检测非洲猪瘟McAb-ELISA竞争试剂盒的建立及初步应用 被引量：13

1

作者 董志珍 肖妍 +2 位作者 赵祥平 栾慎顺 张霞 《中国动物检疫》 CAS 2012年第4期37-40,共4页

用基因重组技术制备的非洲猪瘟蛋白P54免疫BALB/C小鼠,将免疫鼠的脾细胞与SP2/0骨髓瘤细胞融合,采用有限稀释法进行克隆,获得能稳定分泌抗ASFV单克隆抗体的杂交瘤细胞株。使用该单克隆抗体,建立了检测血清中非洲猪瘟抗体的竞争法ELISA... 用基因重组技术制备的非洲猪瘟蛋白P54免疫BALB/C小鼠,将免疫鼠的脾细胞与SP2/0骨髓瘤细胞融合,采用有限稀释法进行克隆,获得能稳定分泌抗ASFV单克隆抗体的杂交瘤细胞株。使用该单克隆抗体,建立了检测血清中非洲猪瘟抗体的竞争法ELISA。实验结果表明:ELISA竞争法特异性高,无交叉反应,灵敏度高于间接免疫荧光法,可用于猪血清的非洲猪瘟抗体检测。该法的建立对非洲猪瘟实验诊断的标准以及流行病学调查具有重要的现实意义。 展开更多

关键词 单克隆抗体 McAb-ELISA 非洲猪瘟 实验诊断

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H7N9禽流感病毒等温扩增快速检测方法的建立 被引量：5

2

作者 董志珍 郑文杰 +7 位作者 王乃福 赵祥平 吴冬雪 王玉玲 马晶 贾润清 王建华 张晓光 《中国动物检疫》 CAS 2013年第7期72-77,共6页

目的建立H7N9禽流感病毒环介导等温扩增(LAMP)快速检测方法。方法从GISAID数据库中获得H7N9禽流感病毒血凝素(HA)和神经氨酸酶(NA)基因序列,应用DNAStar软件MegAlign程序分析其序列,利用PrimerExplorer V4软件在序列保守区域设计LAMP引... 目的建立H7N9禽流感病毒环介导等温扩增(LAMP)快速检测方法。方法从GISAID数据库中获得H7N9禽流感病毒血凝素(HA)和神经氨酸酶(NA)基因序列,应用DNAStar软件MegAlign程序分析其序列,利用PrimerExplorer V4软件在序列保守区域设计LAMP引物,即外引物、内引物,同时以所克隆的阳性质粒为模板,建立H7N9禽流感病毒等温扩增快速检测方法。结果LAMP检测方法对H7N9禽流感病毒的灵敏度达到10个拷贝,所用引物对于H1、H3、H5亚型禽流感病毒和新城疫病毒无非特异性扩增,表现出良好特异性。结论建立的H7N9禽流感病毒等温扩增快速检测方法灵敏度高、特异性强,为快速检测禽流感病毒提供了新方法。 展开更多

关键词 H7N9 禽流感病毒 等温扩增

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非洲猪瘟病毒检测试剂盒的研制 被引量：4

3

作者 董志珍 赵祥平 +2 位作者 张霞 肖妍 栾慎顺 《中国动物检疫》 CAS 2012年第1期31-33,共3页

针对非洲猪瘟病毒(ASFV)P54基因建立荧光PCR检测方法,通过优化引物、TaqMan探针浓度及反应温度,研发了ASFV检测的荧光PCR检测试剂盒。经灵敏度的重复性试验及3种不同型号荧光PCR仪使用验证,所研发的试剂盒灵敏度为101copy/μL,适用于不... 针对非洲猪瘟病毒(ASFV)P54基因建立荧光PCR检测方法,通过优化引物、TaqMan探针浓度及反应温度,研发了ASFV检测的荧光PCR检测试剂盒。经灵敏度的重复性试验及3种不同型号荧光PCR仪使用验证,所研发的试剂盒灵敏度为101copy/μL,适用于不同型号荧光PCR仪使用,可用于对非洲猪瘟病毒的快速检测。 展开更多

关键词 非洲猪瘟病毒 荧光定量PCR 试剂盒

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建立A_(72)细胞进行猪传染性胃肠炎血清中和试验的研究 被引量：1

