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唾液样本CHGA夹心ELISA方法的建立及其在应激检测中的初步应用
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作者 单尼奇 刘善收 +8 位作者 王玉玲 刘辉 汪帅 武祎琳 段楚君 范瀚尹 荆杨梦杰 庄然 张春梅 《细胞与分子免疫学杂志》 北大核心 2025年第4期324-330,共7页
目的建立定量检测唾液中嗜铬粒蛋白A(CHGA)的双抗体夹心ELISA方法,并探究其在唾液样本检测中的初步应用。方法人CHGA重组蛋白免疫BALB/c小鼠,常规杂交瘤技术制备、筛选单克隆抗体(mAb);构建双抗体夹心ELISA检测方法,优化唾液样本基质效... 目的建立定量检测唾液中嗜铬粒蛋白A(CHGA)的双抗体夹心ELISA方法,并探究其在唾液样本检测中的初步应用。方法人CHGA重组蛋白免疫BALB/c小鼠,常规杂交瘤技术制备、筛选单克隆抗体(mAb);构建双抗体夹心ELISA检测方法,优化唾液样本基质效应,并应用该方法检测应激人群唾液中的CHGA浓度。结果获得21株稳定分泌抗人CHGA的高效价杂交瘤细胞株。经方阵ELISA筛选出一对效果最佳的检测抗体,优化确定了最佳包被浓度为10μg/mL,最佳检测抗体稀释度为1∶32000。该方法的准确性及可重复性验证结果良好,批内和批间变异率均在15%以内,回收率在80%~120%之间。进一步对基质效应进行优化,使之适用于唾液样本检测;采集不同应激状态人群唾液样本,使用本研究方法检测CHGA水平,结果提示其具有反映应激强度的潜力。结论成功建立了可靠的唾液CHGA检测方法,并初步探索其作为生物标志物在应激相关研究中的应用价值。 展开更多
关键词 嗜铬粒蛋白A(CHGA) 单克隆抗体(mAb) 生物标志物 应激 唾液
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