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齐留通对大鼠心肌缺血再灌注炎症损伤的抑制作用观察
被引量：
7
1
作者
秦华迪
秦春常
+2 位作者
张海涛
于雪婧
常静
《解放军医学杂志》
CAS
CSCD
北大核心
2014年第3期192-196,共5页
目的探讨5-脂氧合酶(5-LO)选择性抑制剂齐留通(zileuton)对缺血再灌注心肌的保护作用及其可能机制。方法健康成年雌性SD大鼠30只,随机分为假手术组(S组,n=10)、缺血再灌注组(I/R组,n=10)、齐留通组(Z组,n=10),采用结扎前降支造成缺血45...
目的探讨5-脂氧合酶(5-LO)选择性抑制剂齐留通(zileuton)对缺血再灌注心肌的保护作用及其可能机制。方法健康成年雌性SD大鼠30只,随机分为假手术组(S组,n=10)、缺血再灌注组(I/R组,n=10)、齐留通组(Z组,n=10),采用结扎前降支造成缺血45min、松开结扎线灌注120min的方法建立缺血再灌注模型。Z组于手术前15min给予3mg/kg齐留通。再灌注结束后处死动物,HE染色观察心肌的病理损伤情况,TUNEL法检测心肌细胞凋亡率,ELISA法检测血浆中白三烯B4(LTB4)、IL-1β、TNF-α的含量,Western blotting和免疫荧光法检测中性粒细胞中的5-LO分布变化。结果与I/R组比较,齐留通处理可以明显减轻缺血再灌注所致的心肌病理损伤,降低心肌细胞凋亡率,降低血浆中炎症因子LTB4、IL-1β和TNF-α的水平,抑制5-LO的激活转位,差异有统计学意义(P<0.05),但各组5-LO表达总量无明显差异(P>0.05)。结论齐留通对缺血再灌注心肌具有一定的保护作用,其机制可能与抑制5-LO转位激活,进而减轻炎症损伤、抑制心肌凋亡有关。
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关键词
齐留通
花生四烯酸盐5-脂氧合酶
心肌再灌注损伤
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职称材料
miRNA-144抑制小鼠RAW264.7巨噬细胞ABCA1表达
2
作者
于雪婧
尚伟
+3 位作者
杨向贵
秦华迪
于军
周建中
《细胞与分子免疫学杂志》
CAS
CSCD
北大核心
2014年第9期951-955,共5页
目的构建miR-144真核表达载体,检测miR-144是否调控小鼠RAW264.7巨噬细胞三磷酸腺苷结合盒转运体A1(ABCA1)的表达。方法结合文献,通过预测软件分析,选取评分较高、可作用于ABCA1 mRNA 3'非编码区(ABCA1 mRNA3'UTR)的miR-144。...
目的构建miR-144真核表达载体,检测miR-144是否调控小鼠RAW264.7巨噬细胞三磷酸腺苷结合盒转运体A1(ABCA1)的表达。方法结合文献,通过预测软件分析,选取评分较高、可作用于ABCA1 mRNA 3'非编码区(ABCA1 mRNA3'UTR)的miR-144。通过分子克隆技术,利用PCR扩增miR-144和ABCA1 mRNA 3'UTR的DNA序列,酶切胶回收后,分别连接至真核表达载体pcDNA3.1(+)载体和pcDNA3.1(+)-luciferase载体上。测序后,运用双荧光素酶报告基因系统检测萤火虫荧光素酶的活性,观察miR-144是否对ABCA1 mRNA 3'UTR具有直接靶向作用。运用LipofectamineTM2000将pcDNA3.1(+)空载体、pcDNA3.1(+)-miR-144转染至小鼠RAW264.7巨噬细胞。通过实时定量PCR(qRT-PCR)检测转染后miR-144的表达含量。通过qRT-PCR和Western blot法检测过表达miR-144后ABCA1在mRNA和蛋白水平的变化。结果 miR-144 PCR产物连接至pcDNA3.1(+)载体上,ABCA1 mRNA 3'UTR连接至pcDNA3.1(+)-luciferase载体上,测序正确。运用双荧光素酶报告基因系统检测发现,和对照组[pcDNA3.1(+)空载体、pcDNA3.1(+)-luciferase-ABCA1 3'UTR和PRL-SV40联合转染]三者相比,实验组[pcDNA3.1(+)-miR144、pcDNA3.1(+)-luciferase-ABCA1 3'UTR和PRL-SV40联合转染]三者可以显著降低萤火虫荧光素酶的活性(P<0.05),证明miR-144对ABCA1 mRNA3'UTR具有直接靶向作用。将pcDNA3.1(+)空载体、pcDNA3.1(+)-miR-144转染至小鼠RAW264.7细胞中,qRT-PCR结果显示,转染pcDNA3.1(+)空载体组miR-144表达无明显变化(P>0.05);转染pcDNA3.1(+)-miR-144组中miR-144表达量显著增高(P<0.01).qRT-PCR结果显示,转染pcDNA3.1(+)空载体和pcDNA3.1(+)-miR-144对ABCA1 mRNA表达水平无明显影响(P>0.05),Western blot结果显示转染pcDNA3.1(+)-miR-144可以显著降低ABCA1蛋白水平的表达(P<0.01)。结论 miR-144可以在转录后水平降低ABCA1蛋白的表达。
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关键词
miR-144
三磷酸腺苷结合盒转运体A1
巨噬细胞
RAW264.7细胞
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职称材料
题名
齐留通对大鼠心肌缺血再灌注炎症损伤的抑制作用观察
被引量：
7
1
作者
秦华迪
