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重组BMP7腺病毒的构建及转染骨髓基质干细胞后的表达 被引量:5
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作者 祝联 刘伟 +4 位作者 刘德莉 吴娟娟 王丹茹 崔磊 曹谊林 《中国生物医学工程学报》 CAS CSCD 北大核心 2005年第2期245-253,共9页
根据Clonetech公司的腺病毒载体构建流程 ,原核表达载体pBlue- BMP7经一系列特定的限制性内切酶酶切 ,重组成BMP7的腺病毒载体 ,并转染 2 93细胞进行大量扩增、滴度测定。重组Adeno- BMP7经限制性内切酶PI SceⅠ和Ⅰ CeuⅠ双酶切获得B... 根据Clonetech公司的腺病毒载体构建流程 ,原核表达载体pBlue- BMP7经一系列特定的限制性内切酶酶切 ,重组成BMP7的腺病毒载体 ,并转染 2 93细胞进行大量扩增、滴度测定。重组Adeno- BMP7经限制性内切酶PI SceⅠ和Ⅰ CeuⅠ双酶切获得BMP7基因片段 ,PCR扩增得到特异的扩增片段 ,表明重组的Adeno-BMP7载体构建成功 ,其中携带有目的基因BMP7cDNA片段。Adeno- Lac- Z的体外转染骨髓基质干细胞 (BMSCs) ,染色表明转染率可达90 %以上 ;RT- PCR、免疫组化证明Adeno -BMP7转染BMSCs后BMP7在基因和蛋白水平上均有表达 ;转染Adeno- BMP7后的BMSCs细胞悬液裸鼠肌肉内注射后 ,x光片和组织学观察都表明BMP7转染可明显促进新骨的形成 ,与没转染Adeno -BMP7的BMSCs有显著差异。 展开更多
关键词 重组腺病毒 骨髓基质干细胞 骨形成蛋白7
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骨形成蛋白-7基因逆转录病毒载体的构建及其表达 被引量:3
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作者 祝联 刘伟 +5 位作者 陈兵 刘德莉 刘方军 吴娟娟 陆俊弘 曹谊林 《细胞与分子免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2003年第4期329-331,共3页
目的 :实现骨形成蛋白 7(BMP 7)基因在骨髓基质干细胞中的稳定、长久表达。方法 :构建重组BMP 7逆转录病毒表达载体。通过PT6 7包装细胞克隆 ,嘌呤霉素筛选、扩增 ,获得含BMP 7基因的逆转录病毒液 ,直接感染骨髓基质干细胞 ,用免疫组化... 目的 :实现骨形成蛋白 7(BMP 7)基因在骨髓基质干细胞中的稳定、长久表达。方法 :构建重组BMP 7逆转录病毒表达载体。通过PT6 7包装细胞克隆 ,嘌呤霉素筛选、扩增 ,获得含BMP 7基因的逆转录病毒液 ,直接感染骨髓基质干细胞 ,用免疫组化方法检测BMP 7的表达。结果 :成功地构建了重组BMP 7逆转录病毒表达载体 ,并可在骨髓基质干细胞中表达BMP 7。结论 :重组逆转录病毒表达载体转染的靶细胞可表达BMP 7,为组织工程中骨和软骨种子细胞的研究奠定了基础。 展开更多
关键词 重组逆转录病毒载体 骨形成蛋白—7 组织工程 骨髓基质干细胞
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骨制松质骨螺钉的生物力学性能实验研究 被引量:2
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作者 祝联 崔磊 +2 位作者 曹谊林 洪天禄 王以进 《医用生物力学》 EI CAS CSCD 2001年第2期99-104,共6页
目的:探讨骨制松质骨螺钉的生物力学性能。方法:牙形角 50°螺钉为实验组,牙形角38°螺钉为对照组。分别对骨制松质骨螺钉的抗拔力、抗扭转力、界面应力进行实验研究和摩擦系数、应变能密度因子等进行力学分析。结果:... 目的:探讨骨制松质骨螺钉的生物力学性能。方法:牙形角 50°螺钉为实验组,牙形角38°螺钉为对照组。分别对骨制松质骨螺钉的抗拔力、抗扭转力、界面应力进行实验研究和摩擦系数、应变能密度因子等进行力学分析。结果:研制的方头骨螺钉(牙形角50°)与一字槽骨螺钉(牙形角38°)有显著性差异(P<0.01)。结论:大角度螺纹角抗损伤能力强,方头骨螺钉与周围松质骨组织嵌合紧密,是关节内骨折的有效内固定物。 展开更多
关键词 骨制螺钉 骨移植 螺纹 生物力学 关节骨骨折内固定物
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腹壁下动脉穿支横行下腹部皮瓣游离移植乳房再造 被引量:6
