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猪繁殖与呼吸综合征病毒LAMP检测方法的建立 被引量:9
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作者 罗忠永 王印 杨泽晓 《动物医学进展》 北大核心 2016年第3期1-5,共5页
应用通用反转录试剂盒和环介导等温核酸扩增技术(LAMP)建立了猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)的快速检测方法,同时评价了该检测方法的特异性、稳定性和灵敏度。结果表明,根据猪繁殖与呼吸综合征病毒M蛋白基因保守区设计的LAMP引物能够在6... 应用通用反转录试剂盒和环介导等温核酸扩增技术(LAMP)建立了猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)的快速检测方法,同时评价了该检测方法的特异性、稳定性和灵敏度。结果表明,根据猪繁殖与呼吸综合征病毒M蛋白基因保守区设计的LAMP引物能够在64.5℃60min内实现对目标核酸片段的大量扩增,检测结果可通过直接观察反应副产物(焦磷酸镁)进行判读,该检测系统具有很高的特异性,与猪瘟病毒、猪乙型脑炎病毒等均无交叉反应;通过PRRSV不同毒株疫苗、模拟样品和临床样品确定,该检测系统具有很好的稳定性;通过质粒确定该检测系统可以检测到10拷贝/μL的病毒核酸模板。结果表明成功建立了猪繁殖与呼吸综合征病毒LAMP快速检测方法,为临床提供了一种很好的检测手段。 展开更多
关键词 猪繁殖与呼吸综合征病毒 环介导等温核酸扩增 检测
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SYBR Green Ⅰ实时荧光定量PCR检测PRRSV方法的建立 被引量:6
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作者 罗忠永 王印 杨泽晓 《动物医学进展》 北大核心 2016年第4期1-5,共5页
根据编码PRRSV M蛋白的基因序列设计用于SYBR GreenⅠ实时荧光定量PCR扩增的引物,通过温度梯度法优化反应体系;以不同科属常见猪致病性RNA病毒疫苗验证该检测方法的特异性,参考国内PRRSV分子流行病学特征,选择基因型代表性的2株疫苗株... 根据编码PRRSV M蛋白的基因序列设计用于SYBR GreenⅠ实时荧光定量PCR扩增的引物,通过温度梯度法优化反应体系;以不同科属常见猪致病性RNA病毒疫苗验证该检测方法的特异性,参考国内PRRSV分子流行病学特征,选择基因型代表性的2株疫苗株验证该检测方法的稳定性;以10倍梯度稀释的质粒为标准品扩增并构建标准曲线,探究该检测方法的灵敏度,随机挑取10份保存的PRRSV阳性病料和10份阴性病料同时使用农业部推荐的PRRSV RT-PCR检疫标准方法和建立的方法进行检测,以确定2种方法检测的符合率。结果显示,使用建立的方法可以在54.4℃80min内完成对PRRSV的检测,该检测方法具有特异性和稳定性;检测灵敏度为6.8×10拷贝/μL;以Ct值为横坐标,扩增序列拷贝浓度的对数值为纵坐标,得到标准曲线,方程为y=-3.411 x+39.002,R2=0.999;对随机挑取的10份PRRSV阳性病料和10份阴性病料进行检测,结果2种方法检测结果的符合率100%。结果表明,成功建立了PRRSV SYBR GreenⅠ实时荧光定量PCR快速检测方法,为临床提供了一种很好的检测手段。 展开更多
关键词 猪繁殖与呼吸综合征病毒 M蛋白 SYBR GreenⅠ实时荧光定量PCR
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实时荧光定量PCR模板核酸提取方法的比较 被引量:3
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作者 罗忠永 王印 杨泽晓 《动物医学进展》 北大核心 2016年第11期53-56,共4页
对病料核酸提取前处理方法进行优化,选择酚/氯仿法、试剂盒提取法和DNA/RNA同提取法,比较提取效果,为实验室核酸提取提供参考。配制模拟样品,通过实时荧光定量PCR比较3种方法提取效果。结果表明,提取纯度为试剂盒提取法>酚/氯仿法>... 对病料核酸提取前处理方法进行优化,选择酚/氯仿法、试剂盒提取法和DNA/RNA同提取法,比较提取效果,为实验室核酸提取提供参考。配制模拟样品,通过实时荧光定量PCR比较3种方法提取效果。结果表明,提取纯度为试剂盒提取法>酚/氯仿法>DNA/RNA同提取法。提取效率为酚/氯仿法>DNA/RNA同提取法>试剂盒提取法。表明各提取方法效果差异显著(P<0.01),为实验室核酸提取提供了参考。 展开更多
关键词 核酸提取方法 实时荧光定量PCR 提取效果
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杂交粳稻申优42的选育 被引量:1
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作者 周继华 程灿 +4 位作者 储黄伟 牛付安 孙滨 罗忠永 曹黎明 《浙江农业科学》 2020年第9期1740-1742,共3页
申优42是上海市农业科学院以BT型粳稻不育系申21A和强优势粳稻恢复系繁42配组选育的优质杂交粳稻新组合,具有米质优、抗性强等特点;由于双亲的播始历期一致,适宜父母本同时栽插和直播,利于机械化操作,可有效解决劳动力紧张、制种成本高... 申优42是上海市农业科学院以BT型粳稻不育系申21A和强优势粳稻恢复系繁42配组选育的优质杂交粳稻新组合,具有米质优、抗性强等特点;由于双亲的播始历期一致,适宜父母本同时栽插和直播,利于机械化操作,可有效解决劳动力紧张、制种成本高等问题。介绍该组合的选育过程、特征特性及主要栽培制种技术等。 展开更多
关键词 杂交粳稻 申优42 优质 机械化栽培 机械化制种
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