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溶藻弧菌去乙酰化酶基因cobB克隆及其功能验证被引量：3: 1; 作者范晨龙丁燏《生物技术通报》 CAS CSCD 北大核心 2021年第8期195-202,共8页; 旨在研究溶藻弧菌(Vibrio alginolyticus)去乙酰化酶cobB基因的功能。进行了cobB基因的克隆,生物信息学分析,CobB蛋白质诱导表达、纯化及功能研究。CobB蛋白质的相对分子质量为27.09750 kD,理论等电点为5.15,化学式为C_(1186)H_(1865)N_... 展开更多; 关键词溶藻弧菌 COBB 去乙酰化蛋白表达; 在线阅读下载PDF 职称材料

溶藻弧菌gr基因缺失株构建及其生物学特性被引量：2: 2; 作者冯建儒范晨龙丁燏《广东海洋大学学报》 CAS 北大核心 2021年第4期1-7,共7页; 【目的】研究敲除谷胱甘肽还原酶(GR)基因gr对溶藻弧菌HY9901生物学特性的影响。【方法】通过同源重组技术和Overlap PCR等分子生物学手段构建溶藻弧菌HY9901的gr基因缺失株,通过反转录验证并检测其遗传稳定性,绘制该菌的野生株和缺失... 展开更多; 关键词溶藻弧菌谷胱甘肽还原酶缺失株生物学特性同源重组; 在线阅读下载PDF 职称材料

溶藻弧菌AphB蛋白的原核表达及其乙酰化验证被引量：1: 3; 作者万明月范晨龙丁燏《福建农业学报》 CAS CSCD 北大核心 2022年第10期1250-1255,共6页; 【目的】研究LysR家族转录因子AphB蛋白是否存在乙酰化修饰,为进一步研究乙酰化修饰对该蛋白功能的影响提供理论基础。【方法】以溶藻弧菌(Vibrio alginolyticus)HY9901 LysR家族转录因子AphB为对象,根据GenBank上溶藻弧菌aphB序列(No.W... 展开更多; 关键词溶藻弧菌 AphB 大肠杆菌表达体系赖氨酸乙酰化修饰; 在线阅读下载PDF 职称材料

溶藻弧菌磷酸甲基嘧啶合酶(ThiC)的原核表达及其乙酰化修饰鉴定: 4; 作者王旭东范晨龙丁燏《大连海洋大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2022年第3期435-440,共6页; 为研究溶藻弧菌Vibrio alginolyticus磷酸甲基嘧啶合酶(phosphomethylpyrimidine synthase,ThiC)是否存在乙酰化修饰,以溶藻弧菌HY9901基因组为模板,PCR扩增ThiC基因,构建pET-28a-ThiC原核表达载体,在大肠杆菌BL21中诱导表达,并优化其... 展开更多; 关键词溶藻弧菌磷酸甲基嘧啶合酶原核表达乙酰化; 在线阅读下载PDF 职称材料

溶藻弧菌PepA蛋白原核表达载体的构建及其乙酰化鉴定被引量：1: 5; 作者徐洲范晨龙丁燏《生物技术通报》 CAS CSCD 北大核心 2020年第12期75-81,共7页; 旨为构建溶藻弧菌HY9901 PepA蛋白的原核表达载体、优化其表达条件,并分析该蛋白是否存在乙酰化调控。首先设计特异性引物经PCR克隆pepA基因,构建表达载体pET-28a-PepA并将其转入大肠杆菌BL21(DE3),然后用SDS-PAGE和Western blot分析蛋... 展开更多; 关键词溶藻弧菌 PepA蛋白表达条件优化乙酰化; 在线阅读下载PDF 职称材料

题名溶藻弧菌去乙酰化酶基因cobB克隆及其功能验证被引量：3: 1; 作者范晨龙丁燏; 机构广东海洋大学水产学院; 出处《生物技术通报》 CAS CSCD 北大核心 2021年第8期195-202,共8页; 基金广东省自然科学基金项目(2014A030313604)。; 文摘旨在研究溶藻弧菌(Vibrio alginolyticus)去乙酰化酶cobB基因的功能。进行了cobB基因的克隆,生物信息学分析,CobB蛋白质诱导表达、纯化及功能研究。CobB蛋白质的相对分子质量为27.09750 kD,理论等电点为5.15,化学式为C_(1186)H_(1865)N_(339)O_(369)S_(10),亲水性平均系数(GRAVY):-0.409,为亲水蛋白。CobB与同弧菌属的魔鬼弧菌(Vibrio diabolicus),哈维弧菌(Vibrio harveyi),霍乱弧菌(Vibrio cholerae)和副溶血性弧菌(Vibrio parahaemolyticus)具有高度同源性,在革兰氏阴性菌中相对保守;融合蛋白大小约为53 kD,去除标签后CobB蛋白分子量约为27 kD;CobB蛋白最适表达条件为37℃,0.4 mmol /L IPTG下诱导4 h。功能分析表明,CobB对乙酰化蛋白具有去乙酰化作用。; 关键词溶藻弧菌 COBB 去乙酰化蛋白表达; Keywords Vibrio alginolyticus CobB deacetylation protein expression; 分类号 Q936 [生物学—微生物学]; 在线阅读下载PDF 职称材料

