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小干扰RNA沉默脂肪酸合酶基因对人肝细胞株HepG2脂代谢的影响
1
作者
张秀云
冯艳萍
+5 位作者
熊东
叶文静
朱粒仁
范阿强
陈建业
宋永砚
《中国循环杂志》
CSCD
北大核心
2015年第7期670-674,共5页
目的:研究基因干扰技术沉默脂肪酸合酶(FAS)基因后对人肝细胞株HepG2细胞内外脂质含量及脂代谢相关基因表达的影响。方法:合成3对针对FAS mRNA不同位点序列的小干扰RNA(siRNA),分别转染至人肝细胞株HepG 2,实时荧光定量聚合酶链反应(PCR...
目的:研究基因干扰技术沉默脂肪酸合酶(FAS)基因后对人肝细胞株HepG2细胞内外脂质含量及脂代谢相关基因表达的影响。方法:合成3对针对FAS mRNA不同位点序列的小干扰RNA(siRNA),分别转染至人肝细胞株HepG 2,实时荧光定量聚合酶链反应(PCR)检测空白对照组(HepG2细胞不经过任何处理)、阴性对照组(转染没有任何基因干扰作用的阴性siRNA)、FAS-siR NA-1转染组、FAS-siRNA-2转染组和FAS-siRNA-3转染组的FAS mRNA的表达。蛋白免疫印迹(Western blot)法检测蛋白质的表达水平,筛选出沉默效果最佳的一对siR NA。将最有效siRNA转染至HepG2细胞,48 h后测定细胞内外甘油三酯及总胆固醇含量以及脂代谢相关基因的mRNA表达水平。结果:25 nmol/L si RNA和3μl/孔(24孔板)转染试剂的转染效率最高。FAS-siRNA-3对HepG2的FAS基因的沉默效果最好,FAS-si RNA-3转染组的FAS在mRNA水平和蛋白水平分别降低为空白对照组的(52.33±3.07)%和(51.57±3.14)%。FAS-siRNA-3沉默FAS基因后HepG2的细胞内和细胞外培养液中甘油三酯含量显著低于空白对照组,细胞外总胆固醇含量显著低于空白对照组。与空白对照组比较,FAS-siRNA-3转染组HepG2的肝脂酶基因mRNA表达水平显著升高(P<0.0001),微粒体甘油三酯转运蛋白基因mRNA表达水平显著降低(P<0.05),差异均有统计学意义。结论:FAS基因沉默可显著降低HepG2细胞内甘油三酯、细胞外培养液甘油三酯和总胆固醇的含量,需进一步的体内外实验加以验证。
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关键词
小干扰RNA
脂肪酸合酶
人肝细胞株HepG2
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题名
小干扰RNA沉默脂肪酸合酶基因对人肝细胞株HepG2脂代谢的影响
1
作者
张秀云
冯艳萍
熊东
叶文静
朱粒仁
范阿强
陈建业
宋永砚
机构
川北医学院基础医学院生物化学教研室
川北医学院临床医学系
出处
《中国循环杂志》
CSCD
北大核心
2015年第7期670-674,共5页
基金
四川省应用基础研究计划(2013JY0072)
四川省教育厅重点项目(12ZA232)
文摘
目的:研究基因干扰技术沉默脂肪酸合酶(FAS)基因后对人肝细胞株HepG2细胞内外脂质含量及脂代谢相关基因表达的影响。方法:合成3对针对FAS mRNA不同位点序列的小干扰RNA(siRNA),分别转染至人肝细胞株HepG 2,实时荧光定量聚合酶链反应(PCR)检测空白对照组(HepG2细胞不经过任何处理)、阴性对照组(转染没有任何基因干扰作用的阴性siRNA)、FAS-siR NA-1转染组、FAS-siRNA-2转染组和FAS-siRNA-3转染组的FAS mRNA的表达。蛋白免疫印迹(Western blot)法检测蛋白质的表达水平,筛选出沉默效果最佳的一对siR NA。将最有效siRNA转染至HepG2细胞,48 h后测定细胞内外甘油三酯及总胆固醇含量以及脂代谢相关基因的mRNA表达水平。结果:25 nmol/L si RNA和3μl/孔(24孔板)转染试剂的转染效率最高。FAS-siRNA-3对HepG2的FAS基因的沉默效果最好,FAS-si RNA-3转染组的FAS在mRNA水平和蛋白水平分别降低为空白对照组的(52.33±3.07)%和(51.57±3.14)%。FAS-siRNA-3沉默FAS基因后HepG2的细胞内和细胞外培养液中甘油三酯含量显著低于空白对照组,细胞外总胆固醇含量显著低于空白对照组。与空白对照组比较,FAS-siRNA-3转染组HepG2的肝脂酶基因mRNA表达水平显著升高(P<0.0001),微粒体甘油三酯转运蛋白基因mRNA表达水平显著降低(P<0.05),差异均有统计学意义。结论:FAS基因沉默可显著降低HepG2细胞内甘油三酯、细胞外培养液甘油三酯和总胆固醇的含量,需进一步的体内外实验加以验证。
关键词
小干扰RNA
脂肪酸合酶
人肝细胞株HepG2
Keywords
Small Interfering RNA
Fatty acid synthase
Human hepatic cell line HepG2
分类号
R54 [医药卫生—心血管疾病]
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题名
作者
出处
发文年
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1
小干扰RNA沉默脂肪酸合酶基因对人肝细胞株HepG2脂代谢的影响
张秀云
冯艳萍
熊东
叶文静
朱粒仁
范阿强
陈建业
宋永砚
《中国循环杂志》
CSCD
北大核心
2015
0
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