微波高温处理的人皮质骨生物力学性质的研究 被引量：11

1

作者 叶军 徐可为 +4 位作者 蔡和平 朱蕊花 范清宇 唐农轩 张明华 《中国生物医学工程学报》 EI CAS CSCD 北大核心 2004年第1期15-20,共6页

目的 :明确微波高温处理的人皮质骨生物力学性质的变化 ,为预防微波介入式高温治疗的骨肿瘤患者病理骨折提供理论依据。方法 :微波高温加热人皮质骨 ,制备力学试样。进行静态拉伸、静态压缩试验。测定强度极限、断裂功 ,延伸率。结果 :... 目的 :明确微波高温处理的人皮质骨生物力学性质的变化 ,为预防微波介入式高温治疗的骨肿瘤患者病理骨折提供理论依据。方法 :微波高温加热人皮质骨 ,制备力学试样。进行静态拉伸、静态压缩试验。测定强度极限、断裂功 ,延伸率。结果 :微波高温处理 80℃ ,持续 30min ,皮质骨密度下降 5 .5 1%。在加载应变率为 0 .8～1.6× 10 -4s-1条件下 ,进行静力学试验。微波高温处理人皮质骨静拉伸强度无明显下降 ,压缩强度比正常皮质骨提高约 2 3%。显微硬度比正常湿润皮质骨提高 4 6 %。延伸率下降 4 3.2 % ,断裂功下降。结论 :微波高温损害了皮质骨的韧塑性 ,使骨组织脆性增加 ,易突发断裂。 展开更多

关键词 皮质骨 微波 高温热疗 生物力学 病理骨折

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关节镜下关节清理术治疗膝骨关节炎 被引量：10

2

作者 丁勇 陈艳 +3 位作者 范清宇 马保安 周勇 张明华 《中国内镜杂志》 CSCD 2003年第5期69-70,共2页

目的 :探讨关节镜下清理术治疗膝骨关节炎的疗效。方法 :自 1 999年 3月～ 2 0 0 2年 6月采关节镜下清理术治疗膝关节骨关节炎患者 1 2 5例 (1 70膝 )。结果 :平均随访 2 5个月 (6～ 48个月 ) ,优良率为 78.2 %。结论 :关节镜对于膝骨... 目的 :探讨关节镜下清理术治疗膝骨关节炎的疗效。方法 :自 1 999年 3月～ 2 0 0 2年 6月采关节镜下清理术治疗膝关节骨关节炎患者 1 2 5例 (1 70膝 )。结果 :平均随访 2 5个月 (6～ 48个月 ) ,优良率为 78.2 %。结论 :关节镜对于膝骨关节炎可做出明确诊断并确定病变程度 ,应根据术前临床表现有针对性的进行操作 。 展开更多

关键词 膝关节 骨关节炎 关节镜 清理术

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人骨髓间充质干细胞体外向软骨细胞分化的实验研究 被引量：10

3

作者 吴家昌 杨彤涛 +4 位作者 许啸 文艳华 韩建伟 范清宇 马保安 《医学研究生学报》 CAS 2010年第2期128-132,共5页

目的创伤等因素造成的关节软骨的损伤和退变是骨科常见和难以解决的问题之一。干细胞尤其是骨髓来源干细胞的研究促进了组织工程在骨关节领域的发展。文中研究体外单层培养条件下,成人骨髓间充质干细胞(bone marrow mesenchymal stem ce... 目的创伤等因素造成的关节软骨的损伤和退变是骨科常见和难以解决的问题之一。干细胞尤其是骨髓来源干细胞的研究促进了组织工程在骨关节领域的发展。文中研究体外单层培养条件下,成人骨髓间充质干细胞(bone marrow mesenchymal stem cell,BMSC)经诱导定向分化软骨细胞可行性。方法用全血贴壁法分离培养BMSC,并传代扩增后,用单层培养法在软骨诱导剂下进行诱导培养21 d,以常规培养液培养的BMSC作为阴性对照。光镜下观察诱导细胞形态学的改变,苏木素-伊红(HE)染色、甲苯胺蓝染色、Ⅱ型胶原蛋白免疫组化等方法检测诱导细胞的分泌功能。结果BMSC经21 d的单层诱导培养后,细胞形态由长梭形向多角形类圆形转变,细胞爬片甲苯胺蓝染色呈明显异染,Ⅱ型胶原蛋白免疫细胞化学检测阳性,对照组阴性。结论成人BMSC在单层培养条件下可成功诱导分化为软骨细胞。 展开更多