秦春常
张海涛
于雪婧
常静
机构
重庆重庆医科大学附属第一医院心内科
出处
《解放军医学杂志》
CAS
CSCD
北大核心
2014年第3期192-196,共5页
基金
国家自然科学基金(30900606)~~
文摘
目的探讨5-脂氧合酶(5-LO)选择性抑制剂齐留通(zileuton)对缺血再灌注心肌的保护作用及其可能机制。方法健康成年雌性SD大鼠30只,随机分为假手术组(S组,n=10)、缺血再灌注组(I/R组,n=10)、齐留通组(Z组,n=10),采用结扎前降支造成缺血45min、松开结扎线灌注120min的方法建立缺血再灌注模型。Z组于手术前15min给予3mg/kg齐留通。再灌注结束后处死动物,HE染色观察心肌的病理损伤情况,TUNEL法检测心肌细胞凋亡率,ELISA法检测血浆中白三烯B4(LTB4)、IL-1β、TNF-α的含量,Western blotting和免疫荧光法检测中性粒细胞中的5-LO分布变化。结果与I/R组比较,齐留通处理可以明显减轻缺血再灌注所致的心肌病理损伤,降低心肌细胞凋亡率,降低血浆中炎症因子LTB4、IL-1β和TNF-α的水平,抑制5-LO的激活转位,差异有统计学意义(P<0.05),但各组5-LO表达总量无明显差异(P>0.05)。结论齐留通对缺血再灌注心肌具有一定的保护作用,其机制可能与抑制5-LO转位激活,进而减轻炎症损伤、抑制心肌凋亡有关。
关键词
齐留通
花生四烯酸盐5-脂氧合酶
心肌再灌注损伤
Keywords
zileuton
arachidonate S-lipoxygenase myocardial reperfusion iniury
分类号
R542.2 [医药卫生—心血管疾病]
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职称材料
题名
miRNA-144抑制小鼠RAW264.7巨噬细胞ABCA1表达
2
作者
于雪婧
尚伟
杨向贵
秦华迪
于军
周建中
机构
重庆医科大学附属第一医院心血管内科
青海民族大学化学与生命科学学院
出处
《细胞与分子免疫学杂志》
CAS
CSCD
北大核心
2014年第9期951-955,共5页
基金
重庆医科大学研究生课题经费(2012-2013年)
国家临床重点专科建设项目(2011年)
文摘
目的构建miR-144真核表达载体,检测miR-144是否调控小鼠RAW264.7巨噬细胞三磷酸腺苷结合盒转运体A1(ABCA1)的表达。方法结合文献,通过预测软件分析,选取评分较高、可作用于ABCA1 mRNA 3'非编码区(ABCA1 mRNA3'UTR)的miR-144。通过分子克隆技术,利用PCR扩增miR-144和ABCA1 mRNA 3'UTR的DNA序列,酶切胶回收后,分别连接至真核表达载体pcDNA3.1(+)载体和pcDNA3.1(+)-luciferase载体上。测序后,运用双荧光素酶报告基因系统检测萤火虫荧光素酶的活性,观察miR-144是否对ABCA1 mRNA 3'UTR具有直接靶向作用。运用LipofectamineTM2000将pcDNA3.1(+)空载体、pcDNA3.1(+)-miR-144转染至小鼠RAW264.7巨噬细胞。通过实时定量PCR(qRT-PCR)检测转染后miR-144的表达含量。通过qRT-PCR和Western blot法检测过表达miR-144后ABCA1在mRNA和蛋白水平的变化。结果 miR-144 PCR产物连接至pcDNA3.1(+)载体上,ABCA1 mRNA 3'UTR连接至pcDNA3.1(+)-luciferase载体上,测序正确。运用双荧光素酶报告基因系统检测发现,和对照组[pcDNA3.1(+)空载体、pcDNA3.1(+)-luciferase-ABCA1 3'UTR和PRL-SV40联合转染]三者相比,实验组[pcDNA3.1(+)-miR144、pcDNA3.1(+)-luciferase-ABCA1 3'UTR和PRL-SV40联合转染]三者可以显著降低萤火虫荧光素酶的活性(P<0.05),证明miR-144对ABCA1 mRNA3'UTR具有直接靶向作用。将pcDNA3.1(+)空载体、pcDNA3.1(+)-miR-144转染至小鼠RAW264.7细胞中,qRT-PCR结果显示,转染pcDNA3.1(+)空载体组miR-144表达无明显变化(P>0.05);转染pcDNA3.1(+)-miR-144组中miR-144表达量显著增高(P<0.01).qRT-PCR结果显示,转染pcDNA3.1(+)空载体和pcDNA3.1(+)-miR-144对ABCA1 mRNA表达水平无明显影响(P>0.05),Western blot结果显示转染pcDNA3.1(+)-miR-144可以显著降低ABCA1蛋白水平的表达(P<0.01)。结论 miR-144可以在转录后水平降低ABCA1蛋白的表达。
关键词
miR-144
三磷酸腺苷结合盒转运体A1
巨噬细胞
RAW264.7细胞
分类号
Q782 [生物学—分子生物学]
R392-33 [医药卫生—免疫学]
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职称材料
题名
作者
出处
发文年
被引量
操作
1
齐留通对大鼠心肌缺血再灌注炎症损伤的抑制作用观察
秦华迪
秦春常
张海涛
于雪婧
常静
《解放军医学杂志》
CAS
CSCD
北大核心
2014
7
在线阅读
下载PDF
职称材料
2
miRNA-144抑制小鼠RAW264.7巨噬细胞ABCA1表达
于雪婧
尚伟
杨向贵
秦华迪
于军
周建中
《细胞与分子免疫学杂志》
CAS
CSCD
北大核心
2014
0
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