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次黄嘌呤对猪卵母细胞体外自发成熟抑制作用的研究 被引量:4
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作者 苏友强 夏国良 +2 位作者 陈勇 赫晨 傅国栋 《畜牧兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2000年第1期22-27,共6页
利用猪卵母细胞体外无血清培养技术,研究了次黄嘌呤(HX)对猪卵母细胞体外自发成熟的抑制作用。猪卵丘-卵母细胞复合体(COC)和裸卵母细胞(DO)取自初情期猪卵巢,培养在M-199培养液中,并施以各种处理。培养不同时间后,观察卵母细胞核成熟(G... 利用猪卵母细胞体外无血清培养技术,研究了次黄嘌呤(HX)对猪卵母细胞体外自发成熟的抑制作用。猪卵丘-卵母细胞复合体(COC)和裸卵母细胞(DO)取自初情期猪卵巢,培养在M-199培养液中,并施以各种处理。培养不同时间后,观察卵母细胞核成熟(GVBD)情况。实验结果表明:(1)HX(1-4mmol/L)对猪COC的自发成熟具有抑制作用,且具有剂量依赖关系。4mmol/L的HX对COC和DO自发成熟的抑制作用无明显差异(P>005);(2)HX对COC的自发成熟的抑制作用,随培养时间的延长而减弱;(3)COC在含有4mmol/LHX的M-199培养液中培养24h后转移到不含HX的培养液中继续培养时,仍能够自发成熟。在体外,HX能够可逆地部分抑制猪卵母细胞体外自发成熟,该作用具有剂量依赖性。 展开更多
关键词 次黄嘌呤 抑制作用 卵母细胞 自发成熟
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卵母细胞成熟过程中信号转导及调控研究进展 被引量:1
2
作者 苏友强 夏国良 杨传任 《生理科学进展》 CAS CSCD 北大核心 1999年第4期345-348,共4页
哺乳动物卵母细胞成熟机制一直是生殖生物学研究的热点,目前仍有许多环节尚不十分清楚。本文对卵母细胞成熟过程中复杂的信号转导通路及蛋白质合成过程中的最新进展进行了综述。
关键词 卵母细胞成熟 信号转导 蛋白质合成 调控
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缺失PUF家族基因的卵母细胞可以成熟和受精 被引量:1
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作者 陈霞 朱梦怡 +1 位作者 苏友强 徐宇君 《南京医科大学学报(自然科学版)》 CAS CSCD 北大核心 2016年第7期774-777,共4页
目的 :研究PUF家族基因[Pumilio1(Pum1)和Pumilio2(Pum2)]在雌性生育能力和生殖细胞减数分裂过程中的作用。方法:在Pum1基因位置携带lox P位点的Pum2基因全敲鼠的基础上,利用生殖细胞特异性表达的Cre-Vasa-Cre介导Pum1基因条件性敲除,... 目的 :研究PUF家族基因[Pumilio1(Pum1)和Pumilio2(Pum2)]在雌性生育能力和生殖细胞减数分裂过程中的作用。方法:在Pum1基因位置携带lox P位点的Pum2基因全敲鼠的基础上,利用生殖细胞特异性表达的Cre-Vasa-Cre介导Pum1基因条件性敲除,以此获得Pum基因双敲小鼠模型Vasa-cre:Pum1F/FPum2-/-(VDKO)。同时,对Pum基因双敲小鼠进行生殖表型分析。结果:1交配实验结果表明,雌性VDKO小鼠的生育能力显著下降,但仍可以产生后代;2VDKO小鼠卵母细胞体外成熟过程不受影响。结论:Pum蛋白不影响小鼠卵子发生发育过程。 展开更多
关键词 Pum VDKO 卵母细胞 育性
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小鼠Gtf2h2基因的克隆及其在真核细胞中的表达 被引量:1
