对多种药物耐药,提示在临床实践过程中应注重合理用药、联合用药,减缓大肠杆菌耐药性的产生。
关键词
羊
大肠杆菌
分离鉴定
药敏试验
耐药基因
Keywords
sheep
E.coli
isolation and identification
drug susceptibility test
drug resistance gene
分类号
S852.61 [农业科学—基础兽医学]
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职称材料
题名
作者
出处
发文年
被引量
操作
1
牦牛源产气荚膜梭菌β2基因的原核表达及生物信息学分析
索朗斯珠
黄家旗
罗润波
吴丹
蔡重振
李宇鹏
叶丽君
《高原农业》
2023
0
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职称材料
2
西藏那曲市羊源大肠杆菌分离鉴定及耐药性研究
陈家露
蔡重振
次旦
高家登
扎西次仁
索朗斯珠
罗润波
《中国畜牧兽医》
CAS
北大核心
2019
16
在线阅读
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职称材料
已选择
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