4

作者 董志珍 侯艳梅 +2 位作者 赵祥平 霍蕾 尚洪茹 《中国动物检疫》 CAS 北大核心 2005年第8期25-26,共2页

引进了一株狗直肠瘤细胞系A72,将该细胞株进行培养传代,用于猪传染性胃肠炎中和试验研究,与用传统的猪肾细胞系PK15进行的猪传染性胃肠炎血清中和试验对比,用ELISA对这2株细胞的中和试验结果进行验证。结果表明,运用A72进行的病毒繁殖,... 引进了一株狗直肠瘤细胞系A72,将该细胞株进行培养传代,用于猪传染性胃肠炎中和试验研究,与用传统的猪肾细胞系PK15进行的猪传染性胃肠炎血清中和试验对比,用ELISA对这2株细胞的中和试验结果进行验证。结果表明,运用A72进行的病毒繁殖,其毒价明显高于PK15,A72在血清中和试验结果上优于PK15,且由TGEV导致A72发生的病理改变明显强于PK15,猪TGE血清中和试验与酶联免疫吸附检测结果试验的重复性较好。 展开更多

关键词 A72细胞 猪 传染性胃肠炎 血清中和试验 狗直肠瘤细胞系

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生物素标记IBDV─RNA探针的制备及其对IBDV─RNA检测的初步研究 被引量：1

5

作者 董志珍 胡永浩 +1 位作者 王蒲 沈正达 《甘肃农业大学学报》 CAS CSCD 1994年第3期279-282,共4页

以传染性法氏囊病毒强毒株接种９日龄鸡胚尿囊腔，待鸡胚死亡后，收集其尿囊液，提取病毒。纯化的病毒ＲＮＡ在３％琼脂糖凝胶电泳上呈现出２９０ｂｐ和３４００ｂｐ的两条带。收集这两条带，以病毒全基因组制备生物素标记的探针。此探... 以传染性法氏囊病毒强毒株接种９日龄鸡胚尿囊腔，待鸡胚死亡后，收集其尿囊液，提取病毒。纯化的病毒ＲＮＡ在３％琼脂糖凝胶电泳上呈现出２９０ｂｐ和３４００ｂｐ的两条带。收集这两条带，以病毒全基因组制备生物素标记的探针。此探针有良好的特异性。它不与其它３种禽类病毒（ＮＤＶ，ＩＢＶ，ＩＬＶ）的核酸抽提物发生交叉反应。此试验是快速、敏感、可重复的。其敏感度达０．５ｐｇ。 展开更多

关键词 IBD 病毒 鸡病 生物素标记

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微生物快速检测技术研究进展 被引量：2

6

作者 董志珍 秦贞奎 《天津畜牧兽医》 1996年第3期12-13,共2页

微生物快速检测技术研究进展董志珍秦贞奎（天津动植物检疫局３００４５７）食品中的微生物是人类许多疾病发生的根源之一。近来，食物病原微生物导致的疾病随处可见，且平均每年发病１９７５万例（１），死亡４６００人。这些疾病每年... 微生物快速检测技术研究进展董志珍秦贞奎（天津动植物检疫局３００４５７）食品中的微生物是人类许多疾病发生的根源之一。近来，食物病原微生物导致的疾病随处可见，且平均每年发病１９７５万例（１），死亡４６００人。这些疾病每年对食品生产及国家经济造成的损失约为... 展开更多

关键词 食品 微生物检验 研究进展 HGMF 免疫学

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生物素标记IBDV－RNA探针的制备及应用的初步研究

7

作者 董志珍 张中庸 《天津畜牧兽医》 1996年第1期16-18,共3页

以传染性法氏囊病毒强毒株接种９日龄鸡胚尿囊腔，待鸡胚死亡后，收集其尿囊液，提纯病毒。纯化的病毒在３％琼脂糖凝胶电泳上呈现出２９００ｂｐ和３４００ｂｐ的两条带。收集这两带，以病毒全基因组制备生物素标记的探针。此探针有良... 以传染性法氏囊病毒强毒株接种９日龄鸡胚尿囊腔，待鸡胚死亡后，收集其尿囊液，提纯病毒。纯化的病毒在３％琼脂糖凝胶电泳上呈现出２９００ｂｐ和３４００ｂｐ的两条带。收集这两带，以病毒全基因组制备生物素标记的探针。此探针有良好的特异性，它不与其它三种禽类病毒（ＮＤＶ、ＩＢＶ、ＩＬＶ）的核酸抽提物发生交叉反应。此试验快速、敏感、可重复，其敏感度达０．５ｐｇ。 展开更多

