大规模网络开放课程(MOOCs)对食品科学高等教育的影响与启示

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作者 穆杨 陈芳怡 +2 位作者 郭思宇 龙彬彬 周梦舟 《中国食品》 2024年第6期44-46,共3页

随着信息技术的迅猛发展,大规模网络开放课程(MOOCs,以下简称“慕课”)作为一种新兴的教育模式,迅速在高等教育领域崭露头角。对于食品科学高等教育而言,慕课的影响可能更为深远。在食品工业日益发展、食品安全问题备受关注的今天,食品... 随着信息技术的迅猛发展,大规模网络开放课程(MOOCs,以下简称“慕课”)作为一种新兴的教育模式,迅速在高等教育领域崭露头角。对于食品科学高等教育而言,慕课的影响可能更为深远。在食品工业日益发展、食品安全问题备受关注的今天,食品科学高等教育肩负着培养高素质专业人才的重任,慕课则以其开放性、优质性和广泛性,为食品科学高等教育带来了新的机遇和挑战。本文从多个角度分析了慕课在食品科学领域的应用与启示,并提出了一些针对慕课的教育改革观点,以期为教育工作者提供有益的参考。 展开更多

关键词 大规模网络开放课程 高等教育 食品科学 教育工作者 信息技术 慕课 优质性 影响与启示

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食源性乙二醛毒性和抑制研究进展 被引量：1

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作者 余帆 易弛 +5 位作者 王文悦 樊鑫 朱晓青 肖俊峰 周梦舟 穆杨 《食品与发酵工业》 CAS CSCD 北大核心 2024年第10期353-361,370,共10页

乙二醛(glyoxal,GO)是糖基化过程中产生的活性二羰基,外源性GO来源为食物、饮料和香烟烟雾等,由于其高活性和高毒性而备受关注。在食品的热加工和贮存过程中生成的α-二羰基化合物,进一步增加了人类通过饮食摄入这些化合物以及由此产生... 乙二醛(glyoxal,GO)是糖基化过程中产生的活性二羰基,外源性GO来源为食物、饮料和香烟烟雾等,由于其高活性和高毒性而备受关注。在食品的热加工和贮存过程中生成的α-二羰基化合物,进一步增加了人类通过饮食摄入这些化合物以及由此产生的晚期糖基化终末产物的风险。鉴于GO多重和复杂的毒性作用,深入阐明GO的毒性机制和相关的解毒策略是十分必要的。该文概述了食品中GO的分布、危害和毒性机制,对目前GO抑制剂的抑制机理和应用进行综述,为新型抑制剂开发和应用提供参考。 展开更多

关键词 乙二醛 二羰基化合物 毒性机制 晚期糖基化终末产物 食品应用

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黄原胶和魔芋胶对云片糕风味和品质的影响 被引量：1

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作者 刘孟林 李茜 +7 位作者 王文悦 朱寒剑 朱晓青 肖俊锋 樊鑫 李雷兵 周梦舟 穆杨 《食品研究与开发》 CAS 2024年第13期10-17,共8页

该文通过质构仪、电子舌、电子鼻、核磁等手段研究黄原胶、魔芋胶的添加对云片糕营养成分、理化特性、质构特性的影响。结果表明,与高脂组相比,加胶组脂肪含量和热量减少,晚期糖基化终末产物含量显著降低(P<0.05)。感官鉴定结果显示... 该文通过质构仪、电子舌、电子鼻、核磁等手段研究黄原胶、魔芋胶的添加对云片糕营养成分、理化特性、质构特性的影响。结果表明,与高脂组相比,加胶组脂肪含量和热量减少,晚期糖基化终末产物含量显著降低(P<0.05)。感官鉴定结果显示,加胶组在感官特征上优于低脂组,接近高脂组。电子舌结果显示,加胶组均使云片糕酸味显著降低(P<0.05),涩味显著升高(P<0.05);电子鼻结果显示,黄原胶组总气味优于高脂组、低脂组和魔芋胶组;经储存后,加胶组风味均变化缓慢。核磁共振发现加胶组的深层结合水显著高于高脂组(P<0.05)。扫描电镜结果表明,高脂组和低脂组云片糕内部疏松多孔,而加胶组内部结构细密紧致。脂肪替代物的添加缓解了由脂肪添加量降低而导致的云片糕硬度的降低,并使其质构特性在保存过程中更加稳定。以上结果均表明,黄原胶和魔芋胶加入后可显著降低云片糕的脂肪含量,且能模拟其口感,改善风味,具有工业化应用的潜力。 展开更多

