分子信标荧光定量PCR检测H3N2亚型猪流感病毒方法的建立 被引量：2

1

作者 禹思宇 周宇 +3 位作者 唐连飞 孟芳 袁晓芬 梁斌 《中国动物检疫》 CAS 2015年第7期67-71,76,共6页

利用新型荧光探针—分子信标,建立一种检测猪流感病毒的新方法。根据H3N2亚型猪流感病毒(SIV)的HA和NA基因的保守基因序列,分别设计并合成了特异性引物和分子信标探针,利用实时荧光定量PCR技术检测H3N2亚型SIV。构建重组质粒p SK-H3和p ... 利用新型荧光探针—分子信标,建立一种检测猪流感病毒的新方法。根据H3N2亚型猪流感病毒(SIV)的HA和NA基因的保守基因序列,分别设计并合成了特异性引物和分子信标探针,利用实时荧光定量PCR技术检测H3N2亚型SIV。构建重组质粒p SK-H3和p SK-N2并绘制标准曲线。结果显示,该检测方法的敏感性达到102拷贝/μL;与其它主要相关病毒均不发生交叉反应,批内和批间试验的重复性变异系数(CV)均小于3%,表明该方法灵敏度强、特异性好。此方法的建立将为流感病毒H3N2亚型定型检测提供一种快速有效的方法。 展开更多

关键词 猪流感病毒 H3N2亚型 分子信标探针 实时荧光定量PCR

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湖南省规模化猪场H1N1猪流感流行病学调查 被引量：7

2

作者 禹思宇 易征璇 +3 位作者 孟芳 欧阳振宇 唐连飞 朱中武 《湖南农业科学》 2011年第3期126-128,共3页

为了解H1N1猪流感(SIV)在湖南省规模化猪场中感染和流行情况,2010年6月采用间接ELISA和实时荧光RT-PCR对1 065份猪血清、16 796份猪棉拭子和360份肺脏样品进行检测。结果显示,SIV H1N1抗体阳性率达37.84%,猪场阳性率达100%;H1N1猪流感... 为了解H1N1猪流感(SIV)在湖南省规模化猪场中感染和流行情况,2010年6月采用间接ELISA和实时荧光RT-PCR对1 065份猪血清、16 796份猪棉拭子和360份肺脏样品进行检测。结果显示,SIV H1N1抗体阳性率达37.84%,猪场阳性率达100%;H1N1猪流感病毒抗原阳性率为0.12%,SIV在湖南的流行情况有着明显的区域性差异。 展开更多

关键词 H1N1猪流感病毒 ELISA 实时荧光RT-PCR 流行病学调查

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组蛋白去乙酰化酶参与畜禽病毒感染的作用及机制 被引量：1

3

作者 谭磊 彭小烨 +3 位作者 王开心 黄小久 张帆 禹思宇 《中国畜牧兽医》 CAS CSCD 北大核心 2024年第3期1259-1266,共8页

畜禽在养殖过程中易受病毒感染,给养殖业造成严重的经济损失,其中部分畜禽病毒(如乙脑病毒和口蹄疫病毒)属于人兽共患性病原,对养殖工作人员及消费者健康也可造成潜在威胁。因此,防控畜禽病毒不仅可减少养殖业经济损失,同时对保障公共... 畜禽在养殖过程中易受病毒感染,给养殖业造成严重的经济损失,其中部分畜禽病毒(如乙脑病毒和口蹄疫病毒)属于人兽共患性病原,对养殖工作人员及消费者健康也可造成潜在威胁。因此,防控畜禽病毒不仅可减少养殖业经济损失,同时对保障公共健康也十分重要。组蛋白去乙酰化酶(histone deacetylase,HDACs)属于表观遗传修饰酶,可通过调控组蛋白乙酰化过程影响基因表达,继而参与多种生命活动过程。大量研究表明,HDACs可通过与病毒蛋白互作或影响细胞相关信号通路来参与多种畜禽病毒感染过程,且HDACs抑制剂处理可抑制部分病毒(如伪狂犬病病毒和马立克病毒)复制,提示HDACs可作为抗畜禽病毒感染的广谱抗病毒药物靶点。因此,深入了解HDACs参与畜禽病毒感染的过程对防控畜禽病毒感染具有重要意义。作者简要介绍了HDACs及其抑制剂,重点综述了HDACs参与畜禽病毒感染的作用及机制,为深入研究HDACs调控畜禽病毒感染提供参考,为开发新型抗病毒药物提供科学指导。 展开更多

