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显微注射法制备转基因小鼠的技术研究
被引量：
9
1
作者
鞠丽梅
三好一郎
+1 位作者
笠井
憲
雪
蔡有余
《中国实验动物学报》
CAS
CSCD
1999年第1期11-15,共5页
转基因技术是发生工程学或胚胎操作技术中的一部分。这一技术包括有受精卵的采集，受精卵的体外培养，胚胎移植等技术，转基因动物制作是其应用技术之一，它是将外源ＤＮＡ片段用显微注射法直接注入受精卵原核，使外源ＤＮＡ随机整合到...
转基因技术是发生工程学或胚胎操作技术中的一部分。这一技术包括有受精卵的采集，受精卵的体外培养，胚胎移植等技术，转基因动物制作是其应用技术之一，它是将外源ＤＮＡ片段用显微注射法直接注入受精卵原核，使外源ＤＮＡ随机整合到寄主基因组中而形成转基因小鼠。我们建立完善这一技术的目的是在实验动物的生产中为转基因动物的生产提供稳定可靠的保证。我们将ｐＣＸＴＧＡＰ、ｐＣＳＬＮ等基因分别注入受精卵原核制备相应的转基因动物模型，并从中总结较佳的操作技术。结果经检测阳性转基因小鼠占出生幼鼠的１６３８％。我们认为不仅要有精细的微注射技术、动物的选用和饲育、严密的胚胎操作都是转基因动物制作成功的重要条件。
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关键词
转基因小鼠
原核
胚胎
生产中
受精卵
转基因动物
术中
外源DNA
显微注射法
主基因
在线阅读
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职称材料
人ATP7B基因在转基因大鼠的铜代谢通路中的功能分析
2
作者
孟雁
三好一郎
+5 位作者
平林真澄
本谷安正
寺田邦彦
上田正次
杉山俊博
笠井
憲
雪
《中国比较医学杂志》
CAS
2004年第4期193-199,共7页
目的 利用转基因大鼠模型 ,研究人Wilson病致病基因ATP7B在铜代谢通路中的功能。方法 将构建的 7 1kb含有鸡 β肌动蛋白启动子的人正常ATP7BcDNA ,经显微注射法导入Wilson病动物模型LEC(long_evanscinnamon)大鼠受精卵的雄性原核。以R...
目的 利用转基因大鼠模型 ,研究人Wilson病致病基因ATP7B在铜代谢通路中的功能。方法 将构建的 7 1kb含有鸡 β肌动蛋白启动子的人正常ATP7BcDNA ,经显微注射法导入Wilson病动物模型LEC(long_evanscinnamon)大鼠受精卵的雄性原核。以RT_PCR和Westernblot分析其在转基因大鼠各组织内的表达谱 ;用抗大鼠铜蓝蛋白抗体检测肝细胞全铜蓝蛋白 (holoceruloplasmin)的合成 ;同时对 6～ 30周龄的转基因大鼠血清铜蓝蛋白亚铁氧化酶活性、血清铜浓度、胆汁的铜分泌量、以及肝、肾和脑组织中的铜含量进行分年龄段连续测定和统计学分析。结果 在转基因大鼠体内 ,ATP7B在各种组织中获得广泛表达 ,其中肝和肌肉中的表达水平较高 ,肝细胞恢复了全铜蓝蛋白的合成 ,血清中的铜含量及胆汁的铜排泄量增加 ,肝、肾组织中的铜蓄积减少。结论 完整表达人ATP7B基因产物的转基因大鼠的肝细胞 ,通过CPN介导的铜向血清的分泌和调节铜向胆汁的排泄 ,恢复了ATP7B参与铜转运功能 ,Wilson病的铜蓄积与ATP7B基因的突变直接相关。
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关键词
ATP7B
转基因大鼠
铜代谢
血清全铜蓝蛋白
医学实验
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职称材料
转基因技术和冷冻胚胎技术的实验数据建立
3
作者
鞠丽梅
蔡有余
+5 位作者
顾熟琴
余乃绚
徐凤
华克非
三好一郎
笠井宪雪
《中国实验动物学杂志》
2001年第4期232-235,共4页
目的 建立一系列转基因技术和冷冻胚胎技术的实验室数据库。方法 a)显微注射法注射 186 4个1-细胞期受精卵 ,注射后存活的 12 83个胚胎进行胚胎移植 ,获得 2 0只阳性转基因动物。b)设计不同单位的激素剂量 (PMSGHCG)获得每个品系的小...
