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基于沙门菌转录因子RipR的衣康酸检测方法建立
1
作者
范修齐
王志豪
+4 位作者
孔兰芳
鲁壮壮
蒋蔚
陈兆国
韩先干
《中国动物传染病学报》
北大核心
2025年第4期104-110,共7页
衣康酸是由巨噬细胞通过炎症刺激促使顺乌头酸脱羧酶生成,衣康酸具有免疫调节、抗氧化、抗炎和杀菌作用,开展衣康酸检测方法研究,是研究其调控作用的关键。沙门菌转录因子RipR(STM3121基因编码)可通过结合STM3121启动子抑制其转录活性,...
衣康酸是由巨噬细胞通过炎症刺激促使顺乌头酸脱羧酶生成,衣康酸具有免疫调节、抗氧化、抗炎和杀菌作用,开展衣康酸检测方法研究,是研究其调控作用的关键。沙门菌转录因子RipR(STM3121基因编码)可通过结合STM3121启动子抑制其转录活性,而RipR与衣康酸结合后可解除其抑制作用。基于此调控方式,可将表达绿色荧光蛋白的报告基因AmCyan、STM3121及其启动子3个元件串联后构建衣康酸检测质粒,通过检测AmCyan的转录活性,可实现对衣康酸的定性检测。因此,本研究首先通过重叠PCR技术,将AmCyan、STM3121及其启动子序列克隆至pACYC184质粒中,成功构建衣康酸检测质粒pACYC184-STM3121-AmCyan。其次,为了评价该质粒对衣康酸的检测作用,将其转化DH5α,成功获得DH5α-pACYC184-STM3121-AmCyan衣康酸检测模型菌株。最后,向该模型菌株分别添加外源和内源性(大肠杆菌感染RAW264.7巨噬细胞后的细胞裂解液)2种方式产生的衣康酸,验证该质粒对衣康酸的检测作用。结果表明,二者均可成功诱导DH5α-pACYC184-STM3121-AmCyan模型菌株产生绿色荧光,而对照组不产生。本研究成功建立衣康酸检测方法,为后续开展衣康酸生物学功能研究提供技术支撑。
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关键词
衣康酸
沙门菌RipR
荧光报告基因
检测方法
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职称材料
布鲁菌WbkC的原核表达及免疫原性研究
2
作者
鲁壮壮
连丽燕
+7 位作者
王志豪
林秋
范修齐
孔兰芳
蒋蔚
陈兆国
陈伟
韩先干
《中国动物传染病学报》
北大核心
2025年第4期71-78,共8页
wbkC基因编码布鲁菌脂多糖O-链合成必需的甲酰基转移酶,开展其免疫原性研究,可为开发布鲁菌亚单位疫苗及诊断技术提供候选靶标。本研究通过生物信息学分析后扩增wbkC基因,构建其表达质粒,进行蛋白表达,并利用Western blot检测WbkC的免...
wbkC基因编码布鲁菌脂多糖O-链合成必需的甲酰基转移酶,开展其免疫原性研究,可为开发布鲁菌亚单位疫苗及诊断技术提供候选靶标。本研究通过生物信息学分析后扩增wbkC基因,构建其表达质粒,进行蛋白表达,并利用Western blot检测WbkC的免疫反应性;通过对BALB/C小鼠免疫WbkC,评价其诱导小鼠抗体及细胞因子产生水平。结果显示:成功构建表达质粒pCold I-wbkC,获得大小约31 kDa的重组蛋白,并与布鲁菌阳性血清具有免疫反应性;在免疫小鼠后的7、21、35、49 d均可产生抗WbkC抗体,且在35 d达到最高水平;利用荧光定量PCR和ELISA分别对小鼠细胞因子的转录和表达水平进行检测,与对照组相比,免疫组IL1-β(P<0.01)、IL-6(P<0.01)、TNF-α(P<0.0001)、IFN-β(P<0.05)转录水平上调,免疫组血清中的IL-6、IFN-β和TNF-α的含量分别升高1.41、3.32和9.32倍,而IL-Iβ的含量没有变化。本研究表明WbkC蛋白具有多个B细胞、T细胞位点,结构复杂,是免疫原性蛋白;该蛋白可产生较高的抗体水平,能显著提升小鼠细胞因子的含量及脾脏细胞中的转录水平,表明其可诱导小鼠体液和细胞免疫应答,为后续以WbkC蛋白为靶标开展布鲁菌亚单位疫苗和诊断方法研究提供参考。
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关键词
布鲁菌
wbkC基因
免疫原性
细胞因子检测
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职称材料
题名
基于沙门菌转录因子RipR的衣康酸检测方法建立
1
作者
范修齐
王志豪
孔兰芳
鲁壮壮
蒋蔚
陈兆国
韩先干
机构
中国农业科学院上海兽医研究所