关键词 人骨髓间充质干细胞 体外诱导 分化 软骨细胞

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大鼠骨髓造血干细胞体外定向诱导、扩增树突状细胞及其功能鉴定 被引量：10

4

作者 于哲 范清宇 +1 位作者 张婷 刘云燕 《医学研究生学报》 CAS 2004年第7期588-591,共4页

目的 :以大鼠骨髓造血干细胞为来源 ,建立体外诱导、扩增树突状细胞 (dendriticcells,DC)的方法 ,并进行表型鉴定及功能检测。　方法 :从大鼠骨髓细胞中分离出造血干细胞 ,加入rGM CSF、rIL 4和nrhTNF α培养 1 2天获得大量DC ,经标抗大... 目的 :以大鼠骨髓造血干细胞为来源 ,建立体外诱导、扩增树突状细胞 (dendriticcells,DC)的方法 ,并进行表型鉴定及功能检测。　方法 :从大鼠骨髓细胞中分离出造血干细胞 ,加入rGM CSF、rIL 4和nrhTNF α培养 1 2天获得大量DC ,经标抗大鼠OX6 2单抗免疫磁珠分离纯化后的DC ,进行形态学观察、表型检测及刺激T细胞增殖能力分析。　结果 :大鼠骨髓造血干细胞经诱导培养 1 2天后 ,倒置显微镜和电镜下显示典型的DC形态和超微结构 ;流式细胞术分析显示细胞表面抗原高表达 ,其中OX6 2为 6 2 .1 9% ;MHCⅠ为 70 .4 0 % ;MHCⅡ为 78.2 8% ;CD80为 5 5 .5 8% ;CD86为 6 8.38% ,是典型的大鼠DC表型特征 ,同种混合淋巴细胞反应结果显示 ,DC具有高效的刺激T淋巴细胞活化增殖的能力。　结论 :大鼠骨髓造血干细胞可成功诱导为具有典型形态特征及功能的DC ,为进一步研究其在肿瘤免疫治疗中的应用打下基础。 展开更多

关键词 树突状细胞 造血干细胞 粒 巨噬细胞集落刺激因子 白细胞介素-4

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miR-30a-5p在人骨髓间充质干细胞向成骨细胞分化过程中的生物学功能及验证 被引量：11

5

作者 王海鹏 高杰 +4 位作者 张小平 樊志强 杨彤涛 范清宇 马保安 《中国医药导报》 CAS 2011年第16期23-26,F0003,共5页

目的:探讨并验证重组miRNA-30a-5p体外转染对人骨髓间充质干细胞(MSCs)向成骨细胞分化的生物学作用。方法:人工重组合成从人骨髓MSCs定向成骨分化差异性表达miRNA基因芯片结果中筛选成骨性表达量显著增高的miRNA-30a-5p。从人体骨髓中... 目的:探讨并验证重组miRNA-30a-5p体外转染对人骨髓间充质干细胞(MSCs)向成骨细胞分化的生物学作用。方法:人工重组合成从人骨髓MSCs定向成骨分化差异性表达miRNA基因芯片结果中筛选成骨性表达量显著增高的miRNA-30a-5p。从人体骨髓中分离培养MSCs,成骨诱导分化过程中于体外转染重组miRNA-30a-5p,并通过茜素红S法染色检测钙盐沉积、碱性磷酸酶(ALP)钙钴法染色及ALP比色法定量检测成骨细胞ALP活性,对比观察研究重组miRNA-30a-5p在人骨髓MSCs定向成骨诱导分化过程中的生物学功能。结果:成功分离培养人骨髓MSCs并诱导其成骨定向分化。经体外向MSCs转染miRNA-30a-5p并诱导其成骨定向分化,转染效率为(37.32±2.43)%。分别于诱导培养第14、21天行ALP染色观察、ALP活性测定、茜素红钙盐结节染色检测各组细胞成骨活性,结果显示miRNA-30a-5p mimics转染组MSCs成骨分化特性显著性增强(P<0.05)。结论:miRNA-30a-5p在MSCs定向成骨分化的过程中具有一定的促进增强作用,被转染的MSCs向成骨细胞定向分化表达有所增加,为进一步阐明人骨髓MSCs定向成骨分化的分子生化机制,细胞移植修复治疗骨缺损奠定了理论基础。 展开更多

