质粒DNA的阴离子交换色谱法纯化及内毒素去除 被引量：11

1

作者 皮文辉 孙从建 +5 位作者 宋志强 马连营 刘淑萍 白丁平 蔡宜东 刘守仁 《色谱》 CAS CSCD 北大核心 2007年第6期809-813,共5页

采用Fractogel(EMD TMAE(M)强阴离子交换介质分离纯化质粒脱氧核糖核酸(DNA),该介质对质粒DNA的动态载样量达0.62mg/mL。用Triton X-114或Triton X-100预先处理质粒DNA的裂解澄清液后,经阴离子交换色谱分离纯化获得的质粒DNA中内毒素含... 采用Fractogel(EMD TMAE(M)强阴离子交换介质分离纯化质粒脱氧核糖核酸(DNA),该介质对质粒DNA的动态载样量达0.62mg/mL。用Triton X-114或Triton X-100预先处理质粒DNA的裂解澄清液后,经阴离子交换色谱分离纯化获得的质粒DNA中内毒素含量分别为6.42EU/mg和9.50EU/mg,显著低于未经Triton处理的裂解澄清液(67.82EU/mg)。该法实现了阴离子交换色谱一步纯化质粒DNA的目的,具有简便、省时、成本低等特点。 展开更多

关键词 阴离子交换色谱 纯化 质粒DNA TRITON X-114 TRITON X-100 内毒素 去除

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TALENs编辑绵羊成纤维细胞FGF 5基因 被引量：3

2

作者 皮文辉 周平 +5 位作者 王立民 唐红 郭延华 张译元 刘守仁 王新华 《畜牧兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2015年第5期704-710,共7页

类转录激活因子效应物(Transcription activator-like effector,TALE)已经成为基因组编辑和基因转录调控的有效工具,在多个物种的基因组中实现特定位点的删除、插入和突变。针对绵羊成纤维细胞生长因子5(Fibroblast growth factor 5,FG... 类转录激活因子效应物(Transcription activator-like effector,TALE)已经成为基因组编辑和基因转录调控的有效工具,在多个物种的基因组中实现特定位点的删除、插入和突变。针对绵羊成纤维细胞生长因子5(Fibroblast growth factor 5,FGF5)基因起始密码子ATG位点,设计构建TALENs(Transcription activator-like effector nucleases,TALENs)。通过比较分析正常培养和基因组编辑处理的绵羊成纤维细胞,电转TALENs组合,Surveyor突变检测,筛选获得1对有效的TALENs。有限稀释细胞传代培养,PCR扩增FGF5基因片段,经PAGE检测筛选发生突变的细胞,测序确认FGF5基因ATG位点产生缺失突变细胞。获得具有编辑活性的TALENs,为该基因的定点编辑奠定基础。Surveyor检测和测序结果表明,在绵羊FGF5基因ATG起始密码子上游104碱基位点,存在1个G/C单核苷酸多态。 展开更多

关键词 类转录激活因子效应物核酸酶 基因组编辑 成纤维细胞生长因子5基因 单核苷酸多态 绵羊

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氟孕酮海绵栓在绵羊生产技术中的应用 被引量：9

3

作者 皮文辉 杨永林 +2 位作者 倪建宏 石国庆 刘守仁 《中国草食动物》 2009年第6期65-66,共2页

关键词 海绵栓 氟孕酮 绵羊 生产技术 同期发情效果 控制装置 应用 释放速率

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发情羊血清、肝素对绵羊卵母细胞体外受精的影响 被引量：3

4

作者 皮文辉 张树山 +3 位作者 倪建宏 杨永林 石国庆 刘守仁 《中国草食动物》 2004年第1期6-8,共3页

绵羊卵母细胞体外成熟后 ,在含 5 %、10 %和 2 0 %发情羊血清的受精液中进行体外受精 ,其分裂率分别是 73 79%、73 2 5 %和 77 61%,显著高于不含发情羊血清的受精液 (0 %,P <0 0 1)。用含 5 %发情羊血清的受精液为基础液 ,添... 绵羊卵母细胞体外成熟后 ,在含 5 %、10 %和 2 0 %发情羊血清的受精液中进行体外受精 ,其分裂率分别是 73 79%、73 2 5 %和 77 61%,显著高于不含发情羊血清的受精液 (0 %,P <0 0 1)。用含 5 %发情羊血清的受精液为基础液 ,添加 5u/ml和 10u/ml的肝素 ,受精后的分裂率分别为 86 63 %和 75 5 3 %,5u/ml肝素组的分裂率与不加肝素组 (86 64 %)差异不显著 ,而 10u/ml高浓度肝素组的分裂率则显著低于其他两组 (P <0 0 1)。 展开更多

