[目的]克隆广西水牛ghrelin的cDNA并对其进行序列分析。[方法]以广西沼泽型水牛的真胃底组织总RNA为模板,用特异性引物扩增ghrelin的cDNA。扩增产物经凝胶回收纯化后与pMD 18-T连接并转化大肠杆菌DH5α,转化产物经PCR和双酶切鉴定后筛...[目的]克隆广西水牛ghrelin的cDNA并对其进行序列分析。[方法]以广西沼泽型水牛的真胃底组织总RNA为模板,用特异性引物扩增ghrelin的cDNA。扩增产物经凝胶回收纯化后与pMD 18-T连接并转化大肠杆菌DH5α,转化产物经PCR和双酶切鉴定后筛选出阳性克隆,阳性克隆经5×1 m l LB液体培养基培养鉴定后测序。[结果]成功获得了广西水牛ghrelin的cDNA,该片段长339 bp,编码113个氨基酸。BLAST分析结果表明,该片段与黄牛前原ghrelin基因仅有6个碱基的差异,同源性为98.2%;而两者ghrelin均由27个氨基酸组成,序列同源性为100%。[结论]为进一步研究ghrelin基因的生物学功能提了供理论基础。展开更多
文摘[目的]克隆广西水牛ghrelin的cDNA并对其进行序列分析。[方法]以广西沼泽型水牛的真胃底组织总RNA为模板,用特异性引物扩增ghrelin的cDNA。扩增产物经凝胶回收纯化后与pMD 18-T连接并转化大肠杆菌DH5α,转化产物经PCR和双酶切鉴定后筛选出阳性克隆,阳性克隆经5×1 m l LB液体培养基培养鉴定后测序。[结果]成功获得了广西水牛ghrelin的cDNA,该片段长339 bp,编码113个氨基酸。BLAST分析结果表明,该片段与黄牛前原ghrelin基因仅有6个碱基的差异,同源性为98.2%;而两者ghrelin均由27个氨基酸组成,序列同源性为100%。[结论]为进一步研究ghrelin基因的生物学功能提了供理论基础。