关键词 骨髓间充质干细胞 MIRNA 成骨细胞 生物学功能研究

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体外诱导C2C12细胞向成骨细胞的分化 被引量：4

6

作者 张勇 杨彤涛 +3 位作者 胡运生 廖博 文艳华 范清宇 《医学研究生学报》 CAS 北大核心 2013年第5期473-477,共5页

目的成骨细胞特异性转录因子a1(core binding factor a1,Cbfa1)通过调节生长因子和骨特异性细胞外基质蛋白的基因表达而参与成骨细胞的分化和骨发育过程。文中构建成Cbfa1,以腺病毒载体转染成肌细胞C2C12,为种子细胞构建组织工程化骨。... 目的成骨细胞特异性转录因子a1(core binding factor a1,Cbfa1)通过调节生长因子和骨特异性细胞外基质蛋白的基因表达而参与成骨细胞的分化和骨发育过程。文中构建成Cbfa1,以腺病毒载体转染成肌细胞C2C12,为种子细胞构建组织工程化骨。方法体外培养小鼠成肌细胞C2C12,用重组腺病毒质粒pAd-IL-31介导Cbfa1/Osf2基因瞬时转染小鼠成肌C2C12细胞,Western blot检测Cbfa1蛋白表达。结果 Cbfa1蛋白表达、碱性磷酸酶(alkaline phosphatase,ALP)活性测定、骨钙素(osteocalcin,OCN)分泌量以及茜素红染色感染组明显高于对照组。结论成肌细胞C2C12可以作为种子细胞构建组织工程化骨。 展开更多

关键词 成骨细胞特异性转录因子a1 成肌细胞C2C12 Western BLOT

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大鼠骨肉瘤模型的建立 被引量：9

7

作者 于哲 范清宇 张婷 《动物医学进展》 CSCD 2005年第2期58-60,共3页

为建立大鼠骨肉瘤动物模型的方法, 用30只6周龄SD大鼠随机分为3组,将大 鼠骨肉瘤细胞系UMR 106分别以105,106, 107个数量注入大鼠股外侧皮下。接种后,每 周观察肿瘤生长情况,测量肿瘤直径,绘制肿 瘤生长曲线,连续5周。第6周取肿瘤病理 ... 为建立大鼠骨肉瘤动物模型的方法, 用30只6周龄SD大鼠随机分为3组,将大 鼠骨肉瘤细胞系UMR 106分别以105,106, 107个数量注入大鼠股外侧皮下。接种后,每 周观察肿瘤生长情况,测量肿瘤直径,绘制肿 瘤生长曲线,连续5周。第6周取肿瘤病理 材料,常规切片,HE染色,光镜下观察。结果 105个细胞及106个细胞组肿瘤生长情况不 佳;107个细胞组肿瘤发生率达到100%。说 明大鼠骨肉瘤细胞系UMR 106具有较强的 致瘤性,应用该细胞系建立的动物模型为骨 肉瘤综合治疗奠定了动物实验基础。 展开更多

