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龟甲的特异性PCR及高分辨率熔解曲线技术鉴别方法研究
被引量：
11
1
作者
张雪艳
袁媛
+2 位作者
胡启跳
蒋超
方成武
《中国现代中药》
CAS
2019年第9期1215-1220,共6页
目的:建立高效、稳定的龟甲Testudinis Carapax et Plastrum DNA鉴别方法。方法:利用龟甲的特异性聚合酶链式反应(Polymerase Chain Reaction,PCR)鉴别方法和高分辨率熔解曲线(HRM)鉴别方法,根据龟甲及其混伪品COI序列差异,寻找特异性...
目的:建立高效、稳定的龟甲Testudinis Carapax et Plastrum DNA鉴别方法。方法:利用龟甲的特异性聚合酶链式反应(Polymerase Chain Reaction,PCR)鉴别方法和高分辨率熔解曲线(HRM)鉴别方法,根据龟甲及其混伪品COI序列差异,寻找特异性单核苷酸多态性(single nucleotide polymorphism,SNP)位点设计鉴别引物,并对PCR反应条件进行优化;并使用通用引物扩增COI区域,产物直接进行HRM分析。结果:当退火温度为60 ℃,循环次数为35,使用设计的龟甲特异性鉴别引物GJ-360.F/R进行PCR扩增,经扩增均获得约360 bp特异性鉴别条带,混伪品皆无条带;使用通用引物RonM-tl和Vl-tl进行PCR扩增,产物使用HRM分析,龟甲药材在模板DNA质量浓度为3.5~87.9 ng ·μL^-1 、引物浓度为0.2 μmol · L ^-1 、镁离子浓度为2.0 mmol · L ^-1 的条件下,龟甲药材标准熔解曲线为双峰,其 T m均值分别为(83.15±0.76)、(87.53±0.69 )℃。结论:特异性PCR和HRM均可作为一种快速准确鉴别龟甲正伪品的鉴定方法。
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关键词
龟甲
特异性聚合酶链式反应
分子鉴定
高分辨率熔解曲线
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职称材料
题名
龟甲的特异性PCR及高分辨率熔解曲线技术鉴别方法研究
被引量：
11
1
作者
张雪艳
袁媛
胡启跳
蒋超
方成武
机构
中国中医科学院中药资源中心道地药材国家重点实验室培育基地
安徽中医药大学药学院
出处
《中国现代中药》
CAS
2019年第9期1215-1220,共6页
基金
中央本级重大增减支项目(2060302)
中央级公益性科研院所基本科研业务费专项(ZZ10-008)
文摘
目的:建立高效、稳定的龟甲Testudinis Carapax et Plastrum DNA鉴别方法。方法:利用龟甲的特异性聚合酶链式反应(Polymerase Chain Reaction,PCR)鉴别方法和高分辨率熔解曲线(HRM)鉴别方法,根据龟甲及其混伪品COI序列差异,寻找特异性单核苷酸多态性(single nucleotide polymorphism,SNP)位点设计鉴别引物,并对PCR反应条件进行优化;并使用通用引物扩增COI区域,产物直接进行HRM分析。结果:当退火温度为60 ℃,循环次数为35,使用设计的龟甲特异性鉴别引物GJ-360.F/R进行PCR扩增,经扩增均获得约360 bp特异性鉴别条带,混伪品皆无条带;使用通用引物RonM-tl和Vl-tl进行PCR扩增,产物使用HRM分析,龟甲药材在模板DNA质量浓度为3.5~87.9 ng ·μL^-1 、引物浓度为0.2 μmol · L ^-1 、镁离子浓度为2.0 mmol · L ^-1 的条件下,龟甲药材标准熔解曲线为双峰,其 T m均值分别为(83.15±0.76)、(87.53±0.69 )℃。结论:特异性PCR和HRM均可作为一种快速准确鉴别龟甲正伪品的鉴定方法。
关键词
龟甲
特异性聚合酶链式反应
分子鉴定
高分辨率熔解曲线
Keywords
Testudinis Carapax et Plastrum
specific PCR
molecular identification
High-resolution melting curve
分类号
R282.74 [医药卫生—中药学]
R284 [医药卫生—中药学]
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作者
出处
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被引量
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1
龟甲的特异性PCR及高分辨率熔解曲线技术鉴别方法研究
张雪艳
袁媛
胡启跳
蒋超
方成武
《中国现代中药》
CAS
2019
11
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