关键词 脂肪替代物 云片糕 晚期糖基化终末产物 质构 风味

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群体感应在发酵食品中的研究进展

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作者 王文悦 余帆 +8 位作者 易弛 张霖 肖柯 樊鑫 肖俊锋 朱晓青 穆杨 汪超 周梦舟 《食品与发酵工业》 CAS CSCD 北大核心 2024年第6期290-299,共10页

微生物在发酵食品中起着重要作用,群体感应作为微生物依赖于细胞密度而调控其生理行为的一种机制,在发酵食品中也应受到关注。近年来有研究表明发酵食品中群体感应的调控与食品品质及风味有着密切的联系。因此,该文综述了群体感应信号... 微生物在发酵食品中起着重要作用,群体感应作为微生物依赖于细胞密度而调控其生理行为的一种机制,在发酵食品中也应受到关注。近年来有研究表明发酵食品中群体感应的调控与食品品质及风味有着密切的联系。因此,该文综述了群体感应信号分子的定义及分类、群体感应对发酵体系中微生物和各种发酵食品的调控作用,最后对群体感应在发酵食品行业中的研究及应用前景进行了总结与展望,以期为发酵食品产业提供新的见解。 展开更多

关键词 群体感应 群体感应信号分子 发酵微生物 发酵食品 调控机制

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甲基乙二醛毒性机制及天然抑制剂的研究进展

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作者 易弛 王文悦 +5 位作者 余帆 樊鑫 朱晓青 肖俊锋 周梦舟 穆杨 《食品研究与开发》 CAS 2024年第9期193-201,共9页

甲基乙二醛(methylglyoxal,MGO)是美拉德反应的中间产物,也是糖酵解的产物。除了人体自身产生的MGO,食品、饮料以及食品加工过程中产生的MGO会在体内积累,MGO积累通常与各种慢性疾病相关,如糖尿病、肾病等。该文从MGO产生及代谢、毒性... 甲基乙二醛(methylglyoxal,MGO)是美拉德反应的中间产物,也是糖酵解的产物。除了人体自身产生的MGO,食品、饮料以及食品加工过程中产生的MGO会在体内积累,MGO积累通常与各种慢性疾病相关,如糖尿病、肾病等。该文从MGO产生及代谢、毒性作用机制、解毒系统的研究现状等方面进行概述,MGO可直接或间接对机体内线粒体、内质网造成损伤,并激活相关信号通路。人体内MGO主要依靠乙二醛酶系统解毒,一些天然化学产物因较高的抗糖基化能力可有效清除外源性MGO,应用于食品体系中提高食品安全性。该文概述天然化学产物清除MGO的研究进展并比较各种天然化学产物抑制MGO机制,以期为开发新的MGO抑制剂提供理论依据。 展开更多

关键词 甲基乙二醛 二羰基化合物 毒性机制 解毒系统 天然化合物MGO抑制剂

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三种佐剂对鸡体液免疫影响的比较 被引量：7

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作者 穆杨 周丽梅 +4 位作者 侯宏虎 吕娟 李楠 李煜隆 黄强力 《动物医学进展》 CSCD 2007年第10期37-39,共3页