关键词 肿瘤转移 骨肉瘤 动物模型 大鼠

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人成骨肉瘤细胞系转化生长因子β1成熟肽基因克隆及序列分析 被引量：3

8

作者 龙华 袁华 +2 位作者 范清宇 范德刚 赵宏 《医学研究生学报》 CAS 2003年第3期164-166,170,共4页

目的 :分析人成骨肉瘤细胞系中转化生长因子 β1(TGF β1)成熟肽基因序列 ,探讨TGF β1基因突变存在的可能性及其病理机制。　方法 :提取人成骨肉瘤细胞系SOSP 96 0 7中的总RNA ,采用逆转录PCR(RT PCR)方法获得TGF β1成熟肽基因 ,经克... 目的 :分析人成骨肉瘤细胞系中转化生长因子 β1(TGF β1)成熟肽基因序列 ,探讨TGF β1基因突变存在的可能性及其病理机制。　方法 :提取人成骨肉瘤细胞系SOSP 96 0 7中的总RNA ,采用逆转录PCR(RT PCR)方法获得TGF β1成熟肽基因 ,经克隆后进行序列测定和分析。　 结果 :发现人成骨肉瘤细胞系中存在TGF β1基因突变 ,并引起相应多肽的结构改变。　结论 :人成骨肉瘤细胞系SOSP 96 0 7中存在TGF β1基因突变 。 展开更多

关键词 成骨肉瘤 转化生长因子Β1 基因 突变

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人骨形成蛋白-7基因在人骨髓间充质干细胞中的表达和对其分化表型的影响 被引量：3

9

作者 鱼兵 范清宇 +3 位作者 闫露 栗艳 文艳华 刘云燕 《医学研究生学报》 CAS 2004年第12期1068-1071,F030,共5页

目的 :观察人骨形成蛋白 7(BMP 7)基因在人骨髓间充质干细胞 (hMSC)中的表达及对其成骨表型的影响。　方法 :利用AdEasy腺病毒表达系统构建人BMP 7基因表达腺病毒AdB7V ,体外感染hMSC后观察绿色荧光蛋白(GFP)表达及RT PCR、免疫组化方... 目的 :观察人骨形成蛋白 7(BMP 7)基因在人骨髓间充质干细胞 (hMSC)中的表达及对其成骨表型的影响。　方法 :利用AdEasy腺病毒表达系统构建人BMP 7基因表达腺病毒AdB7V ,体外感染hMSC后观察绿色荧光蛋白(GFP)表达及RT PCR、免疫组化方法鉴定外源基因的表达 ,通过对感染细胞的碱性磷酸酶 (ALP)染色和钙盐染色鉴定其成骨分化表型。　结果 :hMSC经AdB7V感染后 72h可观察到GFP表达 ,RT PCR、免疫细胞化学方法证实外源性BMP 7在hMSC中表达 ,感染细胞的ALP染色和钙盐染色均为阳性。　结论 :外源性的人BMP 展开更多

关键词 人BMP-7基因 骨髓间充质干细胞 腺病毒 成骨分化

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微波灭活保肢手术治疗下肢骨肿瘤的康复护理 被引量：4

10

作者 何立宏 范清宇 +2 位作者 张明华 王燕 赵艳立 《解放军护理杂志》 2003年第2期57-57,共1页

目的　探讨微波诱导高温原位灭活保肢手术治疗下肢骨肿瘤的护理方法 ,促进术后康复。方法　对 5 8例接受微波诱导高温原位灭活保肢手术的下肢骨肿瘤患者术前、术后给予心理护理 ,术后指导功能锻炼和免负荷支架的应用。结果　 5 8例患者... 目的　探讨微波诱导高温原位灭活保肢手术治疗下肢骨肿瘤的护理方法 ,促进术后康复。方法　对 5 8例接受微波诱导高温原位灭活保肢手术的下肢骨肿瘤患者术前、术后给予心理护理 ,术后指导功能锻炼和免负荷支架的应用。结果　 5 8例患者接受手术治疗并获平均 1年 2个月的随访 ,术后无褥疮、肺部感染、静脉栓塞和关节僵直等并发症的发生。结论　微波诱导高温原位灭活保肢手术治疗后 ,免负荷支架的应用有利于患者早期负重活动 ,减少并发症 ,最大程度保留患肢功能。 展开更多

