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巨桉脱水素基因EgrDHN家族鉴定及表达模式分析 被引量:1
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作者 苏国芬 李大华 +8 位作者 王潘 周料 胡浩 邓海群 陈鑫 冯名开 耿显宸 王翊 徐增富 《中南林业科技大学学报》 CSCD 北大核心 2024年第12期166-177,共12页
【目的】深入挖掘巨桉Eucalyptus grandis脱水素基因EgrDHN家族成员并探讨其应对逆境胁迫的表达模式,从中筛选具有抗逆功能的EgrDHN基因对于培育桉树抗逆新品种具有重要意义。【方法】以巨桉全基因组数据为参考,利用生物信息学筛选鉴定... 【目的】深入挖掘巨桉Eucalyptus grandis脱水素基因EgrDHN家族成员并探讨其应对逆境胁迫的表达模式,从中筛选具有抗逆功能的EgrDHN基因对于培育桉树抗逆新品种具有重要意义。【方法】以巨桉全基因组数据为参考,利用生物信息学筛选鉴定得到巨桉EgrDHN基因家族成员,对其进行生物信息学分析,具体包括进化树分析、蛋白序列比对、启动子序列中顺式作用元件预测等;并基于生物信息学分析结果,采用RT-qPCR测定方法,对EgrDHN基因家族成员在低温、高盐和ABA胁迫处理下的表达模式及其组织表达特异性进行了分析。【结果】从巨桉基因组中共鉴定出EgrDHN家族9个成员,将其命名为EgrDHN1~EgrDHN9,分布于5条染色体上,根据蛋白质保守序列的特点可分为K_(n)S、SK_(n)和Y_(n)SK_(n) 3种类型。系统进化树显示植物DHN家族成员可分为4个进化枝,其中第Ⅳ进化枝包含巨桉EgrDHN7、EgrDHN8、EgrDHN9,但不包含任何毛果杨Populus trichocarpa DHN同源基因(PtrDHNs),两者存在明显差异。启动子元件预测分析发现巨桉EgrDHN启动子中含有低温响应(Low-temperature response,LTR)元件,MYB、MYC等与抗逆性相关以及植物激素响应类顺式作用元件。组织特异性表达分析发现EgrDHN家族成员在根、成熟叶片、子叶中表达量较高,其中EgrDHN2在成熟叶片中表达量最高。非生物逆境胁迫下经RT-qPCR检测发现EgrDHN家族成员中,EgrDHN1在高盐胁迫下表达量下调,在低温和ABA胁迫时上调,而其他成员在低温、高盐、ABA胁迫下均表现为上调,其中低温条件下以EgrDHN2、EgrDHN3、EgrDHN4响应最为明显。【结论】大部分EgrDHNs基因参与逆境胁迫响应,且除EgrDHN1在盐胁迫下的表达量下降外其他成员在逆境胁迫下的表达量均上升。 展开更多
关键词 巨桉 脱水素 非生物胁迫 表达分析
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尾巨桉DH32-28组培再生过程中激素浓度筛选与转基因愈伤组织获得 被引量:3
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作者 张吴滔 白卫国 +7 位作者 苏国芬 费晓云 胡浩 付朝阳 韦利达 李蔷薇 李魁鹏 徐增富 《桉树科技》 2024年第2期1-10,共10页
探索尾巨桉良种无性系DH32-28的组培再生体系,进而建立稳定的遗传转化系统,以期为进一步获得转基因桉树再生植株,以及开展桉树基因功能及分子育种研究提供参考。以DH32-28组培苗叶片和茎段为外植体,通过筛选植物生长调节剂噻苯隆(TDZ)... 探索尾巨桉良种无性系DH32-28的组培再生体系,进而建立稳定的遗传转化系统,以期为进一步获得转基因桉树再生植株,以及开展桉树基因功能及分子育种研究提供参考。以DH32-28组培苗叶片和茎段为外植体,通过筛选植物生长调节剂噻苯隆(TDZ)、6-苄氨基嘌呤(6-BA)、1-萘乙酸(NAA)以及吲哚丁酸(IBA)的合适浓度,进行外植体愈伤组织诱导、不定芽分化和生根诱导;通过测定愈伤组织诱导阶段以及生根诱导阶段组培材料对卡那霉素的耐受力,确定卡那霉素的临界筛选浓度,用于农杆菌(Agrobacterium tumefaciens)介导的遗传转化实验。结果表明:以MS为基本培养基,0.025 mg·L^(-1) TDZ+0.15 mg·L^(-1) NAA、0.05 mg·L^(-1) TDZ+0.15 mg·L^(-1) NAA的激素配比分别最适于DH32-28叶片和茎段的愈伤诱导,愈伤诱导率均为98.3%。将诱导出的叶片和茎段愈伤组织转移到含有0.5 mg·L^(-1) 6-BA+0.1 mg·L^(-1) NAA的不定芽分化培养基中,不定芽分化率分别为44.4%和96.7%。以1/2MS为基本培养基,添加0.5 mg·L^(-1)IBA对DH32-28再生芽的不定根诱导率最高,不定根诱导率为72.8%。愈伤组织和不定芽诱导阶段的卡那霉素最适筛选浓度为5 mg·L^(-1),生根阶段最适浓度为20 mg·L^(-1)。本研究成功建立了尾巨桉无性系DH32-28高效的再生体系,并采用农杆菌介导的遗传转化方法将红色荧光蛋白报告基因DsRed2导入到DH32-28茎段受体材料,获得了表达DsRed2的转基因愈伤组织。 展开更多
关键词 尾巨桉DH32-28 再生 遗传转化 DsRed2
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