关键词 发情羊 血清 肝素 绵羊 卵母细胞 体外受精

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发情羊血清、肝素和BSA对绵羊冷冻-解冻精子体外获能的影响 被引量：1

5

作者 皮文辉 张树山 +3 位作者 白丁平 杨永林 石国庆 刘守仁 《黑龙江动物繁殖》 2004年第3期8-10,共3页

分析了在受精液SOF中添加发情绵羊血清、肝素和牛血清白蛋白(BSA)对绵羊冷冻-解冻精液体外获能和受精的影响。结果表明:(1)使用含发情羊血清浓度为0、5%、10%和20%的受精液,分裂率分别是0、73.79%、73.25%和77.61%。加发情羊血清的3个... 分析了在受精液SOF中添加发情绵羊血清、肝素和牛血清白蛋白(BSA)对绵羊冷冻-解冻精液体外获能和受精的影响。结果表明:(1)使用含发情羊血清浓度为0、5%、10%和20%的受精液,分裂率分别是0、73.79%、73.25%和77.61%。加发情羊血清的3个试验组分裂率差异不显著。而未加血清的试验组分裂率为0,证明发情羊血清促进了绵羊冷冻-解冻精液的体外受精效果。(2)以含5%发情羊血清受精液为基础液,添加0IU/mL、5IU/mL和10IU/mL的肝素,受精后分裂率分别达86.64%、86.63%和75.53%。不加肝素组和5IU/mL肝素组分裂率差异不显著,而10IU/mL高浓度肝素组同其他两组比较,差异极显著(p<0.01)。说明含10IU/mL肝素的受精液,降低了绵羊体外受精后的分裂率。(3)用含5%发情羊血清受精液为基础液,以添加3mg/mLBSA为试验组,不加BSA为对照组,受精后两组分裂率差异不显著。发情绵羊的血清促进绵羊冷冻-解冻精子的体外受精效果。在受精液中添加发情绵羊血清进行绵羊冷冻解冻精子的体外受精,无需添加肝素和BSA。而且添加10IU/ml肝素,降低了受精后的分裂率。建议受精液中添加发情绵羊血清浓度在2%～10%较合适。 展开更多

关键词 发情 血清 肝素 BSA 绵羊 冷冻精液 精子 体外获能

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细毛羊公羔配种试验

6

作者 皮文辉 杨永林 +3 位作者 倪建宏 程彬 王艳玲 汪红英 《新疆农业科学》 CAS CSCD 2001年第z1期65-66,共2页

为缩短细毛羊世代间隔 ,利用 2只 7.5月龄细毛羊公羔进行人工授精试验。结果公羔每次平均射精量为 0 .5 5ml;情期配种母羊分娩率为 41.77% ,较成年公羊低 32 .2 1个百分点 ,配种公羔生长发育与对照组相近。

关键词 细毛羊 公羔 人工授精

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灰色关联分析在细毛羊选种中的运用

7

作者 皮文辉 杨永林 倪建宏 《新疆农业科学》 CAS CSCD 2001年第z1期29-31,共3页

采用细毛羊毛长 (SL)、羊毛纤维细度 (FD)、净毛量 (CFW )、剪毛后体重 (HW )等主要选择性状[2 ,4 ] ,将灰色关联分析法[1,3 ] 应用于优质细毛羊育成种公羊选种 ,以期为细毛羊选种提供一种科学的、准确的方法。

关键词 细毛羊 选种 灰色关联分析

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骨骼肌电穿孔转基因技术研究进展

8

作者 皮文辉 宋志强 +1 位作者 姬勇 刘守仁 《中国畜牧兽医》 CAS 北大核心 2009年第12期187-191,共5页

目前,在大动物模型试验中,骨骼肌电穿孔转基因技术已被广泛用于转染一些功能基因,并能显著提高非病毒载体基因的转染效率。笔者就电穿孔促进基因通过细胞膜的可能机理及影响骨骼肌电穿孔转基因效率的关键因素(如物种、细胞直径、场强、... 目前,在大动物模型试验中,骨骼肌电穿孔转基因技术已被广泛用于转染一些功能基因,并能显著提高非病毒载体基因的转染效率。笔者就电穿孔促进基因通过细胞膜的可能机理及影响骨骼肌电穿孔转基因效率的关键因素(如物种、细胞直径、场强、脉冲参数、电极和电脉冲仪等)进行了综述。 展开更多