关键词 下肢骨肿瘤 手术治疗 康复护理 高温原位灭活保肢技术 微波灭活保肢手术

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树突状细胞肿瘤疫苗的研究进展 被引量：8

11

作者 于哲 范清宇 《医学研究生学报》 CAS 2005年第1期63-66,70,共5页

树突状细胞 (DC)是目前发现功能最强的专职抗原呈递细胞 (APC) ,DC疫苗的开发研制尚处于早期阶段 ,但已获得的大量有价值的实验数据可以表明 ,DC在启动抗肿瘤免疫的抗原呈递中发挥出强大的功能。DC体外培养的方法渐趋成熟 ,提高DC生物... 树突状细胞 (DC)是目前发现功能最强的专职抗原呈递细胞 (APC) ,DC疫苗的开发研制尚处于早期阶段 ,但已获得的大量有价值的实验数据可以表明 ,DC在启动抗肿瘤免疫的抗原呈递中发挥出强大的功能。DC体外培养的方法渐趋成熟 ,提高DC生物学功效的手段多彩纷呈 ,日益增多的临床研究工作推动着该领域的迅速发展。作者就DC肿瘤疫苗制备方法及其在临床试验中的应用作一综述 ,并提出该免疫治疗中尚存在的一些问题。 展开更多

关键词 树突状细胞 融合疫苗 肿瘤 免疫疗法

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明胶对自固化磷酸钙骨水泥性能的影响 被引量：2

12

作者 潘朝晖 范清宇 +4 位作者 蔡和平 马保安 黄波 姜林莉 文艳华 《医学研究生学报》 CAS 2005年第8期696-699,i0014,共5页

目的:了解明胶对自固化磷酸钙骨水泥(CPC)物理性能、超微结构及生物相容性的影响。方法:分别以50g/L明胶和蒸馏水为液相,制备CPC试样,通过测定初步凝结时间和抗压强度,扫描电镜观察凝固体超微形态及大鼠骨髓基质干细胞(BMSC)表面种植试... 目的:了解明胶对自固化磷酸钙骨水泥(CPC)物理性能、超微结构及生物相容性的影响。方法:分别以50g/L明胶和蒸馏水为液相,制备CPC试样,通过测定初步凝结时间和抗压强度,扫描电镜观察凝固体超微形态及大鼠骨髓基质干细胞(BMSC)表面种植试验,比较两者差异。结果:复合明胶的CPC初步凝结时间为(5.31±1.18)min,抗压强度为(9.04±1.35)MPa;对照组初步凝结时间为(20.72±4.13)min,抗压强度为(4.38±1.33)MPa,与实验组比较,差异均有显著性意义(P<0.05)。扫描电镜发现固化体表面为颗粒状晶体,大小约10μm,添加明胶后晶体仍呈颗粒状,互相连接,孔隙较对照组少。细胞可在水泥盘上贴附、生长,实验组细胞数较多。结论:添加明胶可缩短自固化CPC的固化时间,提高抗压强度及生物相容性。 展开更多

关键词 明胶 磷酸钙骨水泥 抗压强度 生物相容性

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骨肉瘤细胞与成纤维细胞共培养刺激基质金属蛋白酶-2的产生和激活 被引量：2