题名溶藻弧菌gr基因缺失株构建及其生物学特性被引量：2: 2; 作者冯建儒范晨龙丁燏; 机构广东海洋大学水产学院; 出处《广东海洋大学学报》 CAS 北大核心 2021年第4期1-7,共7页; 基金广东自然科学基金(2014A030313604) 广东海洋大学研究生教育创新计划资助项目(201724)。; 文摘【目的】研究敲除谷胱甘肽还原酶(GR)基因gr对溶藻弧菌HY9901生物学特性的影响。【方法】通过同源重组技术和Overlap PCR等分子生物学手段构建溶藻弧菌HY9901的gr基因缺失株,通过反转录验证并检测其遗传稳定性,绘制该菌的野生株和缺失株的生长曲线,测定该菌野生株和缺失株的生物膜形成能力、抗生素敏感性、胞外蛋白酶活性和泳动能力等生物学特性。【结果】gr基因的缺失几乎不影响溶藻弧菌的生长趋势,但敲除gr基因后溶藻弧菌对呋喃唑酮、头孢唑林、四环素等敏感性增强,该菌的生物膜形成能力增强显著提高。缺失株△gr的胞外蛋白酶活性和泳动能力均低于野生株。【结论】谷胱甘肽还原酶在溶藻弧菌的毒力、生物膜形成、药物敏感性、泳动等方面有重要作用。; 关键词溶藻弧菌谷胱甘肽还原酶缺失株生物学特性同源重组; Keywords Vibrio alginolyticus glutathione reductase mutant strain biological characteristics homologous recombination; 分类号 S941 [农业科学—水产养殖] Q933 [生物学—微生物学]; 在线阅读下载PDF 职称材料

题名溶藻弧菌AphB蛋白的原核表达及其乙酰化验证被引量：1: 3; 作者万明月范晨龙丁燏; 机构广东海洋大学水产学院/广东省水产动物病害防控与健康养殖重点实验室/广东省水产经济动物病害防控重点实验室; 出处《福建农业学报》 CAS CSCD 北大核心 2022年第10期1250-1255,共6页; 基金广东省自然科学基金项目(2014A030313604) 广东海洋大学研究生教育创新计划资助项目(201724); 文摘【目的】研究LysR家族转录因子AphB蛋白是否存在乙酰化修饰,为进一步研究乙酰化修饰对该蛋白功能的影响提供理论基础。【方法】以溶藻弧菌(Vibrio alginolyticus)HY9901 LysR家族转录因子AphB为对象,根据GenBank上溶藻弧菌aphB序列(No.WP_005380599.1)设计引物,采用大肠杆菌表达体系异源诱导表达,设置时间、温度和IPTG浓度梯度优化表达条件,最后纯化AphB蛋白,通过抗乙酰赖氨酸特异性抗体验证AphB蛋白的乙酰化修饰程度。【结果】aphB全长约876 bp,37℃时菌液加入0.1 mmol·L^(-1)的IPTG诱导6 h后,AphB蛋白的表达量最高,纯化后的蛋白大小为37.3 kD,AphB自身存在乙酰化修饰位点,但其乙酰化程度在体外不受脱乙酰酶CobB的调控。【结论】初步证明了AphB蛋白是一种乙酰化蛋白且在体外不能被脱乙酰酶CobB脱乙酰化,研究结论丰富了原核生物弧菌中乙酰化修饰的相关理论,为溶藻弧菌毒力基因aphB的翻译后调控机制研究提供了科学参考。; 关键词溶藻弧菌 AphB 大肠杆菌表达体系赖氨酸乙酰化修饰; Keywords Vibrio alginolyticus AphB Escherichia coli expression system lysine acetylation modification; 分类号 S941.42 [农业科学—水产养殖]; 在线阅读下载PDF 职称材料