关键词 体内电穿孔 骨骼肌 质粒

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细毛羊公羔配种试验

9

作者 皮文辉 杨永林 +3 位作者 倪建宏 程彬 王艳玲 汪红英 《中国养羊》 1998年第3期28-29,共2页

为缩短细毛羊世代间隔，利用２只７５月龄细毛羊公羔进行人工授精试验。结果：公羔每次平均射精量为０５５ｍｌ；情期配种母羊分娩率为４１７７％，较成年公羊低３２２１个百分点；配种公羔生长发育与对照组相近。

关键词 羊 细毛羊 公羔 人工授精 配种

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绵羊腹腔内窥镜子宫角深部冷冻精液输精试验 被引量：6

10

作者 石国庆 曾培坚 +2 位作者 杨永林 倪建宏 皮文辉 《新疆农业科学》 CAS CSCD 2001年第z1期72-73,共2页

采用人用黄体酮 ,PMSG对绵羊进行同期发情处理 ,46只绵羊 48h同期发情率为 95 .6 5 % (4 4/ 46 ) ,用解冻后活力仅 0 .2的冷冻精液 ,借助腹腔内窥镜子宫角深部输精 ,情期受胎率 72 .73% (32 / 44 ) ,与澳大利亚Salamoan教授腹腔内窥镜... 采用人用黄体酮 ,PMSG对绵羊进行同期发情处理 ,46只绵羊 48h同期发情率为 95 .6 5 % (4 4/ 46 ) ,用解冻后活力仅 0 .2的冷冻精液 ,借助腹腔内窥镜子宫角深部输精 ,情期受胎率 72 .73% (32 / 44 ) ,与澳大利亚Salamoan教授腹腔内窥镜子宫角冷冻精液输精情期受胎率 74.0 4% (77/ 10 4)且冻后活力 0 .5 ,仅差 1.31个百分点 ,差异不显著 (P <0 .0 5 ) ,而与常规冷冻精液输精的情期受胎率 5 5 .45 % (178/ 32 1)相比 ,高出 17.78个百分点 ,差异极显著 (P <0 .0 1)。 展开更多

关键词 腹腔内窥镜 冷冻精液输精 受胎率 绵羊

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电转液L对绵羊成纤维细胞电转染条件优化 被引量：4

11

作者 李炜杰 杨娇 +6 位作者 王聪慧 罗健 周平 黄威 姚建龙 何高明 皮文辉 《新疆农业科学》 CAS CSCD 北大核心 2015年第8期1481-1485,共5页

【目的】采用实验室配制的电转液L,优化绵羊成纤维细胞的转染效率。【方法】利用Lonza 4D—Nucleofector设备,针对实验室配制的电转液L,将P max绿色荧光蛋白表达质粒导入绵羊成纤维细胞中,通过流式细胞仪测定和荧光显微镜观测细胞转染... 【目的】采用实验室配制的电转液L,优化绵羊成纤维细胞的转染效率。【方法】利用Lonza 4D—Nucleofector设备,针对实验室配制的电转液L,将P max绿色荧光蛋白表达质粒导入绵羊成纤维细胞中,通过流式细胞仪测定和荧光显微镜观测细胞转染效率。【结果】通过测定细胞转染效率,得到较佳电转方案:L电转液100μL悬浮绵羊成纤维细胞,采用CZ-167电转程序,质粒浓度4 g,2×106个细胞,电击一次,电转后37℃放置10 min可获得理想的转染效率。 展开更多

关键词 绵羊成纤维细胞 细胞转染 转染效率 条件优化

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Romilly Hills肉用细毛羊生长模型 被引量：2

12

作者 刘守仁 王新华 +2 位作者 石国庆 皮文辉 李国庆 《新疆农业科学》 CAS CSCD 2001年第z1期48-50,共3页

用非线性回归曲线估计 (CurveEstimation)中 11种模型分别拟合RomillyHills肉用细毛羊的生长规律。其中以Cubic模型的拟合度最大。由Cubic模型参数进一步估算出公羊和母羊生长的拐点体重分别为43.498kg和 40 .88kg ,拐点日龄分别为 176 ... 用非线性回归曲线估计 (CurveEstimation)中 11种模型分别拟合RomillyHills肉用细毛羊的生长规律。其中以Cubic模型的拟合度最大。由Cubic模型参数进一步估算出公羊和母羊生长的拐点体重分别为43.498kg和 40 .88kg ,拐点日龄分别为 176 .5 6d和 183.86d ;平均日增重为 2 2 2 .6± 5 0 .72g/d和 188.3± 6 9.2 3g/d。平均瞬时相对生长率分别为 0 .34 779和 0 .34 34 2。 展开更多