13

作者 李存孝 杨彤涛 +3 位作者 范清宇 马保安 廖博 刘云燕 《医学研究生学报》 CAS 2006年第2期129-131,135,共4页

目的:了解骨肉瘤细胞表达的细胞外基质金属蛋白酶诱导因子(CD147)是否能刺激临近间质细胞产生和激活细胞外基质金属蛋白酶(MMP)。方法:骨肉瘤细胞MG63和人成纤维细胞(hFb)以及抗CD147抗体共培养,用凝胶电泳和W estern b lot的方法检测... 目的:了解骨肉瘤细胞表达的细胞外基质金属蛋白酶诱导因子(CD147)是否能刺激临近间质细胞产生和激活细胞外基质金属蛋白酶(MMP)。方法:骨肉瘤细胞MG63和人成纤维细胞(hFb)以及抗CD147抗体共培养,用凝胶电泳和W estern b lot的方法检测细胞培养液和细胞膜提取物。结果:首次证实骨肉瘤细胞表达CD147,并刺激成纤维细胞产生MMP-2的激活因子MT1-MMP、MT2-MMP、前体MMP-2(ProMMP-2)和激活ProMMP-2。结论:骨肉瘤细胞高表达CD147,并刺激成纤维细胞产生和激活MMP-2。 展开更多

关键词 细胞外基质金属蛋白酶诱导因子 基质金属蛋白酶 共培养 免疫印迹

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椎弓根内固定治疗腰椎滑脱的康复护理 被引量：24

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作者 房晓军 孙宏慧 范清宇 《护理学杂志（综合版）》 2003年第4期307-308,共2页

对 6 0例腰椎滑脱病人行椎弓根内固定治疗。术前加强心理护理 ,做床上排便练习 ;术后密切观察脊髓神经功能恢复及切口渗血、渗液情况 ,进行正确的体位护理和康复指导。结果 ,随访 6 0例 ,优 31例 ,良 2 4例 ,可 5例 ,优良率达 91.7% ,... 对 6 0例腰椎滑脱病人行椎弓根内固定治疗。术前加强心理护理 ,做床上排便练习 ;术后密切观察脊髓神经功能恢复及切口渗血、渗液情况 ,进行正确的体位护理和康复指导。结果 ,随访 6 0例 ,优 31例 ,良 2 4例 ,可 5例 ,优良率达 91.7% ,滑脱椎体复位率达 90 .8% ,腰腿痛及神经根压迫症状明显减轻。提示康复护理为病人提供了最大限度恢复其功能的可能性。 展开更多

关键词 腰椎滑脱症 椎弓根内固定 骨融合 护理

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微波诱导高温原位灭活治疗骨盆恶性肿瘤的护理 被引量：2

15

作者 房晓军 范清宇 +1 位作者 马保安 周勇 《解放军护理杂志》 2003年第2期60-61,共2页

目的　总结 76例应用插入式微波天线阵列诱导高温原位灭活治疗骨盆恶性肿瘤的护理。方法　根据围手术期患者的具体情况制定相应的护理措施。结果　平均随访 3年以上 ,8例局部复发 ,其中 5例死亡。其余 68例中 ,肢体关节功能优者 5 7例 ... 目的　总结 76例应用插入式微波天线阵列诱导高温原位灭活治疗骨盆恶性肿瘤的护理。方法　根据围手术期患者的具体情况制定相应的护理措施。结果　平均随访 3年以上 ,8例局部复发 ,其中 5例死亡。其余 68例中 ,肢体关节功能优者 5 7例 ,11例尚可 ,3例感染 ,1例坐骨神经热损伤。从肿瘤学、肢体关节功能学及并发症评价方面均成效显著。结论　术前进行心理护理 ,调整全身情况 ,完善各项术前准备。术后密切观察生命体征及患侧肢体的神经功能恢复情况 ,注意切口渗血及引流情况 ,进行体位指导 ,早期加强肢体关节功能的康复锻炼 。 展开更多

关键词 骨盆恶性肿瘤 护理 微波诱导高温原位灭活术 治疗 术前

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HER2靶向重组截短型Bid片段融合蛋白对骨肉瘤细胞的促凋亡作用 被引量：1

16

作者 纪振钢 裘秀春 +7 位作者 杨彤涛 龙华 马保安 周勇 张明华 许彦鸣 杨安钢 范清宇 《医学研究生学报》 CAS 2007年第2期120-122,127,I0001,共5页

