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基于基因组改组技术的角蛋白酶高产菌株选育研究被引量：3: 1; 作者舒伟学马怡茗 +5 位作者李晓霞张晋龙柯欣颜霞颜华贾良辉《西北农林科技大学学报（自然科学版）》 CSCD 北大核心 2018年第4期137-146,共10页; 【目的】筛选具有高效角蛋白水解活性的微生物,为提高废弃羽毛中角蛋白资源的利用奠定基础。【方法】采用梯度稀释法,以羽毛作为惟一碳氮源对土样中的产角蛋白酶菌株进行筛选,筛选可高效降解羽毛的细菌。通过菌株的形态、生理生化特性以... 展开更多; 关键词角蛋白酶节杆菌属诱变基因组改组; 在线阅读下载PDF 职称材料

密旋链霉菌Act12遗传转化系统的建立与优化: 2; 作者李晓霞马怡茗 +4 位作者文冰洁舒伟学薛泉宏贾良辉颜华《西北农业学报》 CAS CSCD 北大核心 2018年第3期418-425,共8页; 密旋链霉菌(Streptomyces pactum)Act12是分离自黄土高原的1株多效放线菌,具有良好的生防应用价值,为了深入研究与利用,需建立该菌株的高效遗传转化系统。本试验以整合型质粒pSET152为出发质粒,大肠杆菌S17-1为供体,Act12的孢子为受体时... 展开更多; 关键词密旋链霉菌遗传转化系统接合转移; 在线阅读下载PDF 职称材料

羽毛降解杆状链霉菌S-28遗传转化系统的建立与优化被引量：4: 3; 作者张晋龙马怡茗 +4 位作者舒伟学李晓霞柯欣颜华贾良辉《西北农林科技大学学报（自然科学版）》 CSCD 北大核心 2018年第5期94-100,共7页; 【目的】建立羽毛降解杆状链霉菌(Streptomyces bacillaris)S-28的遗传转化系统,并对其进行优化,为该菌株的遗传改造奠定基础。【方法】以大肠杆菌-链霉菌穿梭整合型质粒pSET152为出发质粒,大肠杆菌(Escherichia coli)S17-1/pSET152为供... 展开更多; 关键词杆状链霉菌S-28 羽毛降解遗传转化系统接合转移; 在线阅读下载PDF 职称材料

缬草内生菌和根际放线菌的分离及安莎类抗生素的筛选被引量：3: 4; 作者吴佳李晓霞 +4 位作者舒伟学安晓英安雪莹颜华贾良辉《西北农林科技大学学报（自然科学版）》 CSCD 北大核心 2019年第6期107-114,共8页; 【目的】分离缬草内生菌及根际放线菌,筛选其中含安莎霉素类抗生素生物合成基因的菌株,挖掘其活性次级代谢产物资源。【方法】从缬草根、茎、叶及根际土壤中分离内生菌和根际放线菌,检测其对大肠杆菌、金黄色葡萄球菌、枯草芽孢杆菌、... 展开更多; 关键词缬草内生菌根际放线菌安莎霉素; 在线阅读下载PDF 职称材料

