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运用二维相关光谱手段研究Atto495荧光探针标记的细菌光敏色素
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作者 胡奇洲 冯娟 《光谱学与光谱分析》 SCIE EI CAS CSCD 北大核心 2016年第S1期425-426,共2页
细菌光敏色素是一类含有胆绿素BV分子、对红光和远红光具有响应的色素-蛋白复合物。本文在采用Atto495分子对细菌光敏色素同源二聚体进行荧光标记的基础上,借助二维相关光谱手段分析了SDS对于结合到蛋白中的Atto495荧光发射谱的影响,发... 细菌光敏色素是一类含有胆绿素BV分子、对红光和远红光具有响应的色素-蛋白复合物。本文在采用Atto495分子对细菌光敏色素同源二聚体进行荧光标记的基础上,借助二维相关光谱手段分析了SDS对于结合到蛋白中的Atto495荧光发射谱的影响,发现除了非特异性结合,Atto495可以与Cys20以及其它区域的Cys结合。相关工作为后续分析光转换过程中的蛋白结构的变化奠定了基础。 展开更多
关键词 细菌光敏色素 荧光标记 二维相关光谱
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一种近红外荧光蛋白PAiRFP1及其突变体V276G的光活化效率研究
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作者 白英男 冯娟 +3 位作者 胡奇洲 吴清勤 周雨 刘贻尧 《光谱学与光谱分析》 SCIE EI CAS CSCD 北大核心 2017年第11期3379-3385,共7页
PAiRFP1是一种以根癌农杆菌中细菌光敏色素Agp2为基础,经过蛋白工程手段改造后获得的近红外荧光蛋白。与其他近红外荧光蛋白不同,PAiRFP1具有光活化行为。这一特性可以有效改善近红外荧光蛋白在体内的成像信噪比。然而,关于光活化行为... PAiRFP1是一种以根癌农杆菌中细菌光敏色素Agp2为基础,经过蛋白工程手段改造后获得的近红外荧光蛋白。与其他近红外荧光蛋白不同,PAiRFP1具有光活化行为。这一特性可以有效改善近红外荧光蛋白在体内的成像信噪比。然而,关于光活化行为的影响因素却研究甚少。主要采用荧光光谱学手段研究了PAiRFP1蛋白浓度、pH、金属离子、氧化还原环境对于PAiRFP1光活化行为的影响,结果发现:(1)PAiRFP1的最大光活化效率与该近红外荧光蛋白的浓度不呈线性关系;(2)随着pH从6.5升高至7.8和9.0,PAiRFP1的最大光活化效率从36.8%提高至52.0%和60.8%;(3)金属离子K^+,Na^+,Ca^(2+)的加入对于PAiRFP1的最大光活化效率没有显著影响;类似现象在H_2O_2和DTT的处理的情况下也被观察到。除了上述影响因素外,还发现当PAiRFP1中276位的缬氨酸被突变为甘氨酸产生V276G突变体后,蛋白的最大光活化效率从~50.0%下降至19.4%。DTT处理后导致V276G突变体最大光活化效率从19.4%提高到了27.1%。此外,比较研究了各种影响因素对于光活化速率的影响。以上结果为今后更好地将此类光激活的近红外蛋白应用于活体成像中提供了更好地理论指导和优化解决方案。 展开更多
关键词 细菌光敏色素 近红外荧光蛋白 光活化效率 突变体
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运用荧光光谱学研究AzoR与底物酸性红的相互作用
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作者 吴清勤 胡奇洲 冯娟 《光谱学与光谱分析》 SCIE EI CAS CSCD 北大核心 2016年第S1期375-376,共2页
运用荧光光谱学手段研究了含有FMN的大肠杆菌偶氮还原酶AzoR以及R59G突变体与底物酸性红之间的相互作用,发现伴随底物酸性红浓度的增加,FMN在520nm左右的荧光强度显著降低。通过标准结合方程拟合获得了酶与底物的结合常数,发现25℃野生... 运用荧光光谱学手段研究了含有FMN的大肠杆菌偶氮还原酶AzoR以及R59G突变体与底物酸性红之间的相互作用,发现伴随底物酸性红浓度的增加,FMN在520nm左右的荧光强度显著降低。通过标准结合方程拟合获得了酶与底物的结合常数,发现25℃野生型AzoR与酸性红的结合常数为2.84×106 L·mol-1,而突变体R59G的则降到了4.75×105 L·mol-1;此外,通过对野生型及其突变体进行变温实验、并计算焓变和熵变,发现当第59位精氨酸突变成甘氨酸后会导致底物与酶之间的相互作用类型从离子键向范德华力转变。 展开更多
关键词 偶氮还原酶 突变体 结合常数
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