目的 建立一系列转基因技术和冷冻胚胎技术的实验室数据库。方法 a)显微注射法注射 186 4个1-细胞期受精卵 ,注射后存活的 12 83个胚胎进行胚胎移植 ,获得 2 0只阳性转基因动物。b)设计不同单位的激素剂量 (PMSGHCG)获得每个品系的小鼠平均排卵量和最佳激素剂量。c)采用常规法和玻璃化法进行胚胎冷冻保存 ,并就囊胚和桑椹胚两个不同时期进行复苏成活率的比较。结果和讨论 a)建立转基因技术和胚胎冷冻保存的实验数据库 (随着实验技术的不断提高还将不断的完善 )。胚胎显微注射存活率为 6 8 8% ;转基因阳性鼠出生率为16 16 % ;基因整合率为 1 5 6 %。b)激素诱发 5种品系小鼠的平均超排卵数为 :C57BL 6J(日本 ) 15 6 ;C57BL 6J 19 6 ;BDF1(日本 ) 2 1 4;C3H(日本 ) 14 8;KM 30。c)胚胎冷冻保存复苏 ,出生幼子存活率为 30 %～ 31%。
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关键词
C57BL/6
阳性
激素
复苏
小鼠
存活率
剂量
胚胎冷冻保存
冷冻胚胎
转基因技术
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职称材料
题名
显微注射法制备转基因小鼠的技术研究
被引量：
9
1
作者
鞠丽梅
三好一郎
笠井
憲
雪
蔡有余
机构
中国医学科学院中国协和医科大学实验动物研究所
日车东北大学实验动物部
出处
《中国实验动物学报》
CAS
CSCD
1999年第1期11-15,共5页
基金
国家重点资助项目
文摘
转基因技术是发生工程学或胚胎操作技术中的一部分。这一技术包括有受精卵的采集，受精卵的体外培养，胚胎移植等技术，转基因动物制作是其应用技术之一，它是将外源ＤＮＡ片段用显微注射法直接注入受精卵原核，使外源ＤＮＡ随机整合到寄主基因组中而形成转基因小鼠。我们建立完善这一技术的目的是在实验动物的生产中为转基因动物的生产提供稳定可靠的保证。我们将ｐＣＸＴＧＡＰ、ｐＣＳＬＮ等基因分别注入受精卵原核制备相应的转基因动物模型，并从中总结较佳的操作技术。结果经检测阳性转基因小鼠占出生幼鼠的１６３８％。我们认为不仅要有精细的微注射技术、动物的选用和饲育、严密的胚胎操作都是转基因动物制作成功的重要条件。
关键词
转基因小鼠
原核
胚胎
生产中
受精卵
转基因动物
术中
外源DNA
显微注射法
主基因
Keywords
Foreign DNA Microinjection Transgenic mice Positive rate
分类号
Q78 [生物学—分子生物学]
S814.8 [农业科学—畜牧学]
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职称材料
题名
人ATP7B基因在转基因大鼠的铜代谢通路中的功能分析
2
作者
孟雁
三好一郎
平林真澄
本谷安正
寺田邦彦
上田正次
杉山俊博
笠井
憲
雪
机构
中国医学科学院中国协和医科大学基础医学研究所医学分子生物学国家重点实验室
日本东北大学大学院医学部附属动物实验施设
日本雪印株式会社YS新技术研究所
日本秋田大学医学部生物化学系
出处
《中国比较医学杂志》
CAS
2004年第4期193-199,共7页
文摘
