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人角质细胞生长因子的植物表达载体构建 被引量:3
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作者 苏勇波 邵寒娟 +2 位作者 沈明山 王鸣刚 陈亮 《兰州大学学报(自然科学版)》 CAS CSCD 北大核心 2006年第2期25-28,共4页
人角质细胞生长因子(KGF)有3个外显子,2个内含子.以人 DNA 为模板,PCR 扩增获得角质细胞生长因子外显子2和外显子3;合成单链的寡核苷酸,经链延伸和 PCR 扩增从而获得外显子1.应用延伸 PCR 将3个外显子连接得 KGF 编码序列,并连接 CaM... 人角质细胞生长因子(KGF)有3个外显子,2个内含子.以人 DNA 为模板,PCR 扩增获得角质细胞生长因子外显子2和外显子3;合成单链的寡核苷酸,经链延伸和 PCR 扩增从而获得外显子1.应用延伸 PCR 将3个外显子连接得 KGF 编码序列,并连接 CaMV35S 启动子和 NOS 终止子后克隆至植物表达质粒 pBI 1301. 展开更多
关键词 角质细胞生长因子 植物表达载体 重叠延伸法
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人角质细胞生长因子基因转化水稻的初探
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作者 苏勇波 张红心 +1 位作者 沈明山 陈亮 《厦门大学学报(自然科学版)》 CAS CSCD 北大核心 2006年第B05期70-72,共3页
角质细胞生长因子(Keratinocyte growth factor,KGF)在组织的损伤修复中起着重要的作用.在植物里面表达高活性的KGF具有成本低、易开发的优点.本实验将人角质细胞生长因子基因经农杆菌介导转入水稻中,获得110株再生植株.对再生植株进行... 角质细胞生长因子(Keratinocyte growth factor,KGF)在组织的损伤修复中起着重要的作用.在植物里面表达高活性的KGF具有成本低、易开发的优点.本实验将人角质细胞生长因子基因经农杆菌介导转入水稻中,获得110株再生植株.对再生植株进行GUS检测发现有44.7%植株呈阳性,PCR检测的结果也显示有52.6%的植株为阳性植株. 展开更多
关键词 角质细胞生长因子 遗传转化 基因表达
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角化细胞生长因子的获得及植物表达载体的构建 被引量:2
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作者 邵寒娟 林涛 +1 位作者 苏勇波 陈亮 《厦门大学学报(自然科学版)》 CAS CSCD 北大核心 2004年第1期124-127,共4页
从鼠肺中提取RNA,设计相应的引物,经RT PCR扩增出角化细胞生长因子cDNA序列;插入pMD18 T载体,经DNA测序证实为KGF基因.将KGF基因经酶切后连接于植物CaMV35S启动子和NOS终止子之间,单酶切插入pBI1301植物双元表达载体,转化大肠杆菌,阳性... 从鼠肺中提取RNA,设计相应的引物,经RT PCR扩增出角化细胞生长因子cDNA序列;插入pMD18 T载体,经DNA测序证实为KGF基因.将KGF基因经酶切后连接于植物CaMV35S启动子和NOS终止子之间,单酶切插入pBI1301植物双元表达载体,转化大肠杆菌,阳性克隆提取质粒后转化农杆菌EHA105,实现KGF植物表达载体的构建,为KGF的进一步研究奠定基础. 展开更多
关键词 角化细胞生长因子 基因克隆 植物表达载体 KGF基因 有丝分裂剂
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OsCHX1基因克隆及转基因植株获得 被引量:2
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作者 张红心 杨晓坡 +1 位作者 苏勇波 陈亮 《厦门大学学报(自然科学版)》 CAS CSCD 北大核心 2008年第2期244-247,共4页
利用RT-PCR扩增水稻的Na+、K+/H+反向转运蛋白(OsCHX1)基因全序列,将其与35S启动子连接后,插入到p1301中,构建植物过量表达载体p1301-35S-OsCHX1-NOS.将该质粒转化农杆菌EHA105,并对水稻愈伤组织进行转化,获得了再生植株.对再生植株进行... 利用RT-PCR扩增水稻的Na+、K+/H+反向转运蛋白(OsCHX1)基因全序列,将其与35S启动子连接后,插入到p1301中,构建植物过量表达载体p1301-35S-OsCHX1-NOS.将该质粒转化农杆菌EHA105,并对水稻愈伤组织进行转化,获得了再生植株.对再生植株进行GUS和PCR鉴定,发现超过85%的再生植株为阳性植株.此研究结果为进一步探讨OsCHX1基因功能提供了实验材料. 展开更多
关键词 Na^+、K^+/H^+反向转运蛋白 植物表达载体 转基因
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RP-6启动子连接的IPT基因的双元载体构建 被引量:1
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作者 张红心 李晓星 +2 位作者 苏勇波 黄维雪 陈亮 《厦门大学学报(自然科学版)》 CAS CSCD 北大核心 2006年第3期432-435,共4页
以含有IPT基因的中间载体pSG516为基础,采用酶切的方法获得IPT-Nos核酸片段,以水稻品种9311为材料,采用PCR的方法克隆出种子中特异表达的醇溶谷蛋白RP-6基因启动子,并将此启动子连接到pCAMBIA1300上,构建pCAMBIA1300-pRP-6载体,将IPT-No... 以含有IPT基因的中间载体pSG516为基础,采用酶切的方法获得IPT-Nos核酸片段,以水稻品种9311为材料,采用PCR的方法克隆出种子中特异表达的醇溶谷蛋白RP-6基因启动子,并将此启动子连接到pCAMBIA1300上,构建pCAMBIA1300-pRP-6载体,将IPT-Nos核酸片段插入到pCAMBIA1300-pRP-6,构建了pCAMBIA1300-pRP-6-IPT-Nos双元表达载体. 展开更多
关键词 pRP-6 IPT pCAMBIA1300-pRP-6-IPT-Nos 特异表达
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建兰花叶病毒外壳蛋白基因和3'UTR序列测定与分析 被引量:1
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作者 郑国华 苏勇波 +2 位作者 郑志忠 彭德伟 明艳林 《植物保护》 CAS CSCD 北大核心 2013年第2期13-19,共7页
采用单链构象多态性分析从建兰花叶病毒(Cymbidium mosaic virus,CyMV)的8个分离物筛选得到5个存在遗传变异的分离物,并测定了外壳蛋白(coat protein,CP)基因和3′非编码区(3′UTR)序列,经序列分析表明5个分离物与其他分离物间的CP核苷... 采用单链构象多态性分析从建兰花叶病毒(Cymbidium mosaic virus,CyMV)的8个分离物筛选得到5个存在遗传变异的分离物,并测定了外壳蛋白(coat protein,CP)基因和3′非编码区(3′UTR)序列,经序列分析表明5个分离物与其他分离物间的CP核苷酸和氨基酸序列相似性分别为87.1%~99.9%和91.1%~99.6%,属于亚组A成员。CP基因不同片段受到正选择压力的作用不一样,C端受到负选择压力的作用不易发生变异,而N端受到正选择压力的作用容易发生变异。通过RNAsharpes软件分析3′UTR序列发现各分离物均形成带有Potexvirus属保守核苷酸序列"AC(C/T)TAA"的三叶草茎环结构,这种结构的功能可能与病毒RNA复制有关。 展开更多
关键词 建兰花叶病毒 外壳蛋白基因 3'非编码区 分子变异
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