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作者 董佳生 王涛 +3 位作者 张莉 戴传昌 王毅敏 祝联 《上海第二医科大学学报》 CSCD 2004年第8期609-611,620,共4页
目的 对下腹部横行腹直肌(TRAM)肌皮瓣的术式进行改进和完善,从而避免腹部并发症,扩大皮瓣的临床应用范围。方法 TRAM瓣改进为保留腹直肌及其前鞘,分离出腹壁下动脉穿支横行下腹部皮瓣(DIEP),用于21例乳房再造。结果20例双侧腹壁下动脉... 目的 对下腹部横行腹直肌(TRAM)肌皮瓣的术式进行改进和完善,从而避免腹部并发症,扩大皮瓣的临床应用范围。方法 TRAM瓣改进为保留腹直肌及其前鞘,分离出腹壁下动脉穿支横行下腹部皮瓣(DIEP),用于21例乳房再造。结果20例双侧腹壁下动脉的双蒂穿支皮瓣病例全部成活;1例仅保留单侧穿支的皮瓣远端出现缺血现象。随访5月~3年,再造乳房外形满意,未见腹壁薄弱、腹疝等腹部并发症发生。下腹供区疤痕隐蔽,同时也达到了腹壁整形减肥的效果。结论 移植横行下腹部DIEP瓣再造乳房,供区损伤小,组织量充足,血供丰富,是目前最为理想的手术方法。DIEP瓣也能根据需要修复多种软组织缺损,因保留了腹直肌及其前鞘,对供区的创伤最小,对肥胖者还能起到腹壁整形的作用。该皮瓣的应用代表了整形外科的发展方向。 展开更多
关键词 腹壁 动脉穿支 下腹部 皮瓣 游离移植 乳房再造 TRAM
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病毒介导的基因转染在组织工程中的应用
5
作者 刘德莉 刘方军 +5 位作者 吴娟娟 胡晓洁 祝联 刘伟 崔磊 曹谊林 《上海第二医科大学学报》 CSCD 2004年第4期311-314,共4页
目的 构建重组病毒载体,将较多细胞因子通过病毒载体转入种子细胞,提高细胞增殖及分泌基质能力,维持表型,延缓老化。方法 应用基因工程技术,构建缺陷型逆转录病毒重组载体和缺陷性腺病毒重组载体。分别通过PT67包装细胞筛选克隆及293细... 目的 构建重组病毒载体,将较多细胞因子通过病毒载体转入种子细胞,提高细胞增殖及分泌基质能力,维持表型,延缓老化。方法 应用基因工程技术,构建缺陷型逆转录病毒重组载体和缺陷性腺病毒重组载体。分别通过PT67包装细胞筛选克隆及293细胞扩增,获得假病毒上清液,经浓缩纯化后转染靶细胞。结果 成功构建胶质细胞源性神经营养因子(GDNF)、Fas配体(Fas-Ligand)、绿色荧光蛋白(GFP)等逆转录病毒载体以及TGFβ1、人骨形成蛋白因子-7(hBMP7)、端粒酶、Smad3、Smad7等腺病毒载体,其中GFP-逆转录病毒重组载体在软骨细胞表达至2月。结论 通过有效的含目的基因重组载体转染种子细胞,延缓体外培养细胞的老化及促进细胞的增殖与基质分泌,获得组织工程所需要的大量种子细胞,为组织工程构建奠定了基础。 展开更多
关键词 基因转染 逆转录病毒载体 腺病毒载体 组织工程 种子细胞 基因工程技术
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重组hBMP7基因转染成纤维细胞及其表达
6
作者 陈付国 祝联 +10 位作者 刘德莉 魏娴 刘天一 王敏 柴岗 王晓云 周广东 夏万尧 崔磊 刘伟 曹谊林 《上海第二医科大学学报》 CSCD 2004年第4期238-241,共4页
目的 探讨重组骨形态发生蛋白-7腺病毒载体(AdCMV-BMP7)在人真皮成纤维细胞获得稳定表达的可行性。方法重组腺病毒载体AdCMV-BMP7经293细胞包装、扩增后,转染人真皮成纤维细胞。转染48 h后以免疫组织化学、RT-PCR等方法检测hBMP7基因在... 目的 探讨重组骨形态发生蛋白-7腺病毒载体(AdCMV-BMP7)在人真皮成纤维细胞获得稳定表达的可行性。方法重组腺病毒载体AdCMV-BMP7经293细胞包装、扩增后,转染人真皮成纤维细胞。转染48 h后以免疫组织化学、RT-PCR等方法检测hBMP7基因在人真皮成纤维细胞内的表达情况。结果 在合适的滴度下,重组腺病毒载体AdCMV-BMP7对成纤维细胞的增殖能力无明显影响。转染48 h后免疫细胞化学显示已转染AdCMV-BMP7的成纤维细胞内有大量的hBMP7表达,RT-PCR也检测到特异的hBMP7基因片段的表达。结论 重组腺病毒载体AdCMV-BMP7能够被转导入成纤维细胞内,并稳定表达hBMP7。 展开更多
关键词 骨形态发生蛋白-7 腺病毒 转基因技术 成纤维细胞 组织工程 RT-PCR
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