关键词 组蛋白去乙酰化酶(HDACs) 抑制剂 畜禽病毒感染 作用及机制

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PRRSV广东变异株分离及NSP2部分序列分析 被引量：6

4

作者 黄元 禹思宇 +1 位作者 宣华 向华 《动物医学进展》 CSCD 北大核心 2011年第3期26-31,共6页

2006年以来,高致病性猪繁殖与呼吸综合征在我国造成了巨大的经济损失。位于NSP2基因上的30个氨基酸的缺失已成为区分我国2006年以来的PRRSV高致病性毒株和2005年以前的经典流行毒株的特异性标记。本试验在广东省分离到一个新型的PRRSV毒... 2006年以来,高致病性猪繁殖与呼吸综合征在我国造成了巨大的经济损失。位于NSP2基因上的30个氨基酸的缺失已成为区分我国2006年以来的PRRSV高致病性毒株和2005年以前的经典流行毒株的特异性标记。本试验在广东省分离到一个新型的PRRSV毒株BL2,其NSP2基因540位-563位（相对于VR2332 ORF1a）发生24个氨基酸序列的缺失,该缺失位于高致病性株的缺失区域内,但缺失长度小于高致病性株。国内外文献未曾报道过类似的突变。以NSP2部分序列构建系统进化树表明,与该毒株同源性最高的是我国2005年分离的经典毒株SHB（91.5%）,同时该毒株与我国2006年后流行的高致病性毒株也有较高的同源性（89.9%-91.3%）。动物回归试验表明,该毒株显示高致病性。 展开更多

关键词 猪繁殖与呼吸综合征 新型变异株 NSP2 序列分析

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猪博卡病毒的基因分型 被引量：6

5

作者 周宇 唐连飞 +7 位作者 朱事康 朱中武 佟铁铸 禹思宇 林志雄 刘星 陈燕忠 罗卓军 《中国动物检疫》 CAS 2015年第2期63-68,共6页

为了解猪博卡病毒(PBoV)的遗传进化规律,研究可行的PBoV基因分型方法,本研究利用Gen Bank中登录的29条PBoV和2条本实验室测得的全基因组序列信息,采用生物信息学软件进行基因组序列分析。结果显示,分别以NS1基因、NP1基因和VP1基因编码... 为了解猪博卡病毒(PBoV)的遗传进化规律,研究可行的PBoV基因分型方法,本研究利用Gen Bank中登录的29条PBoV和2条本实验室测得的全基因组序列信息,采用生物信息学软件进行基因组序列分析。结果显示,分别以NS1基因、NP1基因和VP1基因编码氨基酸构建的系统进化树,PBoV均被划分为3个基因群,但三种氨基酸序列绘制的进化树存在差异;基因群内各病毒株的氨基酸序列同源性较高,而各基因群之间病毒株的氨基酸序列同源性非常低,基因组结构差异较大。 展开更多

关键词 猪博卡病毒 遗传进化分析 基因分型

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数字RT-PCR技术检测H3N2亚型猪流感病毒方法的建立 被引量：3

6

作者 唐连飞 禹思宇 周宇 《中国畜牧兽医》 CAS 北大核心 2017年第6期1847-1853,共7页

试验旨在利用新型荧光探针——分子信标,建立一种检测猪流感病毒的新方法。根据H3N2亚型猪流感病毒(swine influenza virus,SIV)的H3和N2基因的保守基因序列,分别设计并合成了特异性引物和分子信标探针,利用数字RT-PCR技术检测H3N2亚型... 试验旨在利用新型荧光探针——分子信标,建立一种检测猪流感病毒的新方法。根据H3N2亚型猪流感病毒(swine influenza virus,SIV)的H3和N2基因的保守基因序列,分别设计并合成了特异性引物和分子信标探针,利用数字RT-PCR技术检测H3N2亚型SIV。结果显示,该数字RT-PCR检测方法与其他主要相关病毒均不发生交叉反应,重复性良好;对猪H3N2流感病毒而言,最低可检测到106倍稀释的病毒株。数字RT-PCR方法能够对RNA模板定量分析。在H3N2SIV的鉴定上,数字RT-PCR方法较实时荧光定量PCR方法更灵敏、准确。 展开更多

关键词 猪流感病毒 H3N2亚型 分子信标探针 数字RT-PCR 实时荧光定量PCR 灵敏性 特异性 重复性

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H1N1猪流感病毒血凝素蛋白抗原表位的筛选及其抗原性分析 被引量：2