题名基于基因组改组技术的角蛋白酶高产菌株选育研究被引量：3: 1; 作者舒伟学马怡茗李晓霞张晋龙柯欣颜霞颜华贾良辉; 机构西北农林科技大学生命科学学院; 出处《西北农林科技大学学报（自然科学版）》 CSCD 北大核心 2018年第4期137-146,共10页; 基金中央高校基本科研业务费专项(Z109021426 Z109021432) +2 种基金 Z20120204120042) 陕西省农业科技创新与攻关项目(2015NY066); 文摘【目的】筛选具有高效角蛋白水解活性的微生物,为提高废弃羽毛中角蛋白资源的利用奠定基础。【方法】采用梯度稀释法,以羽毛作为惟一碳氮源对土样中的产角蛋白酶菌株进行筛选,筛选可高效降解羽毛的细菌。通过菌株的形态、生理生化特性以及16S rDNA序列分析,对菌株进行分类鉴定,并探讨其最适发酵条件。利用硫酸二乙酯(DES)和亚硝基胍(NTG)对目的菌株进行诱变,确定最适诱变条件,并进行原生质体融合,通过基因组改组选育角蛋白酶高产菌株。【结果】分离筛选到1株具有较强羽毛降解能力的菌株ZJT01,该菌落圆形凸出,革兰氏染色呈阳性,酪素水解、硝酸盐利用、柠檬酸利用等生理生化试验均呈阳性。结合菌株16S rDNA同源序列比对分析,初步鉴定其为节杆菌(Arthrobactersp.)。菌株ZJT01产角蛋白酶的最适发酵温度和时间分别为32℃和72h。其DES最适用量为9μL/mL,诱变时间为20min;NTG的最适合质量浓度是0.6mg/mL,处理时间为15min。原生质体制备的最佳条件为:溶菌酶终质量浓度10 mg/mL,酶解温度37℃,酶解0.5h。经过硫酸二乙酯(DES)和亚硝基胍(NTG)分别诱变处理,获得角蛋白酶活性提高的菌株DES-2和NTG-2;对其进行3轮基因组改组后,筛选到2株角蛋白酶活性比亲本菌株ZJT01提高了5.48倍的重组菌株,且其产酶活性可稳定遗传。【结论】通过基因组改组技术获得了2株角蛋白酶活性大幅提高的菌株F3-5和F3-6,这2株菌对羽毛的降解效果较亲本菌株ZJT01明显提高,具有较好的应用前景。; 关键词角蛋白酶节杆菌属诱变基因组改组; Keywords keratinase Arthrobacter mutagenesis genome shuffling; 分类号 Q93-331 [生物学—微生物学]; 在线阅读下载PDF 职称材料

题名密旋链霉菌Act12遗传转化系统的建立与优化: 2; 作者李晓霞马怡茗文冰洁舒伟学薛泉宏贾良辉颜华; 机构西北农林科技大学生命科学学院西北农林科技大学环境资源学院; 出处《西北农业学报》 CAS CSCD 北大核心 2018年第3期418-425,共8页; 基金陕西省农业科技创新与攻关项目(2015NY066) 上海交通大学微生物代谢国家重点实验室开放基金(MMLKF14-09) +3 种基金 Z109021432) 高校博士点基金(20120204120034 20120204120042)~~; 文摘密旋链霉菌(Streptomyces pactum)Act12是分离自黄土高原的1株多效放线菌,具有良好的生防应用价值,为了深入研究与利用,需建立该菌株的高效遗传转化系统。本试验以整合型质粒pSET152为出发质粒,大肠杆菌S17-1为供体,Act12的孢子为受体时,在改良2CMY培养基上进行接合转移,孢子预萌发条件为50℃热激10min,阿普霉素质量浓度为10.0mg/L,覆盖时间为18h,转化效率达到2.079×10^(-5)。以抗阿普霉素基因为目的基因,通过PCR验证,成功地将质粒pSET152转入到Act12中。同时,利用该转化系统,成功敲出Act12基因组中一可能的负调控转录因子spa0520,并获得了次级代谢图谱明显变化的缺失突变株Δspa0520。所构建的Act12遗传转化系统,为后续对其生防活性机理的研究以及深入开发利用奠定了基础。另外,通过培养基的改良发现,Act12在氮源含有NO-3时产孢丰富,为后续研究提供了思路。; 关键词密旋链霉菌遗传转化系统接合转移; Keywords Streptomyces pactum Genetic transformation Conjugational transfer; 分类号 Q935 [生物学—微生物学]; 在线阅读下载PDF 职称材料

题名羽毛降解杆状链霉菌S-28遗传转化系统的建立与优化被引量：4: 3; 作者张晋龙马怡茗舒伟学李晓霞柯欣颜华贾良辉; 机构西北农林科技大学生命科学学院; 出处《西北农林科技大学学报（自然科学版）》 CSCD 北大核心 2018年第5期94-100,共7页; 基金中央高校基本科研业务费专项(Z109021426 Z109021432) 陕西省农业科技创新与攻关项目(2015NY066); 文摘【目的】建立羽毛降解杆状链霉菌(Streptomyces bacillaris)S-28的遗传转化系统,并对其进行优化,为该菌株的遗传改造奠定基础。【方法】以大肠杆菌-链霉菌穿梭整合型质粒pSET152为出发质粒,大肠杆菌(Escherichia coli)S17-1/pSET152为供体,羽毛降解杆状链霉菌S-28孢子为受体进行接合转移试验,并对影响接合效率的培养基种类、MgCl_2浓度、热激温度、预萌发时间、供受体比例和接合转移时间等要素进行优化。【结果】确定筛选羽毛降解杆状链霉菌S-28菌株接合转化子的抗生素为安普霉素≥10μg/mL或卡那霉素≥20μg/mL;成功将pSET152转入到杆状链霉菌S-28中。优化的S-28菌株接合转移条件为:以MS为接合转移最适培养基,MgCl_2浓度为10mmol/L,孢子萌发条件为40℃热激10min且不进行预萌发处理,供受体比例为10∶1,接合转移时间18~20h,此条件下接合转化效率最高达到10-4。【结论】建立并优化了羽毛降解杆状链霉菌S-28的遗传转化系统,接合转化效率最高可达到10^(-4)。; 关键词杆状链霉菌S-28 羽毛降解遗传转化系统接合转移; Keywords Streptomyces bacillaris S-28 feather-degrading genetic transformation system conjugaltransfer; 分类号 Q933 [生物学—微生物学]; 在线阅读下载PDF 职称材料

