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题名羊草钙依赖型蛋白激酶基因生物信息学及表达特性分析
被引量：8
- 1
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作者
崔喜艳
张继伟
秦思余
刘忠野
郭继勋
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机构
吉林农业大学生命科学学院
东北师范大学附属中学
东北师范大学草地研究所/植被生态科学教育部重点实验室
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出处
《中国草地学报》
CSCD
北大核心
2015年第3期11-18,共8页
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基金
国家自然科学基金(30570273)
吉林省教育厅项目(吉教科合字〔2009〕第61号)
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文摘
为了研究钙依赖型蛋白激酶(CDPK)在羊草适应生境中的功能,分别对羊草幼苗进行模拟干旱(PEG)和盐碱(NaCl-Na2CO3)处理,测序分析了羊草中克隆的CDPK基因cDNA(LcCDPK),其核酸序列全长为1704bp,开放阅读框为1647bp,共编码548个氨基酸,编码的氨基酸序列与GenBank中小麦CDPK1基因的同源性最高,氨基酸一致性为96%。用软件对其蛋白质氨基酸组成及结构分析,氨基酸序列构成具有丝氨酸/苏氨酸蛋白激酶催化活性的S-TKc结构域,有4个保守的EF手性结构域,为Ca2+结合位点,预测的成熟肽相对分子质量61.349KDa,理论等电点5.34;二级结构预测α-螺旋占37.59%,β-折叠占9.85%,而无规则卷曲占52.55%;实时荧光定量PCR结果分析表明,在低浓度PEG、盐碱处理条件下羊草根及叶片的CDPK基因表达下调,高浓度处理条件下CDPK基因表达上调,说明CDPK基因表达受干旱及盐碱胁迫调控;盐碱处理条件下CDPK基因在根和叶片中的表达均高于干旱处理。推测LcCDPK广泛参与羊草抵御逆境胁迫的响应,尤其在盐碱胁迫过程中发挥重要作用。
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关键词
羊草
CDPK基因
生物信息学
基因表达
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Keywords
Leymus chinensis
CDPK gene
Bioinformatics
Gene expression
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分类号
Q943.2
[生物学—植物学]
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题名羊草CDPK基因全长cDNA的克隆及原核表达
被引量：3
- 2
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作者
崔喜艳
秦思余
刘忠野
高瑜
蒋载阳
郭继勋
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机构
吉林农业大学生命科学学院
东北师范大学草地研究所/植被生态科学教育部重点实验室
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出处
《华南农业大学学报》
CAS
CSCD
北大核心
2015年第4期123-128,共6页
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基金
国家自然科学基金(30570273)
吉林省自然科学基金(201215178)
吉林农业大学本科生科技创新基金
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文摘
【目的】通过对羊草Leymus chinensis CDPK基因进行克隆及原核表达,为进一步研究CDPK基因的功能,探讨羊草适应生境分子机制提供理论基础.【方法】用RT-PCR结合RACE技术克隆了羊草钙依赖蛋白激酶（CDPK）基因,命名为Lc-CDPK;构建了羊草CDPK基因的原核表达载体,转化到大肠埃希菌Escherichia coli BL21（DE3）,异丙基硫代半乳糖苷（IPTG）诱导后,经SDS-PAGE分析CDPK蛋白的表达情况.【结果和结论】羊草CDPK基因全长c DNA序列为1 704 bp,包括1个1 647 bp的开放阅读框,编码548个氨基酸,从第81~339个氨基酸构成了具有丝氨酸/苏氨酸蛋白激酶催化活性的S-TKc结构域,有4个保守的EF手型结构域;编码区核苷酸序列与其他禾本科作物比对后发现,与小麦CDPK基因的相似性最高,相似度为96%;IPTG诱导表达出相对分子质量为61 350的融合蛋白,表达产物大小与预计理论值相符.诱导7 h蛋白表达量最高,表达量占菌体总蛋白的49.1%.
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关键词
羊草
CDPK基因
基因克隆
原核表达
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Keywords
Leymus chinensis
CDPK gene
gene cloning
prokaryotic expression
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分类号
S513.035.2
[农业科学—作物学]
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