7

作者 唐连飞 易征璇 +6 位作者 朱中武 朱金国 陈盼 孟芳 禹思宇 欧阳振宇 姜金林 《中国畜牧兽医》 CAS 北大核心 2011年第9期190-193,共4页

本研究旨在对H1N1猪流感病毒血凝素蛋白抗原分子的模拟表位进行分离鉴定并分析其抗原性。用抗H1N1猪流感病毒血凝素蛋白小鼠血清IgG对噬菌体随机12肽库进行筛选,3轮亲和筛选后,特异性噬菌体得到了有效富集;对随机挑选的47个噬菌体克隆用... 本研究旨在对H1N1猪流感病毒血凝素蛋白抗原分子的模拟表位进行分离鉴定并分析其抗原性。用抗H1N1猪流感病毒血凝素蛋白小鼠血清IgG对噬菌体随机12肽库进行筛选,3轮亲和筛选后,特异性噬菌体得到了有效富集;对随机挑选的47个噬菌体克隆用ELISA进行鉴定,其中40个为阳性;对40个阳性克隆测序得到3种不同氨基酸序列;用Westernblotting对获得的3个不同序列的噬菌体克隆进行抗原性分析,显示这3种噬菌体插入短肽能和H1N1猪流感病毒感染小鼠血清特异性结合。结果表明,本试验获得了3种H1N1猪流感病毒血凝素蛋白模拟抗原表位,它们都具有明显的抗原性,为H1N1猪流感病毒的疫苗研究和诊断奠定了基础。 展开更多

关键词 噬菌体肽库 抗原表位 猪流感病毒 血凝素蛋白

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猪瘟病毒广东流行毒株遗传分型及序列分析 被引量：4

8

作者 李儒曙 苏惠龙 +4 位作者 杨傲冰 禹思宇 黄岩 向华 张健騑 《中国动物检疫》 CAS 2011年第10期27-31,共5页

2006年至2009年期间,从广东省各地采集病、死猪的脾脏、淋巴结、或扁桃体,用RT-PCR的方法扩增猪瘟病毒的E2全基因,用国际通用的进化分析软件对这6株病毒进行遗传分型,结果显示这6株猪瘟野毒均属于基因2.1亚群。推测广东省猪瘟病毒流行... 2006年至2009年期间,从广东省各地采集病、死猪的脾脏、淋巴结、或扁桃体,用RT-PCR的方法扩增猪瘟病毒的E2全基因,用国际通用的进化分析软件对这6株病毒进行遗传分型,结果显示这6株猪瘟野毒均属于基因2.1亚群。推测广东省猪瘟病毒流行毒株目前主要以2.1亚群为主。 展开更多

关键词 猪瘟病毒 遗传分型 序列分析

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鼠呼肠孤病毒3型荧光定量RT-PCR检测方法的建立

9

作者 禹思宇 周智君 +2 位作者 谭建锡 胡忆文 唐连飞 《湖南畜牧兽医》 2020年第2期37-40,共4页

根据呼肠孤病毒3型(Reo3)M1基因序列保守区设计一对特异性引物,作者建立了一种快速、敏感、特异的实时荧光定量RT-PCR检测方法,并对该方法的特异性、敏感性和重复性进行了评价试验。试验结果显示,标准品浓度在1.0×10^2~1.0×10... 根据呼肠孤病毒3型(Reo3)M1基因序列保守区设计一对特异性引物,作者建立了一种快速、敏感、特异的实时荧光定量RT-PCR检测方法,并对该方法的特异性、敏感性和重复性进行了评价试验。试验结果显示,标准品浓度在1.0×10^2~1.0×10^10copy/μL之间时,其浓度的对数值与荧光定量R T-PCR实验中的Ct值之间有良好的线性相关性(相关系数R^2=0.9990),且该标准品检出限为1.0×10^2个copy/μL。特异性方面,该方法除对Reo3有扩增反应外,对其它相关病毒均无扩增反应,引物具有良好的特异性。同时,该方法实验间的变异系数为0.54%~1.04%之间,均小于2%,表明该方法扩增稳定性高、重复性强。以上研究结果表明,此研究检测方法建立的Reo3荧光R T-PCR检测方法特异、敏感、稳定,可用于实验动物中Reo3的监测以及流行病学研究。 展开更多

关键词 呼肠孤病毒3型 实时荧光定量RT-PCR方法 M1基因

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H1亚型猪流感病毒微滴数字RT-PCR定量检测方法的建立 被引量：7