关键词 Romilly Hills 绵羊 生长模型

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用聚乙烯吡咯烷酮加FSH给母羊一次注射超排效果试验 被引量：2

13

作者 曾培坚 石国庆 +2 位作者 皮文辉 杨永林 仉健宏 《新疆农业科学》 CAS CSCD 2001年第z1期67-68,共2页

关键词 母羊 超排效果 FSH 聚乙烯吡咯烷酮

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B超仪与腹腔内窥镜在绵羊早期妊娠诊断中的应用 被引量：14

14

作者 万鹏程 杨永林 +3 位作者 石国庆 倪建宏 皮文辉 周平 《草食家畜》 2003年第1期31-32,共2页

为了确定经胚胎移植的母羊受胎情况 ,利用B超仪与腹腔内窥镜对母羊群进行早期妊娠诊断 ,对检出未孕的母羊及时进行相应处理。结果表明B超仪与腹腔内窥镜诊断母羊妊娠诊断准确率分别可达到 92 .6 % (6 3/6 8)和 94 .4 % (33/ 35 ) ,差异... 为了确定经胚胎移植的母羊受胎情况 ,利用B超仪与腹腔内窥镜对母羊群进行早期妊娠诊断 ,对检出未孕的母羊及时进行相应处理。结果表明B超仪与腹腔内窥镜诊断母羊妊娠诊断准确率分别可达到 92 .6 % (6 3/6 8)和 94 .4 % (33/ 35 ) ,差异不显著 (P >0 .0 1)。 展开更多

关键词 B超仪 腹腔内窥镜 妊娠 诊断准确率

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中国美利奴羊非繁殖季节同期发情冻胚移植试验 被引量：8

15

作者 杨永林 倪建宏 +1 位作者 皮文辉 石国庆 《中国草食动物》 2001年第2期27-28,共2页

利用相同来源相同质量的冷冻胚胎 ,对中国美利奴羊进行了春季非繁殖季节和秋季繁殖季节的同期发情和胚胎移植的对比试验。其中非繁殖季节 2～ 3月份 ,同期处理受体母羊 189只 ,发情 10 1只 ,同期率 53 4 % ,移植受体 85只 ,受胎 17只 ,... 利用相同来源相同质量的冷冻胚胎 ,对中国美利奴羊进行了春季非繁殖季节和秋季繁殖季节的同期发情和胚胎移植的对比试验。其中非繁殖季节 2～ 3月份 ,同期处理受体母羊 189只 ,发情 10 1只 ,同期率 53 4 % ,移植受体 85只 ,受胎 17只 ,受胎率 2 0 %。繁殖季节 9～ 10月份 ,同期处理受体羊 2 0 5只 ,发情 137只 ,同期率 6 6 82 %。移植 12 1只 ,受胎 6 7只 ,受胎率 55 37%。由试验结果看出 ,中国美利奴母羊在繁殖季节的同期率和胚胎移植的受胎率明显高于非繁殖季节 (P <0 0 1) 展开更多

关键词 中国美利奴羊 繁殖季节 非繁殖季节 胚胎移植 同情发情 冷冻胚胎

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应用Gibson Assembly方法构建狂犬病病毒SRV9株重组感染性cDNA克隆 被引量：1

16

作者 王伟 魏玉圆 +3 位作者 翟少华 毛丽萍 皮文辉 简子健 《动物医学进展》 北大核心 2017年第11期11-17,共7页

应用Gibson Assembly连接法精确快速构建狂犬病病毒SRV9株重组感染性cDNA克隆,为狂犬病病毒感染性cDNA克隆的构建提供新的方法。应用Gibson Assembly连接法在同一反应体系内,将多个片段和经限制性内切酶线性化的载体,按设计的顺序进行连... 应用Gibson Assembly连接法精确快速构建狂犬病病毒SRV9株重组感染性cDNA克隆,为狂犬病病毒感染性cDNA克隆的构建提供新的方法。应用Gibson Assembly连接法在同一反应体系内,将多个片段和经限制性内切酶线性化的载体,按设计的顺序进行连接,实现多个片段的一步组装。设计带有20bp^30bp重叠序列的PCR引物,扩增得到带有重叠序列的狂犬病病毒5个结构蛋白基因和增强型荧光蛋白基因。扩增的片段和线性化的载体经胶回收纯化后,与Gibson连接液混合后,50℃反应60min,连接产物转化Stbl3感受态细胞,提取重组质粒,经PCR、酶切和测序鉴定,缺失了病毒伪基因Ψ区和糖蛋白基因的跨膜区并且将增强型荧光蛋白基因插入糖蛋白基因终止密码子前,构建了全长17 600bp的重组质粒,完成了重组全长感染性cDNA克隆的构建。 展开更多