目的 利用转基因大鼠模型 ,研究人Wilson病致病基因ATP7B在铜代谢通路中的功能。方法 将构建的 7 1kb含有鸡 β肌动蛋白启动子的人正常ATP7BcDNA ,经显微注射法导入Wilson病动物模型LEC(long_evanscinnamon)大鼠受精卵的雄性原核。以RT_PCR和Westernblot分析其在转基因大鼠各组织内的表达谱 ;用抗大鼠铜蓝蛋白抗体检测肝细胞全铜蓝蛋白 (holoceruloplasmin)的合成 ;同时对 6～ 30周龄的转基因大鼠血清铜蓝蛋白亚铁氧化酶活性、血清铜浓度、胆汁的铜分泌量、以及肝、肾和脑组织中的铜含量进行分年龄段连续测定和统计学分析。结果 在转基因大鼠体内 ,ATP7B在各种组织中获得广泛表达 ,其中肝和肌肉中的表达水平较高 ,肝细胞恢复了全铜蓝蛋白的合成 ,血清中的铜含量及胆汁的铜排泄量增加 ,肝、肾组织中的铜蓄积减少。结论 完整表达人ATP7B基因产物的转基因大鼠的肝细胞 ,通过CPN介导的铜向血清的分泌和调节铜向胆汁的排泄 ,恢复了ATP7B参与铜转运功能 ,Wilson病的铜蓄积与ATP7B基因的突变直接相关。
关键词
ATP7B
转基因大鼠
铜代谢
血清全铜蓝蛋白
医学实验
Keywords
ATP7B
Holoceruloplasmin
Biliary copper excretion
Transgenic rat
LEC rat
分类号
R-332 [医药卫生]
在线阅读
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职称材料
题名
转基因技术和冷冻胚胎技术的实验数据建立
3
作者
鞠丽梅
蔡有余
顾熟琴
余乃绚
徐凤
华克非
三好一郎
笠井宪雪
机构
中国医学科学院中国协和医科大学实验动物研究所
日本东北大学实验动物部
出处
《中国实验动物学杂志》
2001年第4期232-235,共4页
基金
国家"九五"攻关课题 ( 96 -A2 3-0 6 -0 2 )
文摘
目的 建立一系列转基因技术和冷冻胚胎技术的实验室数据库。方法 a)显微注射法注射 186 4个1-细胞期受精卵 ,注射后存活的 12 83个胚胎进行胚胎移植 ,获得 2 0只阳性转基因动物。b)设计不同单位的激素剂量 (PMSGHCG)获得每个品系的小鼠平均排卵量和最佳激素剂量。c)采用常规法和玻璃化法进行胚胎冷冻保存 ,并就囊胚和桑椹胚两个不同时期进行复苏成活率的比较。结果和讨论 a)建立转基因技术和胚胎冷冻保存的实验数据库 (随着实验技术的不断提高还将不断的完善 )。胚胎显微注射存活率为 6 8 8% ;转基因阳性鼠出生率为16 16 % ;基因整合率为 1 5 6 %。b)激素诱发 5种品系小鼠的平均超排卵数为 :C57BL 6J(日本 ) 15 6 ;C57BL 6J 19 6 ;BDF1(日本 ) 2 1 4;C3H(日本 ) 14 8;KM 30。c)胚胎冷冻保存复苏 ,出生幼子存活率为 30 %～ 31%。
关键词
C57BL/6
阳性
激素
复苏
小鼠
存活率
剂量
胚胎冷冻保存
冷冻胚胎
转基因技术
Keywords
Mice,transgenic
Gene
Embryo,cryopreservation
Superovulation
Databases, factual
分类号
Q78 [生物学—分子生物学]
S823 [农业科学—畜牧学]
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职称材料
题名
作者
出处
发文年
被引量
操作
1
显微注射法制备转基因小鼠的技术研究
鞠丽梅
三好一郎
笠井
憲
雪
蔡有余
《中国实验动物学报》
CAS
CSCD
1999
9
在线阅读
下载PDF
职称材料
2
人ATP7B基因在转基因大鼠的铜代谢通路中的功能分析
孟雁
三好一郎
平林真澄
本谷安正
寺田邦彦
上田正次
杉山俊博
笠井
憲
雪
《中国比较医学杂志》
CAS
2004
0
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下载PDF
职称材料
3
转基因技术和冷冻胚胎技术的实验数据建立
鞠丽梅
蔡有余
顾熟琴
余乃绚
徐凤
华克非
三好一郎
笠井宪雪
《中国实验动物学杂志》
2001
0
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