10

作者 谭建锡 禹思宇 +3 位作者 唐连飞 胡忆文 白雪 侯义宏 《中国动物检疫》 CAS 2019年第11期77-82,共6页

本研究针对H1亚型猪流感病毒(swineinfluenzavirus,SIV)HA基因保守序列设计引物和探针,通过反应条件优化,建立了一种快速、准确检测H1亚型SIV的微滴数字RT-PCR定量方法。该方法特异性强,除H1亚型SIV外,H3、H5、H7亚型SIV以及猪瘟病毒、... 本研究针对H1亚型猪流感病毒(swineinfluenzavirus,SIV)HA基因保守序列设计引物和探针,通过反应条件优化,建立了一种快速、准确检测H1亚型SIV的微滴数字RT-PCR定量方法。该方法特异性强,除H1亚型SIV外,H3、H5、H7亚型SIV以及猪瘟病毒、猪繁殖与呼吸综合征病毒等检测均为阴性;敏感性高,最低可检测4.7拷贝/μL;重复性好,对5个不同稀释度的H1亚型SIVRNA进行3次重复试验,每个稀释度的变异系数均小于5%。利用该方法对湖南省规模化养殖场收集的30份猪鼻拭子样品进行检测,发现与荧光RT-PCR检测结果一致。试验表明,该方法快速、准确、灵敏,可为H1亚型SIV的快速筛查及流行病学研究提供可靠的技术保障。 展开更多

关键词 H1亚型猪流感病毒 微滴数字RT-PCR 绝对定量 检测方法

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功能化核酸适体检测氯霉素可行性研究 被引量：3

11

作者 陈盼 禹思宇 +2 位作者 胡忆文 唐连飞 谭建锡 《食品安全质量检测学报》 CAS 2020年第1期179-183,共5页

目的探讨荧光适体探针用于氯霉素快速检测的可行性。方法设计了一种荧光适体探针,主要包括一段与氯霉素特异性识别的DNA序列,其3’端标记FAM荧光,且有一小段核酸随机结构。当适体探针单独存在时,被氧化石墨烯(graphene oxide,Go)吸附到... 目的探讨荧光适体探针用于氯霉素快速检测的可行性。方法设计了一种荧光适体探针,主要包括一段与氯霉素特异性识别的DNA序列,其3’端标记FAM荧光,且有一小段核酸随机结构。当适体探针单独存在时,被氧化石墨烯(graphene oxide,Go)吸附到表面,由于能量共振转移作用使得FAM荧光淬灭;当加入靶标时,由于靶标与适配体探针具有高亲和力,配对形成双链复合物,从Go表面脱离,使FAM的荧光信号得到恢复。结果当25 nmol/L荧光标记适配体探针与1.2μL浓度为1 mg·mL-1 Go溶液共同孵育后,超过95%的荧光信号被Go淬灭。当再加入氯霉素溶液经孵育后,荧光信号得到显著恢复。结论该荧光适体探针能被用于氯霉素样品的快速检测,且对其他小分子检测也具有很大的应用潜力。 展开更多

关键词 氯霉素 核酸适体 氧化石墨烯 能量共振转移

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鼠肺炎病毒荧光定量RT-PCR检测方法的建立 被引量：2

12

作者 胡忆文 禹思宇 +1 位作者 谭建锡 唐连飞 《湖南畜牧兽医》 2019年第5期36-39,共4页

根据鼠肺炎病毒NS2基因保守区设计一对特异性引物,建立了一种快速、灵敏、特异的PVM检测方法,并对该方法的特异性、灵敏度和重复性进行了评价。结果显示,标准品浓度在1.0×101~1.0×107 copy/μL之间时,其浓度的对数值与荧光定... 根据鼠肺炎病毒NS2基因保守区设计一对特异性引物,建立了一种快速、灵敏、特异的PVM检测方法,并对该方法的特异性、灵敏度和重复性进行了评价。结果显示,标准品浓度在1.0×101~1.0×107 copy/μL之间时,其浓度的对数值与荧光定量RT-PCR实验中的Ct值之间有良好的线性相关性(相关系数R2=0.9988),且该标准品检出限为1.0×102 copy/μL。该方法对猪繁殖与呼吸综合征病毒、口蹄疫病毒、古典猪瘟病毒、牛病毒性腹泻粘膜病病毒、禽流感病毒均无扩增反应,引物具有良好的特异性。同时,该方法实验间的变异系数为0.51%~1.56%,均小于2%,表明该方法扩增稳定性高、重复性强。结果表明:该研究新建的PVM实时荧光定量RT-PCR检测方法有着特异性好、灵敏度高、重复性强的优点,可用于PVM的监测以及流行病学研究。 展开更多