关键词 法氏囊病毒 RNA探针 斑点杂交 IBD

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用MDBK传代细胞繁殖BVDV毒株的研究 被引量：13

8

作者 王树成 林建辉 +1 位作者 刘宏 董志珍 《中国动物检疫》 CAS 1995年第4期6-8,共3页

关键词 牛病 病毒性腹泻 病毒 MDBK 传代细胞繁殖

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口蹄疫、水泡性口炎和猪水泡病多重荧光定量RT-PCR检测方法的建立 被引量：4

9

作者 王乃福 黄晨 +3 位作者 吴冬雪 赵祥平 陈本龙 董志珍 《食品安全质量检测学报》 CAS 2015年第2期466-471,共6页

目的建立同时检测口蹄疫病毒、水泡性口炎病毒和猪水泡病病毒的多重荧光RT-PCR检测方法。方法根据口蹄疫病毒3D蛋白编码基因、水泡性口炎病毒N蛋白编码基因和猪水泡病病毒VP1蛋白编码基因的高保守区设计特异性引物和探针,对3种动物病毒... 目的建立同时检测口蹄疫病毒、水泡性口炎病毒和猪水泡病病毒的多重荧光RT-PCR检测方法。方法根据口蹄疫病毒3D蛋白编码基因、水泡性口炎病毒N蛋白编码基因和猪水泡病病毒VP1蛋白编码基因的高保守区设计特异性引物和探针,对3种动物病毒进行多重荧光定量RT-PCR扩增。结果经过扩增,可以同时检测口蹄疫病毒、水泡性口炎病毒和猪水泡病病毒,而其他参试病原均无扩增信号,显示其良好的特异性。对口蹄疫病毒、水泡性口炎病毒、猪水泡病病毒的最低检测限分别达到101、102、102个质粒拷贝浓度。结论本方法灵敏度高,特异性良好,可实现多种病毒混合感染的同时检测。 展开更多

关键词 口蹄疫病毒 水泡型口炎病毒 猪水泡病病毒 多重荧光定量RT-PCR

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尼帕病毒与猪流感病毒双重荧光定量RT-PCR方法的建立 被引量：4

10

作者 王建华 赵祥平 +7 位作者 董志珍 肖妍 王玉玲 张俊哲 陈小金 王乃福 陈本龙 赵丹 《动物医学进展》 北大核心 2016年第1期11-16,共6页

根据尼帕病毒(NiV)M基因和猪流感病毒(SIV)M基因序列设计引物和TaqMan-MGB探针,通过优化反应条件建立了一种鉴别NiV和SIV的双重实时荧光定量RT-PCR检测方法,对该方法的定量线性范围、敏感性、重复性和特异性进行了评价及初步应用。结果... 根据尼帕病毒(NiV)M基因和猪流感病毒(SIV)M基因序列设计引物和TaqMan-MGB探针,通过优化反应条件建立了一种鉴别NiV和SIV的双重实时荧光定量RT-PCR检测方法,对该方法的定量线性范围、敏感性、重复性和特异性进行了评价及初步应用。结果显示,用该方法检测NiV M基因的RNA标准对照(NiV-M-RNA)和SIV M基因的RNA标准对照(SIV-M-RNA),定量线性范围分别为4.6×101copies/μL^4.6×108 copies/μL和5.8×101copies/μL^5.8×108 copies/μL,检出限分别为46个拷贝和58个拷贝。该方法的组内试验和组间试验的变异系数均小于1.6%,显示其良好的可重复性。该方法仅对NiV-M-RNA和SIV呈现特异性扩增曲线,不与猪瘟病毒(CSFV)、猪流行腹泻病毒(PEDV)、猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)、猪细小病毒(PPV)、猪圆环病毒2型(PCV-2)和伪狂犬病病毒(PRV)发生交叉反应。用该方法对236份猪的鼻拭子样品进行NiV和SIV的同时检测,所有样本的NiV检测结果均为阴性,有1份样本的SIV检测结果为阳性。本研究建立的方法可为猪临床样本中NiV和SIV的鉴别检测提供了一种快速、敏感和特异的技术手段。 展开更多