题名缬草内生菌和根际放线菌的分离及安莎类抗生素的筛选被引量：3: 4; 作者吴佳李晓霞舒伟学安晓英安雪莹颜华贾良辉; 机构西北农林科技大学生命科学学院; 出处《西北农林科技大学学报（自然科学版）》 CSCD 北大核心 2019年第6期107-114,共8页; 基金中央高校基本科研业务费专项(Z109021426 Z109021432) 陕西省农业科技创新与攻关项目(2015NY066); 文摘【目的】分离缬草内生菌及根际放线菌,筛选其中含安莎霉素类抗生素生物合成基因的菌株,挖掘其活性次级代谢产物资源。【方法】从缬草根、茎、叶及根际土壤中分离内生菌和根际放线菌,检测其对大肠杆菌、金黄色葡萄球菌、枯草芽孢杆菌、核桃溃疡病菌、苹果腐烂病菌、苹果轮纹病菌、油菜菌核病菌、小麦赤霉病菌、棉花枯萎病菌的抑菌效果。设计2种简并引物,用PCR方法从抑菌效果较好的菌株中筛选含安莎霉素类抗生素基因(AHBA)的菌株。分析目标菌株的最佳发酵培养基和最适发酵时长,对发酵分离物进行HPLC和质谱分析,检测其可能的次级代谢产物。【结果】试验共分离到145株菌,其中内生菌27株,占总菌株数的18.6%,根际放线菌118株,占总菌株数的81.4%;33株对病原菌有较好的抑菌效果,占总菌株数的22.8%。筛选到1株含AHBA基因的菌株AJ21,初步鉴定其为链霉菌。菌株AJ21最佳发酵培养基为SPY培养基,最佳发酵时间为6d。菌株AJ21发酵液经分离纯化、HPLC检测和质谱分析,初步确定其含有的安莎霉素类抗生素为放线菌素D。【结论】药用植物缬草内部及根际蕴含丰富的放线菌资源,具有良好的生物学活性。; 关键词缬草内生菌根际放线菌安莎霉素; Keywords Valerian endophytic rhizospheric actinomycetes ansamycins; 分类号 Q948.12 [生物学—植物学]; 在线阅读下载PDF 职称材料

	题名	作者	出处	发文年	被引量	操作
1	基于基因组改组技术的角蛋白酶高产菌株选育研究	舒伟学马怡茗李晓霞张晋龙柯欣颜霞颜华贾良辉	《西北农林科技大学学报（自然科学版）》 CSCD 北大核心	2018	3	在线阅读下载PDF 职称材料
2	密旋链霉菌Act12遗传转化系统的建立与优化	李晓霞马怡茗文冰洁舒伟学薛泉宏贾良辉颜华	《西北农业学报》 CAS CSCD 北大核心	2018	0	在线阅读下载PDF 职称材料
3	羽毛降解杆状链霉菌S-28遗传转化系统的建立与优化	张晋龙马怡茗舒伟学李晓霞柯欣颜华贾良辉	《西北农林科技大学学报（自然科学版）》 CSCD 北大核心	2018	4	在线阅读下载PDF 职称材料
4	缬草内生菌和根际放线菌的分离及安莎类抗生素的筛选	吴佳李晓霞舒伟学安晓英安雪莹颜华贾良辉	《西北农林科技大学学报（自然科学版）》 CSCD 北大核心	2019	3	在线阅读下载PDF 职称材料