佐剂是疫苗的重要组成部分,不同佐剂对体液免疫会产生不同的作用。选择合适的佐剂不仅可以增强疫苗的免疫效果,而且可以提高机体的抵抗力。本试验选用白油佐剂、弗氏佐剂和蜂胶佐剂分别与灭活的新城疫病毒制成疫苗,免疫雏鸡,探讨不同佐... 佐剂是疫苗的重要组成部分,不同佐剂对体液免疫会产生不同的作用。选择合适的佐剂不仅可以增强疫苗的免疫效果,而且可以提高机体的抵抗力。本试验选用白油佐剂、弗氏佐剂和蜂胶佐剂分别与灭活的新城疫病毒制成疫苗,免疫雏鸡,探讨不同佐剂对鸡体液免疫的影响。结果表明,试验组鸡抗体水平高,饲养至61日龄均未发生新城疫,其中弗氏佐剂的效果最好,蜂胶佐剂的效果次之,油佐剂的效果最次。 展开更多

关键词 佐剂 新城疫病毒 体液免疫 鸡

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猪血管内皮细胞体外培养方法的建立 被引量：4

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作者 穆杨 张彦明 《畜牧兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2004年第1期46-49,共4页

实验研究了猪血管内皮细胞体外培养方法并对培养的细胞进行了鉴定。获得了传代培养的猪血管内皮细胞。结果表明:用Ⅰ型胶原酶和胰酶消化分离,均可获得接种量的原代培养物,但Ⅰ型胶原酶消化效果更好;原代或早期传代培养物中有时混入的成... 实验研究了猪血管内皮细胞体外培养方法并对培养的细胞进行了鉴定。获得了传代培养的猪血管内皮细胞。结果表明:用Ⅰ型胶原酶和胰酶消化分离,均可获得接种量的原代培养物,但Ⅰ型胶原酶消化效果更好;原代或早期传代培养物中有时混入的成纤维细胞可用柠檬酸胰酶有效清除。在不用贴附基质和内皮细胞生长因子(ECGF)的条件下,向生长液中加入胰岛素可成功的培养内皮细胞。该细胞在体外培养时贴壁生长,单层细胞呈"铺路石"状排列,细胞间存在接触抑制;第Ⅷ因子相关抗原免疫荧光染色阳性,证明培养的细胞为血管内皮细胞。 展开更多

关键词 猪 血管 内皮细胞 体外培养 分离培养

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人大血管内皮细胞培养条件的完善 被引量：2

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作者 穆杨 丛日华 张彦明 《动物医学进展》 CSCD 2002年第1期82-84,共3页

本研究的目的是确定支持人大血管内皮细胞增殖　的最适培养条件。以人隐静脉内皮　细胞（ＨＳＶＥＣ）和人脐静脉内皮细胞（ＨＵＶＥＣ）为研究对象，研究了基础培养基（１４种）、胎牛血　清（ＦＢＳ）和有丝分裂原（３种）的影响与细... 本研究的目的是确定支持人大血管内皮细胞增殖　的最适培养条件。以人隐静脉内皮　细胞（ＨＳＶＥＣ）和人脐静脉内皮细胞（ＨＵＶＥＣ）为研究对象，研究了基础培养基（１４种）、胎牛血　清（ＦＢＳ）和有丝分裂原（３种）的影响与细胞增殖的关系。另外还测定了几种胞外基质（ＥＣＭ　）包被的培养皿的效果。结果表明，促进细胞增殖最有效的培养基为ＭＣＤＢ１３１。与更常用的Ｍ１　１９培养基相比，ＭＣＤＢ１３１可使细胞增殖提高　２．３倍。与不加血清的培养基相比，培养基中加　入２０％ＦＢＳ可使细胞增殖提高７．５倍。肝素（５０　μｇ／ｍＬ）和内皮细胞生长补充物（ＥＣＧＳ）（５０　μｇ／　ｍＬ）能显著提高细胞增殖。上皮细胞生长因子（ＥＧＦ）不能提高细胞增殖。与生长在用纤　维粘连蛋白，层粘连蛋白，明胶或胶原Ｉ和ＩＶ包被的培养板上的细胞相比，生长在未包被的　培养板上的内皮细胞在增殖和形态方面无统计学差异。ＨＳＶＥＣ和ＨＵＶＥＣ增殖最大的培养条件为　ＭＣＤＢ１３１培养基中加入２　ｍｍｏｌ／Ｌ谷氨酰胺，２０％　ＦＢＳ，５０　μｇ／ｍＬ　肝素和５０　μｇ／ｍＬ　ＥＣＧＳ　。ＥＣＭ包被培养皿无增殖作用。 展开更多