关键词 尼帕病毒 猪流感病毒 TAQMAN-MGB探针 双重荧光定量RT-PCR

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一种检测奶样中布鲁氏菌抗体免疫层析方法的建立 被引量：6

11

作者 肖妍 李蓉蓉 +5 位作者 霍蕾 董志珍 张俊哲 赵丹 杨若松 郭鹏 《中国动物检疫》 CAS 2019年第5期68-73,共6页

通过制备脂多糖(LPS)并将其作为检测抗原,建立了一种检测奶样中布鲁氏菌抗体的酶联免疫层析方法。通过对处理方法和反应条件的优化,制备出敏感性高、特异性强的布鲁氏菌抗体检测试纸条。该试纸条敏感性为98.0%,抗体滴度为1:2~1:8,特异性... 通过制备脂多糖(LPS)并将其作为检测抗原,建立了一种检测奶样中布鲁氏菌抗体的酶联免疫层析方法。通过对处理方法和反应条件的优化,制备出敏感性高、特异性强的布鲁氏菌抗体检测试纸条。该试纸条敏感性为98.0%,抗体滴度为1:2~1:8,特异性为96.0%,且与其他常见病原无交叉反应,批内、批间重复性良好。保存期加速试验显示,该试纸条在2~30℃下可保存12个月;符合率验证显示,该方法与标准奶样的符合率达94.9%。上述结果表明,该检测方法具有敏感性高、特异性强以及方便、快捷等优点,适用于现场大批量检测,因而可应用于奶牛场布鲁氏菌病的快速诊断。 展开更多

关键词 布鲁氏菌 免疫层析 抗体 奶样

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ELISA、AGID和PCR方法检测牛白血病的比较试验研究 被引量：5

12

作者 赵祥平 王建华 +5 位作者 董志珍 王玉玲 王乃福 张永年 刘亚峰 刘红梅 《中国动物检疫》 CAS 2013年第9期56-58,共3页

为比较ELISA、AGID和PCR方法检测牛白血病的检出率和符合率,本试验采用这三种方法对隔离期间总数为3998头的乌拉圭进口奶牛进行了牛白血病检测。试验结果表明,对奶牛的牛白血病检测以ELISA方法检出率最高,检出牛白血病抗体阳性牛23头,... 为比较ELISA、AGID和PCR方法检测牛白血病的检出率和符合率,本试验采用这三种方法对隔离期间总数为3998头的乌拉圭进口奶牛进行了牛白血病检测。试验结果表明,对奶牛的牛白血病检测以ELISA方法检出率最高,检出牛白血病抗体阳性牛23头,检出率为0.58%(23/3998);AGID方法检出牛白血病抗体阳性牛18头,检出率为0.45%(18/3998),与ELISA方法的符合率为78%;而PCR方法检出牛白血病前病毒核酸阳性牛12头,检出率为0.30%(12/3998),与ELISA方法和AGID方法的符合率分别为43%和55%。 展开更多

关键词 牛白血病 ELISA AGID PCR 比较试验

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两种ELISA试剂盒与血清中和试验检测牛赤羽病的比较 被引量：4

13

作者 肖妍 赵祥平 +5 位作者 董志珍 张永年 王勤 张俊哲 赵丹 王建华 《中国动物检疫》 CAS 2017年第12期81-83,共3页

为比较两种商品化赤羽病抗体ELISA试剂盒的敏感性和特异性,以及ELISA和微量血清中和试验(SNT)的符合率,采用两种ELISA试剂盒和血清中和试验,对690份澳大利亚纯种荷斯坦奶牛血清进行牛赤羽病检测。试验结果显示:法国某公司生产的赤羽病EL... 为比较两种商品化赤羽病抗体ELISA试剂盒的敏感性和特异性,以及ELISA和微量血清中和试验(SNT)的符合率,采用两种ELISA试剂盒和血清中和试验,对690份澳大利亚纯种荷斯坦奶牛血清进行牛赤羽病检测。试验结果显示:法国某公司生产的赤羽病ELISA试剂盒敏感性为93.42%,特异性为81.23%,与SNT间的Kappa值为0.615,为高度符合;日本某公司生产的赤羽病ELISA试剂盒敏感性为39.47%,特异性为96.1%,与SNT间的Kappa值为0.427,为中度符合。比较结果表明:日本某公司生产的试剂盒敏感性较低,容易漏检,不适合用于牛赤羽病初筛;在出入境检疫中,可以采用高通量、半自动化、敏感性高的ELISA方法,对血清样本进行筛选,再采用特异性强的SNT试验进行辅助验证。 展开更多

