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题名滇牡丹PdMYB57基因克隆及功能验证
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作者
杜春
平怀磊
刘思淇
李海清
童海珍
王娟
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机构
西南林业大学林学院
西南林业大学生物多样性保护学院
西南林业大学园林园艺学院
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出处
《西北植物学报》
CAS
CSCD
北大核心
2024年第10期1577-1588,共12页
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基金
国家自然科学基金项目(32060089)
云南省重大基础专项“生物资源数字化开发应用”(202002AA100007)
云南省万人计划专项(云发改[2018]212号)。
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文摘
【目的】滇牡丹作为牡丹育种材料,具有丰富的花色资源,研究其MYB转录因子对花色的调控作用可为牡丹花色分子育种工作提供帮助。【方法】以黄色及红色滇牡丹花部组织为材料进行徒手切片,并以其转录组数据为基础进行序列比对,得到1个MYB转录因子编码基因PdMYB57。经基因克隆、系统进化树构建、定量逆转录聚合酶链式反应(qPCR)、瞬时表达及高效液相色谱(HPLC)等验证该基因功能。【结果】PdMYB57基因有1个798 bp的完整开放阅读框,编码265个氨基酸,为亲水性不稳定蛋白;与拟南芥SG6亚族及卵叶牡丹PqMYB113、牡丹PsMYB57/PsMYB58及葡萄VvMYBA1/VvMYBA2等MYB转录因子聚为一簇,具有R2R3保守结构域[R/K]Px[P/A/R]xx[F/Y]基序;其在红色花滇牡丹萼片及黄色花滇牡丹叶片中高表达;其瞬时表达后能使烟草叶片产生紫色,HPLC表明其瞬时表达的烟草叶片中含有矢车菊素3-O-芸香糖苷(Cy3R)。【结论】PdMYB57基因编码1个R2R3-MYB转录因子,其表达具有组织特异性,并能促进植物花青素合成。
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关键词
滇牡丹
PdMYB57
基因克隆
瞬时表达
HPLC
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Keywords
Peaonia delavayi
PdMYB57
gene cloning
transient expression
HPLC
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分类号
Q785
[生物学—分子生物学]
S685.11
[农业科学—观赏园艺]
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题名蒜头果ISSR-PCR反应体系建立及验证
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作者
张鹏远
黄久妍
童海珍
胡博
余潇
雷小铃
王娟
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机构
西南林业大学生命科学学院
西南林业大学绿色发展研究院
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出处
《南方农业学报》
CAS
CSCD
北大核心
2024年第3期834-845,共12页
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基金
云南省重大科技专项(202002AA100007)
云南省生物学质量工程项目(503190106)
云南省万人计划“云岭产业技术领军人才”专项(2018-212)。
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文摘
【目的】建立稳定的蒜头果ISSR-PCR反应体系,筛选出适用于蒜头果的多态性引物,为后续蒜头果遗传多样性研究及种质资源保护提供参考依据。【方法】采用单因素试验与L25(54)正交试验相结合的方法,对影响ISSR-PCR反应体系扩增效果的4个主要因素(模板DNA用量、引物浓度、d NTPs浓度、Taq DNA聚合酶)及反应循环数进行优化,确定最佳反应体系和条件。在此基础上筛选出适用于蒜头果的多态性引物,探究其最佳退火温度,并采集云南省境内3个野生居群10个蒜头果样品对优化的反应体系进行验证。【结果】蒜头果ISSR-PCR最佳反应体系(20.0μL):模板DNA 30 ng,ISSR引物0.3μmol/L,d NTPs 0.250 mmol/L,Taq DNA聚合酶1.00 U,dd H2O补足至20.0μL。ISSR最佳反应程序为30个循环。利用优化后的反应体系筛选出了8条引物(UBC825、UBC826、UBC827、UBC836、UBC844、UBC861、UBC834和UBC851)的最佳退火温度,分别为50.2、56.5、50.2、56.5、50.2、50.2、50.2和54.0℃,部分引物(如UBC827、UBC836、UBC861等)实测最佳退火温度与软件预测退火温度存在明显差异。采用优化后的ISSR-PCR反应体系及引物对10个蒜头果样品进行ISSR-PCR分子标记检测,结果显示建立的ISSR-PCR反应体系稳定可靠,不同采样点的蒜头果在遗传上相对保守,且10个蒜头果样品的遗传分化系数(Gst)为0.74,说明其74%的遗传多样性存在于居群间,且基因流(N_(m))为0.18,远小于1.00,说明发生遗传漂变的概率大,易发生遗传多样性降低及居群分化。【结论】通过优化蒜头果ISSR-PCR反应体系,建立可用于蒜头果ISSR-PCR分子标记扩增的稳定反应体系,可用于蒜头果种质资源保护与利用研究工作。
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关键词
蒜头果
ISSR-PCR
体系优化
验证
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Keywords
Malania oleifera
ISSR-PCR
system optimization
verification
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分类号
S792.99
[农业科学—林木遗传育种]
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