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重组人βNGF在大肠杆菌中的可溶表达、纯化及活性鉴定
被引量：
5
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作者
白羊
章永垒
+7 位作者
邹有土
黄奋飞
陈胜亮
阮卡
葛平辉
马燕玲
王明灶
陈星
《生物技术通报》
CAS
CSCD
北大核心
2016年第11期202-207,共6页
旨在大肠杆菌中可溶表达重组人神经生长因子（Recombinant humanβnerve growth factor,rhβNGF）,并对表达产物进行分离纯化和生物学活性鉴定。成功扩增h NGFβ亚基基因,将其克隆入pMAL-c2X表达载体,构建了hβNGF-MBP的大肠杆菌表达体...
旨在大肠杆菌中可溶表达重组人神经生长因子（Recombinant humanβnerve growth factor,rhβNGF）,并对表达产物进行分离纯化和生物学活性鉴定。成功扩增h NGFβ亚基基因,将其克隆入pMAL-c2X表达载体,构建了hβNGF-MBP的大肠杆菌表达体系并进行诱导表达,表达产物经纯化后以Factor Xa酶切去除麦牙糖结合蛋白（MBP）,Western blot鉴定后以TF-1细胞法检测生物学活性。结果显示,pMAL-c2X-hβNGF经酶切和测序证实构建正确,25℃、180 r/min、0.5 mmol/L IPTG诱导下可溶表达hβNGF-MBP融合蛋白。hβNGF-MBP经Factor Xa酶切后可去除MBP标签,SDS-PAGE分析纯化的hβNGF位于13 k D左右,纯度可达95%。Western blot鉴定为hβNGF,结果表明,比活约为1×10~6 U/mg。在大肠杆菌中成功可溶表达hβNGF,并具有较高的生物学活性。
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关键词
人神经生长因子
大肠杆菌
可溶表达
生物学活性
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题名
重组人βNGF在大肠杆菌中的可溶表达、纯化及活性鉴定
被引量：
5
1
作者
白羊
章永垒
邹有土
黄奋飞
陈胜亮
阮卡
葛平辉
马燕玲
王明灶
陈星
机构
未名生物医药有限公司
出处
《生物技术通报》
CAS
CSCD
北大核心
2016年第11期202-207,共6页
基金
国家"重大新药创制"科技重大专项(2011ZX09401-017)
文摘
旨在大肠杆菌中可溶表达重组人神经生长因子（Recombinant humanβnerve growth factor,rhβNGF）,并对表达产物进行分离纯化和生物学活性鉴定。成功扩增h NGFβ亚基基因,将其克隆入pMAL-c2X表达载体,构建了hβNGF-MBP的大肠杆菌表达体系并进行诱导表达,表达产物经纯化后以Factor Xa酶切去除麦牙糖结合蛋白（MBP）,Western blot鉴定后以TF-1细胞法检测生物学活性。结果显示,pMAL-c2X-hβNGF经酶切和测序证实构建正确,25℃、180 r/min、0.5 mmol/L IPTG诱导下可溶表达hβNGF-MBP融合蛋白。hβNGF-MBP经Factor Xa酶切后可去除MBP标签,SDS-PAGE分析纯化的hβNGF位于13 k D左右,纯度可达95%。Western blot鉴定为hβNGF,结果表明,比活约为1×10~6 U/mg。在大肠杆菌中成功可溶表达hβNGF,并具有较高的生物学活性。
关键词
人神经生长因子
大肠杆菌
可溶表达
生物学活性
Keywords
human nerve growth factor
Escherichia coli
soluble expression
biological activity
分类号
Q78 [生物学—分子生物学]
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题名
作者
出处
发文年
被引量
操作
1
重组人βNGF在大肠杆菌中的可溶表达、纯化及活性鉴定
白羊
章永垒
邹有土
黄奋飞
陈胜亮
阮卡
葛平辉
马燕玲
王明灶
陈星
《生物技术通报》
CAS
CSCD
北大核心
2016
5
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