关键词 赤羽病 ELISA 微量血清中和试验 比较试验

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盐酸克伦特罗酶标抗原的制备及鉴定 被引量：2

14

作者 黄晨 吴冬雪 +4 位作者 王禹 张俊哲 柴铭骏 董志珍 赵祥平 《食品研究与开发》 CAS 北大核心 2015年第6期97-100,共4页

选取辣根过氧化物为抗原标记酶,采用重氮化法将盐酸克伦特罗CLEN分别与牛血清蛋白(BSA)、卵清蛋白(OVA)偶联,合成包被抗原和免疫原,并通过紫外光谱扫描(UV)、SDS聚丙烯酞胺凝胶电泳法验证偶联成功。这为下一步获得针对盐酸克伦特罗类特... 选取辣根过氧化物为抗原标记酶,采用重氮化法将盐酸克伦特罗CLEN分别与牛血清蛋白(BSA)、卵清蛋白(OVA)偶联,合成包被抗原和免疫原,并通过紫外光谱扫描(UV)、SDS聚丙烯酞胺凝胶电泳法验证偶联成功。这为下一步获得针对盐酸克伦特罗类特异性单克隆抗体制备及其相应食品安全检测试剂盒开发奠定了基础。 展开更多

关键词 盐酸克伦特罗 重氮化法 ELISA

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两种方法检测牛地方流行性白血病的比较 被引量：3

15

作者 王作佳 赵祥平 +4 位作者 王乃福 张永年 王玉玲 刘亚峰 董志珍 《中国动物检疫》 CAS 2013年第10期74-76,共3页

目的分析ELISA方法和AGID方法检测奶牛地方流行性白血病的一致性。方法应用酶联免疫吸附试验(ELISA)和琼脂凝胶免疫扩散试验(AGID)两种方法,平行检测来自乌拉圭的3998份奶牛血清中的牛白血病病毒抗体。结果 ELISA和AGID对牛地方流行性... 目的分析ELISA方法和AGID方法检测奶牛地方流行性白血病的一致性。方法应用酶联免疫吸附试验(ELISA)和琼脂凝胶免疫扩散试验(AGID)两种方法,平行检测来自乌拉圭的3998份奶牛血清中的牛白血病病毒抗体。结果 ELISA和AGID对牛地方流行性白血病病毒抗体的阳性符合率、阴性符合率及总符合率分别达到100%(18/18)、99.42%(3975/3998)、99.87%(3993/3998),表明两种方法的符合率较高,均可用于奶牛地方流行性白血病的诊断和血清学筛查,其中ELISA方法阳性检出率高于AGID方法。 展开更多

关键词 酶联免疫吸附试验(ELISA) 琼脂凝胶免疫扩散试验(AGID) 牛白血病病毒(BLV)

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我国部分地区传染性羊痒病基因型的分布情况调查 被引量：2

16

作者 肖妍 董志珍 +1 位作者 栾慎顺 陈本龙 《中国动物检疫》 CAS 2011年第12期45-47,71,共4页

引起羊痒病的病原朊蛋白是一种正常的唾液酸糖蛋白(PrPc)在三级结构发生改变后形成的异常蛋白(PrPsc)。该病的发生与绵羊朊蛋白编码基因PRNP遗传多样性密切相关,主要表现在PRNP第136、154和171位密码子组成的PRNP基因型与绵羊对痒病的... 引起羊痒病的病原朊蛋白是一种正常的唾液酸糖蛋白(PrPc)在三级结构发生改变后形成的异常蛋白(PrPsc)。该病的发生与绵羊朊蛋白编码基因PRNP遗传多样性密切相关,主要表现在PRNP第136、154和171位密码子组成的PRNP基因型与绵羊对痒病的抗病性的联系。根据已建立的一种利用荧光定量PCR扩增反应对羊痒病抗性基因进行筛选的方法,对我国部分地区的无角多赛特绵羊羊痒病基因分布情况进行调查,从而从品种选育水平上杜绝羊痒病的发生。 展开更多