关键词 人血管内皮细胞 培养基 生长因子 细胞外基质 细胞增殖 细胞培养

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马立克氏病病毒的蛋白和疫苗研究进展 被引量：5

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作者 穆杨 张彦明 《动物医学进展》 CSCD 2000年第3期40-42,共3页

马立克氏病是严重危害养鸡业的重要传染病之一 ,对该病的研究可为肿瘤病的研究提供理想模型。本文从病毒编码的蛋白出发 ,重点介绍了病毒的酶类、抗原的研究进展及其在预防马立克氏病上的应用 ,提出利用载体构建重组疫苗对今后防制马立... 马立克氏病是严重危害养鸡业的重要传染病之一 ,对该病的研究可为肿瘤病的研究提供理想模型。本文从病毒编码的蛋白出发 ,重点介绍了病毒的酶类、抗原的研究进展及其在预防马立克氏病上的应用 ,提出利用载体构建重组疫苗对今后防制马立克氏病具有广阔的应用前景。 展开更多

关键词 马立克氏病病毒 蛋白 疫苗

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猪传染性胃肠炎疫苗研究进展 被引量：5

10

作者 穆杨 《动物医学进展》 CSCD 北大核心 2011年第2期91-96,共6页

猪传染性胃肠炎是由猪传染性胃肠炎病毒引起的一种急性、高度接触性肠道传染病,不同年龄和品种的猪均可感染,严重危害着全世界养猪业的健康发展。疫苗接种是防控本病的关键措施之一。常规疫苗在防控猪传染性胃肠炎中发挥了巨大的作用,... 猪传染性胃肠炎是由猪传染性胃肠炎病毒引起的一种急性、高度接触性肠道传染病,不同年龄和品种的猪均可感染,严重危害着全世界养猪业的健康发展。疫苗接种是防控本病的关键措施之一。常规疫苗在防控猪传染性胃肠炎中发挥了巨大的作用,但在某种程度上存在不可避免的缺陷,对根除和消灭传染病带来了严重困难。随着分子生物学技术的不断发展,基因工程疫苗的研究也不断深入,给本病的防控带来了新的思路。论文对猪传染性胃肠炎疫苗的研究进展进行了综述,特别是对亚单位疫苗、核酸疫苗、重组活载体疫苗等基因工程疫苗的研究进行了比较深入的概括。 展开更多

关键词 猪传染性胃肠炎 疫苗 基因工程

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Anne Sexton“灰姑娘”中的消费社会 被引量：5

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作者 穆杨 《山东外语教学》 2006年第5期17-21,共5页

本文透过Baudrillard式的消费社会视角解读美国诗人Ann Sexton根据格林童话创作的诗歌＂灰姑娘＂。这首诗通过对商品意象、物化的女性身体、婚姻市场以及虚伪的幸福结局的描写,揭示了隐藏在格林童话文本＂灰姑娘＂中的物质欲望,也进一... 本文透过Baudrillard式的消费社会视角解读美国诗人Ann Sexton根据格林童话创作的诗歌＂灰姑娘＂。这首诗通过对商品意象、物化的女性身体、婚姻市场以及虚伪的幸福结局的描写,揭示了隐藏在格林童话文本＂灰姑娘＂中的物质欲望,也进一步揭示了在现代消费社会中,商品对人造成的异化和困扰。 展开更多

关键词 ANNE Sexton 商品 消费社会 “灰姑娘” 格林童话 诗歌 美国 诗人 意象 婚姻市场

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细胞内细菌产生紫外光致癌的假说

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作者 穆杨 张彦明 《动物医学进展》 CSCD 2000年第1期58-58,共1页