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作者 张心悦 杨光平 +1 位作者 时兰英 苏友强 《南京医科大学学报(自然科学版)》 CAS CSCD 北大核心 2015年第8期1049-1054,共6页
目的:克隆小鼠Gtf2h2基因并使其在真核细胞HEK293中稳定表达。方法 :采用小鼠卵母细胞c DNA为模板,经PCR扩增Gtf2h2后,利用新型In-Fusion分子克隆体系将该目的片段克隆至真核表达载体p CMV6-AC-3DDK和p CMV6-ANm Kate中。所得阳性克隆... 目的:克隆小鼠Gtf2h2基因并使其在真核细胞HEK293中稳定表达。方法 :采用小鼠卵母细胞c DNA为模板,经PCR扩增Gtf2h2后,利用新型In-Fusion分子克隆体系将该目的片段克隆至真核表达载体p CMV6-AC-3DDK和p CMV6-ANm Kate中。所得阳性克隆的质粒DNA在经限制性酶切电泳和测序鉴定克隆成功后,转染到HEK293细胞中进行表达。表达效果利用抗DDK和m Kate标签的抗体通过免疫荧光以Western blot的方法进行检测。结果:质粒DNA测序和酶切鉴定证明Gtf2h2基因克隆成功;Western blot检测到GTF2H2-3DDK和GTF2H2-m Kate融合蛋白在转染后的HEK293细胞内的表达;免疫荧光显示融合蛋白在转染后的HEK293细胞核内定位并呈颗粒状分布。结论:成功克隆了小鼠Gtf2h2基因并实现了其在真核细胞HEK293中的稳定表达,为进一步研究其功能和作用机制奠定了基础。 展开更多
关键词 转录因子 Gtf2h2 In-Fusion克隆 HEK293
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LH/EGF诱导ICR小鼠窦状卵泡卵母细胞体外成熟与排卵的研究 被引量:4
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作者 尹耀学 苏友强 《南京医科大学学报(自然科学版)》 CSCD 北大核心 2017年第9期1163-1167,共5页
目的 :利用医学研究常用ICR品系小鼠,在建立窦状卵泡体外培养体系的基础上,研究黄体生成素(luteinizing hormone,LH)与表皮生长因子(epidermal growth factor,EGF)诱导卵母细胞体外成熟及排卵的作用。方法 :体外剥离得到大的窦状卵泡用... 目的 :利用医学研究常用ICR品系小鼠,在建立窦状卵泡体外培养体系的基础上,研究黄体生成素(luteinizing hormone,LH)与表皮生长因子(epidermal growth factor,EGF)诱导卵母细胞体外成熟及排卵的作用。方法 :体外剥离得到大的窦状卵泡用于培养并建立适宜于研究诱导卵母细胞成熟及排卵的窦状卵泡体外培养模型,通过向培养液中添加LH和EGF诱导卵母细胞体外成熟与排卵。结果:成功构建了ICR小鼠窦状卵泡体外培养模型,发现LH或EGF单独处理均可诱导卵泡卵母细胞成熟和卵丘扩展,而两者共同作用才能够诱导卵泡体外排卵。结论:LH/EGF促进ICR小鼠窦状卵泡卵母细胞体外成熟与排卵。 展开更多
关键词 窦状卵泡 卵母细胞体外成熟 排卵 ICR小鼠 女性生殖
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ICR小鼠卵母细胞通过旁分泌机制促进排卵关键过程
6
作者 杨光平 张心悦 +1 位作者 时兰英 苏友强 《南京医科大学学报(自然科学版)》 CAS CSCD 北大核心 2015年第8期1055-1059,共5页
目的:利用国内医学研究常用ICR品系小鼠,在构建用于研究卵母细胞-卵丘细胞交互作用培养模型的基础上,研究卵母细胞及其产生的旁分泌因子生长分化因子9(GDF9)和骨形态发生蛋白15(BMP15)对排卵过程中的关键事件——卵丘扩展的调控作用。方... 目的:利用国内医学研究常用ICR品系小鼠,在构建用于研究卵母细胞-卵丘细胞交互作用培养模型的基础上,研究卵母细胞及其产生的旁分泌因子生长分化因子9(GDF9)和骨形态发生蛋白15(BMP15)对排卵过程中的关键事件——卵丘扩展的调控作用。方法:通过显微手术制备摘除卵母细胞后的卵丘细胞复合体(OOX),并通过与卵母细胞共培养或GDF9和BMP15处理研究卵母细胞及其特异释放的旁分泌因子对表皮生长因子(EGF)诱导卵丘扩展过程的调控。结果 :成功构建了ICR小鼠OOX培养模型,发现卵母细胞及其释放的旁分泌因子GDF9和BMP15为EGF诱导卵丘扩展所必需。结论:ICR小鼠卵母细胞通过旁分泌机制促进排卵关键过程。 展开更多