关键词 羊痒病 传染性海绵状脑病 PRNP 羊痒病抗性基因分型

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基因3型猪戊型肝炎病毒荧光定量RT-PCR检测方法的建立 被引量：2

17

作者 陈小金 董志珍 +7 位作者 赵祥平 王建华 刘洋 王玉玲 陈本龙 肖妍 王乃福 张俊哲 《中国动物检疫》 CAS 2016年第7期72-77,共6页

对GenBank中基因3型猪戊型肝炎病毒（HEV）代表毒株基因进行序列分析,最终选定ORF3基因的部分序列为目的基因,运用生物信息学软件设计特异性引物和探针,扩增获得目的片段,并构建重组载体p UC-19-ORF3。梯度稀释重组质粒制备标准品,初步... 对GenBank中基因3型猪戊型肝炎病毒（HEV）代表毒株基因进行序列分析,最终选定ORF3基因的部分序列为目的基因,运用生物信息学软件设计特异性引物和探针,扩增获得目的片段,并构建重组载体p UC-19-ORF3。梯度稀释重组质粒制备标准品,初步建立检测基因3型HEV的实时荧光定量PCR方法。对建立的检测方法进行特异性、敏感性和重复性验证。结果表明,标准品浓度在108～102 copies/μL范围内线性关系良好,相关系数为0.996。特异性试验结果显示,其它几种常见猪病病原体（猪流行性腹泻病毒、猪轮状病毒、猪传染性胃肠炎病毒、猪瘟病毒和猪繁殖与呼吸综合征病毒）未见典型扩增曲线。敏感性试验证实本方法的最低检测下限为101 copies/μL。重复性试验表明该方法对3个标准品检测结果的批内和批间变异系数低于2%。用该方法抽检59份进境猪肉样品,同时用普通RT-PCR方法对这些样品进行符合性试验,结果均为阴性。本研究所建立的检测方法不仅适用于进境猪肉样品中基因3型HEV的监控检测,而且还可用于基因3型HEV的早期临床诊断及分子流行病学调查。 展开更多

关键词 猪戊型肝炎病毒 TAQMAN探针 荧光定量RT-PCR

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猪戊型肝炎病毒检测技术的研究进展 被引量：1

18

作者 陈小金 吴冬雪 +2 位作者 刘国红 王乃福 董志珍 《食品安全质量检测学报》 CAS 2015年第2期416-421,共6页

猪戊型肝炎是一种新的人畜共患病,其病原戊型肝炎病毒(hepatitis E virus,HEV)是无囊膜的RNA病毒,主要通过消化道进行传播。研究发现,世界上许多国家的猪群中普遍存在HEV抗体及猪戊型肝炎病毒RNA携带。与患病猪群密切接触、食用未煮熟... 猪戊型肝炎是一种新的人畜共患病,其病原戊型肝炎病毒(hepatitis E virus,HEV)是无囊膜的RNA病毒,主要通过消化道进行传播。研究发现,世界上许多国家的猪群中普遍存在HEV抗体及猪戊型肝炎病毒RNA携带。与患病猪群密切接触、食用未煮熟的猪肉或猪肉制品、被污染的水源及水产品,这些因素都可增加戊型肝炎的患病风险。猪作为戊型肝炎病毒的宿主,不仅对公共卫生和食品安全构成威胁,同时对人类戊型肝炎流行病学有很大的影响。本文简要介绍了HEV的病原学以及抗原抗体检测方法,包括血清学、免疫学及分子生物学方法等,并对国内外开展的戊型肝炎检测技术的研究进展进行综述。 展开更多

关键词 猪戊型肝炎病毒 人畜共患病 检测技术

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A型猪流感病毒TaqMan探针荧光RT-PCR检测方法的建立 被引量：1

19

作者 王建华 陈小金 +8 位作者 肖妍 王玉玲 谭旭菲 赵丹 张俊哲 陈本龙 王乃福 董志珍 赵祥平 《中国动物检疫》 CAS 2016年第12期85-88,共4页