关键词 细胞内细菌 紫外光 致癌假说 DNA突变

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血管内皮细胞的分离和培养

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作者 穆杨 张彦明 《动物科学与动物医学》 2000年第5期33-36,共4页

血管内皮细胞位于循环血液与血管壁内皮下组织之间 ,是一种多功能的细胞。本文综述了血管内皮细胞分离和培养的方法 ,并对内皮细胞的鉴定及分离和培养中常见因素进行了介绍 。

关键词 血管内皮细胞 分离 培养 VEC

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淫羊藿多糖对雏鸡免疫器官及新城疫疫苗免疫效果的影响 被引量：14

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作者 尚川川 赵毅 +5 位作者 穆杨 梁宁 周丽梅 邱明宁 王晓坤 李楠 《动物医学进展》 CSCD 北大核心 2009年第4期23-26,共4页

疫苗免疫接种是预防和控制传染病的重要措施,而佐剂是疫苗研究的重要组成部分。选择合适的佐剂不仅可以增强疫苗的免疫效果,而且可以提高机体的抵抗力。本研究将50、100、150 g/L等不同浓度的淫羊藿多糖与灭活的鸡新城疫病毒乳化,制备... 疫苗免疫接种是预防和控制传染病的重要措施,而佐剂是疫苗研究的重要组成部分。选择合适的佐剂不仅可以增强疫苗的免疫效果,而且可以提高机体的抵抗力。本研究将50、100、150 g/L等不同浓度的淫羊藿多糖与灭活的鸡新城疫病毒乳化,制备疫苗免疫雏鸡,通过检测抗体效价和免疫器官指数,探讨淫羊藿多糖作为免疫佐剂对鸡免疫功能的影响。结果表明,100 g/L和150 g/L的淫羊藿多糖作为免疫佐剂均可促进抗体的产生,提高脾脏指数,但对法氏囊指数的促进作用不明显。 展开更多

关键词 淫羊藿多糖 新城疫病毒 疫苗 佐剂 鸡

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双管脉冲爆震火箭发动机实验研究 被引量：3

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作者 王可 范玮 +2 位作者 严宇 穆杨 严传俊 《推进技术》 EI CAS CSCD 北大核心 2012年第1期116-120,共5页

为研究双管脉冲爆震火箭发动机共同工作的协同性,以航空煤油和氧气作为燃料和氧化剂,基于双管脉冲爆震火箭发动机系统进行了单管单独工作与双管同时工作的实验,工作频率范围为5～25Hz,对压力和推力的测量结果表明,双管同时工作对单管稳... 为研究双管脉冲爆震火箭发动机共同工作的协同性,以航空煤油和氧气作为燃料和氧化剂,基于双管脉冲爆震火箭发动机系统进行了单管单独工作与双管同时工作的实验,工作频率范围为5～25Hz,对压力和推力的测量结果表明,双管同时工作对单管稳定工作几乎不会产生影响;推力测量数据显示,相同工况下,双管同时工作产生的推力与两单管单独工作产生的推力之和基本相等,无论单管还是双管,在5～15Hz频率范围内,平均推力基本上线性增加,在15～25Hz频率范围内,平均推力增加逐渐趋缓。 展开更多

关键词 脉冲爆震火箭发动机 煤油 氧气 传感器 频率 推力

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GP5^(Δ84-119)稳定表达对猪繁殖与呼吸综合征病毒复制的影响 被引量：3

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作者 王晓红 宋林林 +4 位作者 李亮亮 袁传奇 姜博 周恩民 穆杨 《畜牧兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2016年第2期315-324,共10页