安徽农业大学
塔里木大学
出处
《中国动物传染病学报》
北大核心
2025年第4期104-110,共7页
基金
政府间国际科技创新合作重点项目(2018YFE0102200)
国家自然科学基金(32072829)。
文摘
衣康酸是由巨噬细胞通过炎症刺激促使顺乌头酸脱羧酶生成,衣康酸具有免疫调节、抗氧化、抗炎和杀菌作用,开展衣康酸检测方法研究,是研究其调控作用的关键。沙门菌转录因子RipR(STM3121基因编码)可通过结合STM3121启动子抑制其转录活性,而RipR与衣康酸结合后可解除其抑制作用。基于此调控方式,可将表达绿色荧光蛋白的报告基因AmCyan、STM3121及其启动子3个元件串联后构建衣康酸检测质粒,通过检测AmCyan的转录活性,可实现对衣康酸的定性检测。因此,本研究首先通过重叠PCR技术,将AmCyan、STM3121及其启动子序列克隆至pACYC184质粒中,成功构建衣康酸检测质粒pACYC184-STM3121-AmCyan。其次,为了评价该质粒对衣康酸的检测作用,将其转化DH5α,成功获得DH5α-pACYC184-STM3121-AmCyan衣康酸检测模型菌株。最后,向该模型菌株分别添加外源和内源性(大肠杆菌感染RAW264.7巨噬细胞后的细胞裂解液)2种方式产生的衣康酸,验证该质粒对衣康酸的检测作用。结果表明,二者均可成功诱导DH5α-pACYC184-STM3121-AmCyan模型菌株产生绿色荧光,而对照组不产生。本研究成功建立衣康酸检测方法,为后续开展衣康酸生物学功能研究提供技术支撑。
关键词
衣康酸
沙门菌RipR
荧光报告基因
检测方法
Keywords
Itaconate
SalmonellaRipR
fluorescent reporter gene
detection
分类号
S852.65 [农业科学—基础兽医学]
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职称材料
题名
布鲁菌WbkC的原核表达及免疫原性研究
2
作者
鲁壮壮
连丽燕
王志豪
林秋
范修齐
孔兰芳
蒋蔚
陈兆国
陈伟
韩先干
机构
塔里木大学生命科学与技术学院
中国农业科学院上海兽医研究所
出处
《中国动物传染病学报》
北大核心
2025年第4期71-78,共8页
基金
上海科技创新行动计划(22N41900500)。
文摘
wbkC基因编码布鲁菌脂多糖O-链合成必需的甲酰基转移酶,开展其免疫原性研究,可为开发布鲁菌亚单位疫苗及诊断技术提供候选靶标。本研究通过生物信息学分析后扩增wbkC基因,构建其表达质粒,进行蛋白表达,并利用Western blot检测WbkC的免疫反应性;通过对BALB/C小鼠免疫WbkC,评价其诱导小鼠抗体及细胞因子产生水平。结果显示:成功构建表达质粒pCold I-wbkC,获得大小约31 kDa的重组蛋白,并与布鲁菌阳性血清具有免疫反应性;在免疫小鼠后的7、21、35、49 d均可产生抗WbkC抗体,且在35 d达到最高水平;利用荧光定量PCR和ELISA分别对小鼠细胞因子的转录和表达水平进行检测,与对照组相比,免疫组IL1-β(P<0.01)、IL-6(P<0.01)、TNF-α(P<0.0001)、IFN-β(P<0.05)转录水平上调,免疫组血清中的IL-6、IFN-β和TNF-α的含量分别升高1.41、3.32和9.32倍,而IL-Iβ的含量没有变化。本研究表明WbkC蛋白具有多个B细胞、T细胞位点,结构复杂,是免疫原性蛋白;该蛋白可产生较高的抗体水平,能显著提升小鼠细胞因子的含量及脾脏细胞中的转录水平,表明其可诱导小鼠体液和细胞免疫应答,为后续以WbkC蛋白为靶标开展布鲁菌亚单位疫苗和诊断方法研究提供参考。
关键词
布鲁菌
wbkC基因
免疫原性
细胞因子检测
Keywords
Brucella
wbkCgene
immunogenicity
cytokine
分类号
S852.61 [农业科学—基础兽医学]
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职称材料
题名
作者
出处
发文年
被引量
操作
1
基于沙门菌转录因子RipR的衣康酸检测方法建立
范修齐
王志豪
孔兰芳
鲁壮壮
蒋蔚
陈兆国
韩先干
《中国动物传染病学报》
北大核心
2025
0
在线阅读
下载PDF
职称材料
2
布鲁菌WbkC的原核表达及免疫原性研究
鲁壮壮
连丽燕
王志豪
林秋
范修齐
孔兰芳
蒋蔚
陈兆国
陈伟
韩先干
《中国动物传染病学报》
北大核心
2025
0
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