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马疱疹病毒1型QuantStudio^TM 3D数字PCR检测方法的建立
被引量：
10
1
作者
雷程红
陈凯云
+6 位作者
徐新峰
胡都斯·艾尔肯
徐军
白梅花
史茜
肖媛媛
王科珂
《中国畜牧兽医》
CAS
北大核心
2020年第5期1299-1306,共8页
试验旨在建立一种高灵敏性的马疱疹病毒1(EHV-1)3D数字PCR(3D-dPCR)检测方法,对EHV-1病毒含量较低的样品能准确定量检出,实现马鼻肺炎早期诊断及预防。根据EHV-1糖蛋白B基因保守区域设计特异性引物和探针,优化3D-dPCR反应体系中引物探...
试验旨在建立一种高灵敏性的马疱疹病毒1(EHV-1)3D数字PCR(3D-dPCR)检测方法,对EHV-1病毒含量较低的样品能准确定量检出,实现马鼻肺炎早期诊断及预防。根据EHV-1糖蛋白B基因保守区域设计特异性引物和探针,优化3D-dPCR反应体系中引物探针浓度和退火温度,对该方法进行灵敏性、特异性、重复性分析,建立了EHV-1的3D-dPCR方法。本研究建立的3D-dPCR方法,引物和探针最佳浓度分别为0.4和0.4μmol/L,最佳退火温度为60℃,该方法绝对定量曲线的R2=0.998,线性关系良好,与实时荧光定量PCR方法相比灵敏度高10倍左右,最低检出限为5.83拷贝/μL;批内和批间重复性试验变异系数均<3.2%;与EHV-4、马泰勒虫、马病毒性动脉炎的核酸无交叉反应;通过对123份临床样品进行3D-dPCR检测,结果显示,3D-dPCR方法阳性检出率为66.7%,高于世界动物卫生组织(OIE)中EHV-1的实时荧光定量PCR方法阳性检出率64.2%。3D-dPCR方法对病毒含量较高的样品与实时荧光定量PCR结果一致,对病毒含量较低的样品敏感性更高,能有效检出可疑样品。本试验结果表明,建立的3D-dPCR方法检测低拷贝数的临床样品时灵敏度高、特异性强、重复性好,可用于EHV-1的准确定量检测。
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关键词
马疱疹病毒1型(EHV-1)
3D数字PCR(3D-dPCR)
绝对定量
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职称材料
阿魏菇粗多糖体外脾细胞调节功能及体内疫苗佐剂功能的研究
被引量：
1
2
作者
史茜
胡都斯·艾尔肯
+4 位作者
龙志新
王科珂
蒋刚强
史向向
张富春
《动物医学进展》
北大核心
2022年第7期57-63,共7页
为研究阿魏菇粗多糖(PFCP)体外对小鼠脾细胞增殖的作用和体内对口蹄疫灭活疫苗的佐剂功能,MTT法检测PFCP最大无毒浓度,PFCP与Con A、LPS联用刺激小鼠脾细胞增殖的能力,ELISA检测细胞培养上清中IL-4与IFN-γ含量。PFCP联合口蹄疫病毒灭...
为研究阿魏菇粗多糖(PFCP)体外对小鼠脾细胞增殖的作用和体内对口蹄疫灭活疫苗的佐剂功能,MTT法检测PFCP最大无毒浓度,PFCP与Con A、LPS联用刺激小鼠脾细胞增殖的能力,ELISA检测细胞培养上清中IL-4与IFN-γ含量。PFCP联合口蹄疫病毒灭活抗原皮下注射免疫接种小鼠,ELISA检测IgG生成情况,流式细胞术分析免疫后小鼠脾脏T淋巴细胞亚群比例。结果显示,PFCP安全性好,体外可协同ConA与LPS促进小鼠脾细胞的增殖,增加IL-4与IFN-γ的分泌量。体内可增强口蹄疫病毒特异性IgG的水平,增加CD3+CD4+T、CD3+CD8+T淋巴细胞的数量。表明PFCP对小鼠脾细胞增殖具有较好的促进作用,且具有作为口蹄疫灭活疫苗佐剂的潜力。
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关键词
阿魏菇
多糖
脾细胞
口蹄疫
佐剂
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职称材料
题名
马疱疹病毒1型QuantStudio^TM 3D数字PCR检测方法的建立
被引量：
10
1
作者
雷程红
陈凯云
徐新峰
胡都斯·艾尔肯
徐军
白梅花
史茜
肖媛媛
王科珂
机构
新疆农业大学动物医学学院
乌鲁木齐海关技术中心
出处
《中国畜牧兽医》
CAS
北大核心
2020年第5期1299-1306,共8页