目的:观察人上皮细胞生长因子受体2(HER2)靶向重组的活性截短型Bid(tBid)融合蛋白对骨肉瘤SOSP-9607细胞的促凋亡作用。方法:将抗HER2单链抗体基因e23sFv、与绿脓杆菌外毒素(PE)的转膜结构域基因(PEII)和tbid基因连接,构建成immuno-tbid... 目的:观察人上皮细胞生长因子受体2(HER2)靶向重组的活性截短型Bid(tBid)融合蛋白对骨肉瘤SOSP-9607细胞的促凋亡作用。方法:将抗HER2单链抗体基因e23sFv、与绿脓杆菌外毒素(PE)的转膜结构域基因(PEII)和tbid基因连接,构建成immuno-tbid(e23sFv-PEII-tbid)基因,将其克隆入真核表达载体pCMV中,转染SOSP-9607细胞,间接免疫荧光法检测目的蛋白表达和细胞形态学变化,通过AnnexinⅤ染色、流式细胞仪检测观察其促凋亡作用。结果:转染SOSP-9607细胞后,间接免疫荧光染色检测出tB id的表达,SOSP-9607细胞出现明显的固缩,核浓缩等凋亡特征。AnnexinⅤ染色、流式细胞仪检测可见明显的凋亡细胞,凋亡率为42%,对照组细胞仅6%,表明细胞膜表面有磷脂酰丝氨酸外翻,提示重组immuno-tbid基因表达后有促凋亡作用。结论:重组immuno-tbid基因可在转染的SOSP-9607细胞中表达,并诱导其细胞凋亡。 展开更多

关键词 截短型Bid片段 人上皮细胞生长因子受体2 融合蛋白 骨肉瘤SOSP-9607细胞 细胞凋亡

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人存活素基因编码区的克隆和序列分析 被引量：1

17

作者 陈翔 马保安 +3 位作者 杨彤涛 张勇 杨辉 范清宇 《医学研究生学报》 CAS 2005年第1期17-19,共3页

目的 :克隆人存活素 (survivin)基因编码区cDNA并进行序列分析。　方法 :以人骨肉瘤细胞系MG6 3的mR NA为模板 ,采用RT PCR方法得到人存活素的编码区cDNA ,克隆至载体pUC19中 ,酶切鉴定后进行序列分析。结果 :获得人存活素编码区基因和... 目的 :克隆人存活素 (survivin)基因编码区cDNA并进行序列分析。　方法 :以人骨肉瘤细胞系MG6 3的mR NA为模板 ,采用RT PCR方法得到人存活素的编码区cDNA ,克隆至载体pUC19中 ,酶切鉴定后进行序列分析。结果 :获得人存活素编码区基因和重组质粒pUC19 SURVIVIN ,DNA序列分析证实所获得的存活素基因编码区cDNA序列和文献报道一致。　结论 :采用基因克隆的方法获得人存活素基因 ,为进一步研究其结构和功能奠定了基础。 展开更多

关键词 存活素 基因克隆 序列分析

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重组LacZ复制缺陷型腺病毒的构建和鉴定 被引量：1

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作者 裘秀春 许彦鸣 +7 位作者 马保安 周勇 单乐群 杨彤涛 于翠娟 孟艳玲 杨安钢 范清宇 《医学研究生学报》 CAS 2006年第11期963-966,I0009,共5页