题名溶藻弧菌磷酸甲基嘧啶合酶(ThiC)的原核表达及其乙酰化修饰鉴定: 4; 作者王旭东范晨龙丁燏; 机构广东海洋大学水产学院; 出处《大连海洋大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2022年第3期435-440,共6页; 基金广东省自然科学基金(2014A030313604,2022A1515012203) 广东海洋大学研究生教育创新计划资助项目(201724)。; 文摘为研究溶藻弧菌Vibrio alginolyticus磷酸甲基嘧啶合酶(phosphomethylpyrimidine synthase,ThiC)是否存在乙酰化修饰,以溶藻弧菌HY9901基因组为模板,PCR扩增ThiC基因,构建pET-28a-ThiC原核表达载体,在大肠杆菌BL21中诱导表达,并优化其表达条件,然后用SDS-PAGE和Western blot分析蛋白的表达及乙酰化情况。结果表明:克隆获得的溶藻弧菌ThiC基因长度为1941 bp;重组蛋白成功在大肠杆菌BL21中表达,相对分子质量为72500,其最佳诱导条件为IPTG 0.1 mmol/L、温度37℃、诱导时间3 h;经Western blot检测显示,ThiC蛋白具有乙酰化修饰,但在体外不能通过乙酰化酶途径去乙酰化。研究表明,溶藻弧菌ThiC原核表达载体构建成功,该蛋白存在乙酰化修饰,但体外不能去乙酰化,本研究结果为溶藻弧菌的维生素合成过程中酶的翻译后调控机制研究提供了科学参考。; 关键词溶藻弧菌磷酸甲基嘧啶合酶原核表达乙酰化; Keywords Vibrio alginolyticus ThiC prokaryotic expression acetylation; 分类号 S917.4 [农业科学—水产科学]; 在线阅读下载PDF 职称材料

题名溶藻弧菌PepA蛋白原核表达载体的构建及其乙酰化鉴定被引量：1: 5; 作者徐洲范晨龙丁燏; 机构广东海洋大学水产学院广东省水产经济动物病原生物学及流行病学重点实验室广东省水产经济动物病害控制重点实验室; 出处《生物技术通报》 CAS CSCD 北大核心 2020年第12期75-81,共7页; 基金广东省自然科学基金项目(2014A030313604)。; 文摘旨为构建溶藻弧菌HY9901 PepA蛋白的原核表达载体、优化其表达条件,并分析该蛋白是否存在乙酰化调控。首先设计特异性引物经PCR克隆pepA基因,构建表达载体pET-28a-PepA并将其转入大肠杆菌BL21(DE3),然后用SDS-PAGE和Western blot分析蛋白的表达及乙酰化情况。结果显示,表达菌株可以正确表达重组蛋白(60.7 kD),其最佳表达条件为:体积分数为0.1%的IPTG,37℃诱导5 h;Western blot结果表明,PepA蛋白是乙酰化蛋白,且在体外不存在去乙酰化。; 关键词溶藻弧菌 PepA蛋白表达条件优化乙酰化; Keywords Vibrio alginolyticus PepA protein optimal expression condition acetylation; 分类号 Q782 [生物学—分子生物学] S941.42 [农业科学—水产养殖]; 在线阅读下载PDF 职称材料

	题名	作者	出处	发文年	被引量	操作
1	溶藻弧菌去乙酰化酶基因cobB克隆及其功能验证	范晨龙丁燏	《生物技术通报》 CAS CSCD 北大核心	2021	3	在线阅读下载PDF 职称材料
2	溶藻弧菌gr基因缺失株构建及其生物学特性	冯建儒范晨龙丁燏	《广东海洋大学学报》 CAS 北大核心	2021	2	在线阅读下载PDF 职称材料
3	溶藻弧菌AphB蛋白的原核表达及其乙酰化验证	万明月范晨龙丁燏	《福建农业学报》 CAS CSCD 北大核心	2022	1	在线阅读下载PDF 职称材料
4	溶藻弧菌磷酸甲基嘧啶合酶(ThiC)的原核表达及其乙酰化修饰鉴定	王旭东范晨龙丁燏	《大连海洋大学学报》 CAS CSCD 北大核心	2022	0	在线阅读下载PDF 职称材料
5	溶藻弧菌PepA蛋白原核表达载体的构建及其乙酰化鉴定	徐洲范晨龙丁燏	《生物技术通报》 CAS CSCD 北大核心	2020	1	在线阅读下载PDF 职称材料