基金
2018海关总署科研计划项目(2018IK063)
2019海关总署科研计划项目(2019HK049)。
文摘
试验旨在建立一种高灵敏性的马疱疹病毒1(EHV-1)3D数字PCR(3D-dPCR)检测方法,对EHV-1病毒含量较低的样品能准确定量检出,实现马鼻肺炎早期诊断及预防。根据EHV-1糖蛋白B基因保守区域设计特异性引物和探针,优化3D-dPCR反应体系中引物探针浓度和退火温度,对该方法进行灵敏性、特异性、重复性分析,建立了EHV-1的3D-dPCR方法。本研究建立的3D-dPCR方法,引物和探针最佳浓度分别为0.4和0.4μmol/L,最佳退火温度为60℃,该方法绝对定量曲线的R2=0.998,线性关系良好,与实时荧光定量PCR方法相比灵敏度高10倍左右,最低检出限为5.83拷贝/μL;批内和批间重复性试验变异系数均<3.2%;与EHV-4、马泰勒虫、马病毒性动脉炎的核酸无交叉反应;通过对123份临床样品进行3D-dPCR检测,结果显示,3D-dPCR方法阳性检出率为66.7%,高于世界动物卫生组织(OIE)中EHV-1的实时荧光定量PCR方法阳性检出率64.2%。3D-dPCR方法对病毒含量较高的样品与实时荧光定量PCR结果一致,对病毒含量较低的样品敏感性更高,能有效检出可疑样品。本试验结果表明,建立的3D-dPCR方法检测低拷贝数的临床样品时灵敏度高、特异性强、重复性好,可用于EHV-1的准确定量检测。
关键词
马疱疹病毒1型(EHV-1)
3D数字PCR(3D-dPCR)
绝对定量
Keywords
equine herpesvirus type 1(EHV-1)
3D digital PCR(3D-dPCR)
absolute quantification
分类号
S852.65 [农业科学—基础兽医学]
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职称材料
题名
阿魏菇粗多糖体外脾细胞调节功能及体内疫苗佐剂功能的研究
被引量：
1
2
作者
史茜
胡都斯·艾尔肯
龙志新
王科珂
蒋刚强
史向向
张富春
机构
新疆大学生命科学与技术学院
乌鲁木齐海关技术中心
吐尔尕特海关
出处
《动物医学进展》
北大核心
2022年第7期57-63,共7页
基金
新疆维吾尔自治区科技支疆项目(201591134)。
文摘
为研究阿魏菇粗多糖(PFCP)体外对小鼠脾细胞增殖的作用和体内对口蹄疫灭活疫苗的佐剂功能,MTT法检测PFCP最大无毒浓度,PFCP与Con A、LPS联用刺激小鼠脾细胞增殖的能力,ELISA检测细胞培养上清中IL-4与IFN-γ含量。PFCP联合口蹄疫病毒灭活抗原皮下注射免疫接种小鼠,ELISA检测IgG生成情况,流式细胞术分析免疫后小鼠脾脏T淋巴细胞亚群比例。结果显示,PFCP安全性好,体外可协同ConA与LPS促进小鼠脾细胞的增殖,增加IL-4与IFN-γ的分泌量。体内可增强口蹄疫病毒特异性IgG的水平,增加CD3+CD4+T、CD3+CD8+T淋巴细胞的数量。表明PFCP对小鼠脾细胞增殖具有较好的促进作用,且具有作为口蹄疫灭活疫苗佐剂的潜力。
关键词
阿魏菇
多糖
脾细胞
口蹄疫
佐剂
Keywords
Pleurotus ferulae
polysaccharide
splenocyte
foot-and-mouth disease
adjuvant
分类号
S852.42 [农业科学—基础兽医学]
S852.659.1 [农业科学—基础兽医学]
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职称材料
题名
作者
出处
发文年
被引量
操作
1
马疱疹病毒1型QuantStudio^TM 3D数字PCR检测方法的建立
雷程红
陈凯云
徐新峰
胡都斯·艾尔肯
徐军
白梅花
史茜
肖媛媛
王科珂
《中国畜牧兽医》
CAS
北大核心
2020
10
在线阅读
下载PDF
职称材料
2
阿魏菇粗多糖体外脾细胞调节功能及体内疫苗佐剂功能的研究
史茜
胡都斯·艾尔肯
龙志新
王科珂
蒋刚强
史向向
张富春
《动物医学进展》
北大核心
2022
1
在线阅读
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职称材料
已选择
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