目的:构建表达LacZ基因的复制缺陷型腺病毒。方法:用AdEasy-1TM系统,在大肠杆菌中同源重组,构建表达LacZ基因的复制缺陷型腺病毒载体(Ad-LacZ)。重组腺病毒在HEK293细胞内包装并扩增,测定病毒滴度、电镜鉴定病毒存在、斑点杂交检测其复... 目的:构建表达LacZ基因的复制缺陷型腺病毒。方法:用AdEasy-1TM系统,在大肠杆菌中同源重组,构建表达LacZ基因的复制缺陷型腺病毒载体(Ad-LacZ)。重组腺病毒在HEK293细胞内包装并扩增,测定病毒滴度、电镜鉴定病毒存在、斑点杂交检测其复制缺陷性,然后感染HeLa细胞X-gal染色检测LacZ的表达情况。结果:成功构建了重组LacZ腺病毒表达载体,包装获得的重组腺病毒的滴度为1.58×109PFU/m l。在转染的细胞和感染的靶细胞内均可检测到LacZ的表达。电镜下可见感染的HEK293细胞核内含晶格状结构的腺病毒包函体。斑点杂交提示重组病毒为复制缺陷型,其基因转移百分率和感染强度和感染时间有一定的相关性。结论:成功构建了表达LacZ基因的复制缺陷型腺病毒。 展开更多

关键词 腺病毒表达载体 LACZ

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t-PAcDNA克隆、腺病毒载体构建及在小血管吻合口中的表达

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作者 张杏泉 王少东 +2 位作者 范清宇 裘秀春 张殿中 《医学研究生学报》 CAS 2003年第10期743-745,748,共4页

目的 :探讨组织型纤溶酶原激活物 (t PA)基因疗法防治血管吻合口血栓栓塞的效果。　方法 :①采用RT PCR从Bowes黑色素瘤细胞中获得t PAcDNA。②将含有t PA基因的重组质粒 pAdCMVt PA与缺陷型腺病毒大框架pJM17共转染病毒包装细胞 (2 93... 目的 :探讨组织型纤溶酶原激活物 (t PA)基因疗法防治血管吻合口血栓栓塞的效果。　方法 :①采用RT PCR从Bowes黑色素瘤细胞中获得t PAcDNA。②将含有t PA基因的重组质粒 pAdCMVt PA与缺陷型腺病毒大框架pJM17共转染病毒包装细胞 (2 93细胞 ) ,获得有感染能力但复制缺陷的重组腺病毒AdCMVt PA。③实验动物随机分为对照组和治疗组 ,治疗组吻合口注射AdCMVt PA溶液 ,对照组注射AdCMV(不含t PA的空载体 )。提取吻合口组织的总RNA行RT PCR ,应用发色底物法检测吻合口组织的纤溶酶活力。　结果 :①成功地克隆了t PAcDNA并构建腺病毒载体。②治疗组RT PCR在 2 .0kb前面约 1.7kb处有一条带 ,对照组则没有。治疗组术后第 1、2、3、4、5、6、7、10和 13天均可检测到纤溶酶活力 ,但第 3天活力最高。对照组未检测到纤溶酶活力。　结论 :克隆入腺病毒载体的t PA基因可在吻合口组织中表达出有生物学活性的t PA ,可有效地抑制吻合口血栓形成 。 展开更多

关键词 组织型纤溶酶原激活物 腺病毒载体 基因治疗 血栓栓塞

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Ezrin在肿瘤组织中的表达及意义

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作者 赵海恩 郭明君 +1 位作者 范清宇 裘秀春 《医学研究生学报》 CAS 北大核心 2013年第5期552-555,共4页

Ezrin是(ezrin/radixin/moesin,ERM)家族的一个成员,是细胞膜和细胞骨架之间重要的联系分子,在癌细胞生长、转移中发挥重要作用。大量研究表明,Ezrin在肿瘤和内皮细胞的相互作用、细胞迁移、细胞黏附、肿瘤的进展和转移过程中起着重要... Ezrin是(ezrin/radixin/moesin,ERM)家族的一个成员,是细胞膜和细胞骨架之间重要的联系分子,在癌细胞生长、转移中发挥重要作用。大量研究表明,Ezrin在肿瘤和内皮细胞的相互作用、细胞迁移、细胞黏附、肿瘤的进展和转移过程中起着重要的作用。文中阐述Ezrin对癌细胞生长特性的影响和对癌症患者治疗和预后的意义。 展开更多

关键词 EZRIN蛋白 肿瘤转移 肿瘤侵袭 细胞骨架

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