关键词 卵丘细胞复合体 卵母细胞 排卵 ICR小鼠 女性生殖
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Marf1基因的克隆及其在真核细胞中的表达
7
作者 张小云 曹广义 +2 位作者 殷虹 时兰英 苏友强 《南京医科大学学报(自然科学版)》 CSCD 北大核心 2017年第7期818-822,共5页
目的:克隆小鼠的Marf1基因并使其在真核细胞HEK293T中异位表达,以研究MARF1蛋白在细胞中的表达和定位。方法:运用反转录-聚合酶链反应(reverse transcription-polymerase chain reaction,RT-PCR)扩增并获得Marf1基因编码序列,再利用新... 目的:克隆小鼠的Marf1基因并使其在真核细胞HEK293T中异位表达,以研究MARF1蛋白在细胞中的表达和定位。方法:运用反转录-聚合酶链反应(reverse transcription-polymerase chain reaction,RT-PCR)扩增并获得Marf1基因编码序列,再利用新型分子克隆体系In-Fusion将该目的片段克隆至pCMV6-AC-3DDK和pCMV6-AN-m Kate两个真核表达载体中,由此所得融合质粒经限制性内切酶酶切电泳和测序筛选鉴定,将所得到的阳性质粒转染到HEK293T细胞中进行表达,然后利用DDK和m Kate标签抗体通过Western blot或免疫荧光的方法检测目的蛋白MARF1的表达和定位。结果:DNA测序鉴定证明Marf1基因克隆成功;Western blot检测到MARF1-3DDK和MARF1-m Kate融合蛋白在转染的HEK293T细胞内的表达;免疫荧光显示融合蛋白在转染后的HEK293T细胞质呈颗粒状分布,并与纺锤体共定位。结论:成功克隆了小鼠Marf1基因并实现了其在真核细胞HEK293T中的稳定表达,为进一步研究其功能和作用机制奠定了基础。 展开更多
关键词 Marf1 In-Fusion克隆 HEK293T
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mTOR通路抑制剂对卵丘扩展与体外受精的影响
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作者 公绪红 时兰英 苏友强 《中国医学前沿杂志(电子版)》 2016年第7期45-49,共5页
目的研究哺乳动物雷帕霉素靶蛋白(mammalian target of rapamycin,mTOR)通路抑制剂对卵丘及卵母细胞发育潜能的影响。方法收集小鼠较大有腔卵泡中卵丘-卵母细胞复合体(cumulusoocyte complexes,COCs)作为体外培养的研究对象,在培养液中... 目的研究哺乳动物雷帕霉素靶蛋白(mammalian target of rapamycin,mTOR)通路抑制剂对卵丘及卵母细胞发育潜能的影响。方法收集小鼠较大有腔卵泡中卵丘-卵母细胞复合体(cumulusoocyte complexes,COCs)作为体外培养的研究对象,在培养液中加入不同浓度的mTOR通路抑制剂(雷帕霉素、Torin1),分析mTOR通路抑制剂对卵丘及卵母细胞发育潜能的影响。结果雷帕霉素、Torin1可以有效抑制COCs中mTOR信号通路,Torin1有明显影响卵丘细胞扩展的作用,使卵母细胞受精及着床前胚胎发育潜能下降。结论 mTOR信号通路抑制剂有明显降低卵母细胞质量的效应,是维持COCs活性及促进卵丘和卵母细胞的发育潜能所必需。 展开更多
关键词 哺乳动物雷帕霉素靶蛋白 雷帕霉素 Torin1 卵母细胞 卵丘细胞
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