根据A型猪流感病毒(SIV)的基质蛋白(M)编码基因保守序列设计合成一对特异性引物和一条Taq Man探针,建立了一种检测A型SIV的荧光RT-PCR方法。结果显示,该方法对H1N1、H3N2和H9N2亚型SIV均呈特异性扩增,对猪瘟病毒、猪繁殖与呼吸综合征病... 根据A型猪流感病毒(SIV)的基质蛋白(M)编码基因保守序列设计合成一对特异性引物和一条Taq Man探针,建立了一种检测A型SIV的荧光RT-PCR方法。结果显示,该方法对H1N1、H3N2和H9N2亚型SIV均呈特异性扩增,对猪瘟病毒、猪繁殖与呼吸综合征病毒、猪流行性腹泻病毒和猪传染性胃肠炎病毒等猪的其他常见病毒无交叉扩增反应;该方法对M基因RNA对照(SIV-M-RNA)的最适线性检测范围为3.8×10~1~3.8×10~8拷贝数/反应,标准曲线方程为Y=-3.4365X+40.091,相关系数(R^2)为0.999 8,最低检出限为38个拷贝数的SIV-M-RNA。对3个不同浓度(3.8×10~3~3.8×10~5 copies/μL)的SIV-M-RNA进行组间和组内重复试验,每个浓度的Ct值变异系数均小于1.5%,具有良好的重现性。用该方法对860份进口猪的鼻拭子样本和78份国内猪场猪鼻拭子样本进行SIV检测,结果进口猪鼻拭子样本的SIV检测均为阴性,17份国内猪场猪鼻拭子样本SIV检测为阳性。本研究提供了一种快速、敏感和特异的A型猪流感病毒检测方法。 展开更多

关键词 A型猪流感病毒 TAQMAN探针 荧光RT-PCR

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一种鉴别尼帕病毒和高致病性猪繁殖与呼吸综合征病毒二重荧光RT-PCR检测方法的建立

20

作者 王建华 董志珍 +2 位作者 王玉玲 肖妍 赵祥平 《中国畜牧兽医》 CAS 北大核心 2016年第2期348-355,共8页

为建立一种快速、敏感和特异地鉴别尼帕病毒（NiV）和高致病性猪繁殖与呼吸综合征病毒（HP-PRRSV）的检测方法,本试验以NiV M基因和HP-PRRSVnsp2基因为靶序列,通过优化反应条件建立了一种二重荧光RT-PCR检测方法,并对该方法的特异性、... 为建立一种快速、敏感和特异地鉴别尼帕病毒（NiV）和高致病性猪繁殖与呼吸综合征病毒（HP-PRRSV）的检测方法,本试验以NiV M基因和HP-PRRSVnsp2基因为靶序列,通过优化反应条件建立了一种二重荧光RT-PCR检测方法,并对该方法的特异性、定量线性范围、敏感性和重复性进行了评价及初步应用。结果显示,用该方法检测NiV M基因和HP-PRRSVnsp2基因的RNA标准对照（NiV-M-RNA和HP-PRRSV-nsp2-RNA）,线性范围分别为4.6×101-4.6×107和4.1×101-4.1×108拷贝/μL;最低检出限分别为46和4.1拷贝;该方法组内试验和组间试验的变异系数均小于2.0%,显示出良好的可重复性;该方法仅对NiV和HP-PRRSV呈现特异性扩增曲线,不与猪瘟病毒（CSFV）、猪流行性腹泻病毒（PEDV）、猪流感病毒（SIV）、猪细小病毒（PPV）、猪伪狂犬病病毒（PRV）和猪圆环病毒2型（PCV2）发生交叉反应。用该方法对236份猪实际样品进行NiV和HP-PRRSV核酸检测,所有样本的NiV检测结果均为阴性,8份样本的HP-PRRSV检测结果为阳性。本研究建立的方法为猪实际样本中NiV和HP-PRRSV的鉴别检测提供了一种快速、敏感和特异的技术手段。 展开更多

关键词 尼帕病毒 高致病性猪繁殖与呼吸综合征病毒 TAQMAN-MGB探针 二重荧光RT-PCR方法

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