为探讨猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)主要结构蛋白GP5的第二胞外区在病毒复制中的作用及机制,利用PiggyBac Transposon System Vectors构建了表达删除84—119氨基酸残基的截短型GP5的重组质粒(pPBGP5Δ84-119),转染Marc-145细胞通过嘌... 为探讨猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)主要结构蛋白GP5的第二胞外区在病毒复制中的作用及机制,利用PiggyBac Transposon System Vectors构建了表达删除84—119氨基酸残基的截短型GP5的重组质粒(pPBGP5Δ84-119),转染Marc-145细胞通过嘌呤霉素抗性筛选和3次亚克隆,筛选稳定表达GP5Δ84-119的Marc-145细胞系,并利用cck-8试剂盒检测细胞的增殖情况;用PRRSV SD16株感染筛选的细胞,通过病毒基因拷贝数和病毒滴度检测GP5Δ84-119表达对PRRSV复制影响;通过Real-time PCR和ELISA检测病毒感染前后细胞IFN-α、IFN-β、IFN-γ的表达情况。经RT-PCR、Western blot和IFA检测,GP5Δ84-119在Marc-145细胞中获得稳定表达,将此细胞命名为Marc-145-GP5Δ84-119;细胞增殖曲线显示GP5Δ84-119的表达不影响细胞的增殖;对病毒基因拷贝数和病毒滴度检测发现GP5Δ84-119的表达可以抑制PRRSV的复制,这种抑制作用可能是通过上调IFN特别是IFN-β的表达而实现的。研究表明GP5第二胞外区在PRRSV复制中发挥重要作用。 展开更多

关键词 猪繁殖与呼吸综合征病毒 GP5^Δ84-119 稳定表达 复制 干扰素

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脉冲爆震火箭发动机和小推力液体火箭发动机的性能对比分析 被引量：1

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作者 穆杨 范玮 +1 位作者 严宇 严传俊 《空气动力学学报》 EI CSCD 北大核心 2011年第6期697-701,共5页

为了了解脉冲爆震火箭发动机的性能优势,对比了脉冲爆震火箭发动机和小推力液体火箭发动机的推力和比冲,其中脉冲爆震火箭发动机的性能计算采用等容循环计算模型。结果表明:真空状态下,随燃烧室进口温度的升高,比冲增加不大;在推进剂和... 为了了解脉冲爆震火箭发动机的性能优势,对比了脉冲爆震火箭发动机和小推力液体火箭发动机的推力和比冲,其中脉冲爆震火箭发动机的性能计算采用等容循环计算模型。结果表明:真空状态下,随燃烧室进口温度的升高,比冲增加不大;在推进剂和发动机结构尺寸相同的情况下,脉冲爆震火箭发动机产生的推力比小推力液体火箭发动机的多3.0倍至6.8倍,但比冲相当。 展开更多

关键词 脉冲爆震火箭发动机 小推力液体火箭发动机 等容循环模型 性能

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猪传染性胃肠炎病毒陕西分离株S蛋白抗原位点的真核表达 被引量：6

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作者 宋林林 王晓红 +3 位作者 姜博 赵毅 王祥 穆杨 《动物医学进展》 北大核心 2016年第8期6-10,共5页

猪传染性胃肠炎(TGE)是严重危害全世界养猪业健康发展的一种高度传染性病毒病,其病原猪传染性胃肠炎病毒(TGEV)的S蛋白携带有主要的B淋巴细胞识别的抗原决定簇,是诱导机体产生保护性中和抗体的主要抗原。本研究以提取的TGEV陕西分离株... 猪传染性胃肠炎(TGE)是严重危害全世界养猪业健康发展的一种高度传染性病毒病,其病原猪传染性胃肠炎病毒(TGEV)的S蛋白携带有主要的B淋巴细胞识别的抗原决定簇,是诱导机体产生保护性中和抗体的主要抗原。本研究以提取的TGEV陕西分离株感染的ST细胞的RNA为模板,采用RTPCR方法扩增编码S蛋白上包含C、B、D、A 4个抗原位点的基因片段,将目的片段连接到真核表达载体pcDNA3.1/V5-HisB上,构建重组表达载体,转染293T细胞后,通过Western blot检测目的基因的表达。结果成功克隆到编码S蛋白C、B、D、A 4个抗原位点的基因片段,以TGEV阳性猪血清和抗His标签单抗的Western blot结果均显示,目的基因在293T细胞中获得表达。本研究为TEG核酸疫苗的研制奠定了基础。 展开更多