关键词 小鼠 鼠肺炎病毒 荧光定量RT-PCR

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小鼠诺如病毒数字RT-PCR定量检测方法的建立

13

作者 谭建锡 禹思宇 +2 位作者 胡忆文 周智君 唐连飞 《湖南畜牧兽医》 2020年第3期39-42,共4页

为了建立快速、准确定量检测小鼠诺如病毒(murine norovirus,MNV)的方法,试验针对MNV高度保守区的靶向扩增引物和探针构建MNV的数字RT-PCR定量检测方法,优化其退火温度,并对其敏感性、特异性及临床应用效果进行检测。结果表明:建立的数... 为了建立快速、准确定量检测小鼠诺如病毒(murine norovirus,MNV)的方法,试验针对MNV高度保守区的靶向扩增引物和探针构建MNV的数字RT-PCR定量检测方法,优化其退火温度,并对其敏感性、特异性及临床应用效果进行检测。结果表明:建立的数字RT-PCR方法能对MNV进行定量检测;最佳退火温度为57.5℃;分别对MNV、小鼠肺炎病毒、呼肠孤病毒3型等核酸检测,除MNV外均为阴性;最低可检测到7拷贝/μL;对不同稀释度核酸进行3次重复试验,变异系数均小于7%;对20个小鼠盲肠样本进行MNV检测,结果与荧光RT-PCR结果一致。说明试验建立的数字RT-PCR方法特异性强、灵敏度高、重复性好,可应用于MNV的临床快速定量检测。 展开更多

关键词 小鼠诺如病毒 数字RT-PCR 定量 检测方法 灵敏度 临床应用

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湖南省4株猪繁殖与呼吸综合征病毒全基因组序列测定与分析

14

作者 胡忆文 唐连飞 +1 位作者 谭建锡 禹思宇 《中国动物检疫》 CAS 2020年第2期66-70,共5页

为了解湖南省猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)的遗传变异情况,对湖南省2016-2019年分离的4株PRRSV(Hunan/2016/075、Hunan/2017/085、Hunan/2018/123、Hunan/2019/055)进行全基因组测序,对其ORF5、NSP2基因以及全基因组核苷酸序列进行分... 为了解湖南省猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)的遗传变异情况,对湖南省2016-2019年分离的4株PRRSV(Hunan/2016/075、Hunan/2017/085、Hunan/2018/123、Hunan/2019/055)进行全基因组测序,对其ORF5、NSP2基因以及全基因组核苷酸序列进行分析。结果显示,分离的4株病毒株均为美洲型,全基因组同源性为83.1%~98.7%,其中3株属于高致病型,1株为属于类NADC30型。Hunan/2016/075、Hunan/2017/085毒株全长序列与谱系5中亚系5.1的代表性毒株BJ-4亲缘关系相近,聚为一簇;Hunan/2018/123毒株与谱系8.7中的tjnh1501毒株聚为一簇;Hunan/2019/055毒株独立成一簇,与谱系1亲缘关系相近。本研究掌握了湖南省PRRSV的遗传变异情况,从而为制定有效的防控策略提供了依据。 展开更多

关键词 猪繁殖与呼吸综合征病毒 ORF5基因 NSP2基因 序列分析

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动物产品中腹泻性贝类毒素检测方法研究

15

作者 陈盼 胡忆文 +4 位作者 侯义宏 禹思宇 陆静 谭建锡 唐连飞 《湖南畜牧兽医》 2022年第5期39-41,共3页

为探讨小分子核酸适体快速检测动物产品中腹泻性贝类毒素的可行性,研究基于冈田酸(Okadaic acid,OA)核酸适体,构建了特异性适体辅助识别体系平台。结果显示,当体系中靶标OA被释放后,导致可结合标记酶催化产生不同程度的颜色反应,可以用... 为探讨小分子核酸适体快速检测动物产品中腹泻性贝类毒素的可行性,研究基于冈田酸(Okadaic acid,OA)核酸适体,构建了特异性适体辅助识别体系平台。结果显示,当体系中靶标OA被释放后,导致可结合标记酶催化产生不同程度的颜色反应,可以用肉眼进行初步判断;通过波长扫描显示在450 nm波长呈现最大吸收峰,测定其吸光度值,可反映出溶液中的靶标浓度。该体系平台方法具有操作步骤简便、对检测硬件要求低等优点,可用于基层养殖现场快速初筛检测中的使用。 展开更多

关键词 腹泻性贝类毒素 核酸适体 吸光度

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