关键词 猪传染性胃肠炎病毒 S基因 抗原位点 真核表达

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猪繁殖与呼吸综合征核酸疫苗研究进展 被引量：4

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作者 李亮亮 张雪梅 +2 位作者 汤小龙 周恩民 穆杨 《动物医学进展》 CSCD 北大核心 2014年第3期87-91,共5页

猪繁殖与呼吸综合征(PRRS)是由猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)引起的一种严重危害养猪业的病毒性传染病,该病每年给全球养猪业造成巨大的经济损失。目前用于防控该病最有效的方法是疫苗接种,由于传统疫苗存在一些不足之处,对于根除该病... 猪繁殖与呼吸综合征(PRRS)是由猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)引起的一种严重危害养猪业的病毒性传染病,该病每年给全球养猪业造成巨大的经济损失。目前用于防控该病最有效的方法是疫苗接种,由于传统疫苗存在一些不足之处,对于根除该病仍然存在较大难度。核酸疫苗作为一种新型疫苗,不仅能诱导机体产生体液免疫应答和细胞免疫应答,而且具有较多优点。论文主要就猪繁殖与呼吸综合征核酸疫苗的作用机制、优缺点,以及研究现状进行简要综述,以期为PRRS核酸疫苗研究和该病的防控提供参考。 展开更多

关键词 猪繁殖与呼吸综合征 核酸疫苗 预防

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干扰和稳定表达GP5对猪繁殖与呼吸综合征病毒感染早期复制的影响 被引量：1

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作者 宋林林 贾存瑜 +2 位作者 韩熙梦 周恩民 穆杨 《畜牧兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2018年第6期1231-1240,共10页

为探讨猪繁殖与呼吸综合征病毒(porcine reproductive and respiratory syndrome virus,PRRSV)主要结构蛋白GP5对病毒复制的影响及其机制,利用PiggyBac Transposon载体系统构建表达GP5的重组质粒(pPB-GP5),转染Marc-145细胞通过嘌呤霉... 为探讨猪繁殖与呼吸综合征病毒(porcine reproductive and respiratory syndrome virus,PRRSV)主要结构蛋白GP5对病毒复制的影响及其机制,利用PiggyBac Transposon载体系统构建表达GP5的重组质粒(pPB-GP5),转染Marc-145细胞通过嘌呤霉素抗性筛选和3次亚克隆,获得稳定表达GP5的Marc-145细胞,在确定GP5表达不影响细胞增殖的基础上,用PRRSV感染筛选的细胞,通过N基因拷贝数、N蛋白表达水平和病毒滴度检测确定GP5表达对病毒复制的影响,并采用ELISA方法检测培养上清中IFN-α、IFN-β、IFN-γ的水平;进一步针对PRRSV ORF5编码区设计合成3对特异性siRNA,转染Marc-145细胞6和12h后以0.1 MOI病毒感染细胞,感染后24h收集细胞,采用荧光定量PCR(qPCR)检测GP5mRNA的表达,采用Western blot检测PRRSV N蛋白的表达。结果显示:经RT-PCR、Western blot和IFA检测,确定GP5在Marc-145细胞中获得稳定表达,且不影响细胞增殖,但可以在感染早期促进PRRSV在细胞中的复制,这种促进作用可能是通过下调IFN的表达发挥的;与阴性对照siRNA相比,3对特异性siRNA均能抑制PRRSV复制,其中100nmol·L^(-1)的siRNA GP5-471的抑制效果最好。研究表明GP5在PRRSV复制中发挥着重要作用。 展开更多

关键词 猪繁殖与呼吸综合征病毒 GP5 小干扰RNA 稳定表达 干扰素

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