关键词 狂犬病病毒 GIBSON Assembly连接法 构建 感染性cDNA克隆

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不同超排方法对中国美利奴羊超排效果试验 被引量：14

17

作者 杨永林 倪建宏 +2 位作者 皮文辉 石国庆 曾培坚 《中国养羊》 1997年第4期25-26,共2页

用３２只中国美利奴成年母羊（５～６岁）分５组进行不同超排药物的超排试验，凭借腹腔内窥镜观察卵巢的反应，并借助其进行手术取卵。经观察：ＦＳＨ各组超排效果好于ＰＭＳＧ组，超排有效率也高于ＰＭＳＧ组（Ｐ＜０．０１）；使用Ｆ... 用３２只中国美利奴成年母羊（５～６岁）分５组进行不同超排药物的超排试验，凭借腹腔内窥镜观察卵巢的反应，并借助其进行手术取卵。经观察：ＦＳＨ各组超排效果好于ＰＭＳＧ组，超排有效率也高于ＰＭＳＧ组（Ｐ＜０．０１）；使用ＦＳＨ各组的超排效果不尽相同，其中Ｃ组ＦＳＨ（７．５ｍｇ）＋ＬＨ，Ｄ组ＦＳＨ（１１．５ｍｇ）＋ＬＨ和Ａ组ＦＳＨ（７．５ｍｇ）＋ＬＲＨ－Ａ３组的可用胚比单用ＦＳＨ的Ｂ组高，未排卵泡数则显著低于Ｂ组（Ｐ＜０．０１）；在Ａ、Ｃ、Ｄ三个处理组中，Ｃ、Ｄ两组的可用胚数高于Ａ组（Ｐ＜０．０１）。试验结果表明，用ＦＳＨ＋ＬＨ处理的Ｃ、Ｄ两组超排效果较好，且组间无明显差异（Ｐ＞０．０５）。 展开更多

关键词 羊 中国美利奴羊 超排效果 可用胚 胚胎移植

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绵羊腹腔内窥镜子宫角深部冷冻精液输精试验 被引量：6

18

作者 石国庆 曾培坚 +2 位作者 杨永林 倪建宏 皮文辉 《中国养羊》 1997年第3期18-19,共2页

采用人用黄体酮，ＰＭＳＧ对绵羊进行同期发情处理，４６只绵羊４８ｈ同期发情率为９５．６５％，用冷冻精液经解冻后，活力仅０．２，借助腹腔内窥镜子宫角深部输精，情期受胎率达到７２．７３％，与澳大利亚Ｓａｌａｍａｎ教授腹腔内... 采用人用黄体酮，ＰＭＳＧ对绵羊进行同期发情处理，４６只绵羊４８ｈ同期发情率为９５．６５％，用冷冻精液经解冻后，活力仅０．２，借助腹腔内窥镜子宫角深部输精，情期受胎率达到７２．７３％，与澳大利亚Ｓａｌａｍａｎ教授腹腔内窥镜子宫角冷冻精液输精情期受胎率７４．０４％，仅差１．３１个百分点（Ｐ＞０．０５），且其解冻后活力为０．５；与常规冷冻精液输精的情期受胎率５５．４５％相比高出１７．２８个百分点（Ｐ＜０．０１）。 展开更多

关键词 腹腔内窥镜 冷冻精液 输精 受胎率 绵羊

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乙醇对绵羊卵母细胞孤雌激活的研究 被引量：1

19

作者 张云生 张永胜 +4 位作者 皮文辉 万鹏程 石国庆 杨永林 刘守仁 《草食家畜》 2005年第1期36-39,共4页

试验采用乙醇法孤雌激活绵羊体外成熟卵母细胞,研究了卵母细胞体外成熟时间、6-DMAP处理时间、乙醇浓度以及激活时间,对绵羊卵母细胞孤雌激活效果的影响。结果表明:(1)卵母细胞成熟22h、24h和26h卵裂率分别为60.7%、75.2%和74.5%,卵母... 试验采用乙醇法孤雌激活绵羊体外成熟卵母细胞,研究了卵母细胞体外成熟时间、6-DMAP处理时间、乙醇浓度以及激活时间,对绵羊卵母细胞孤雌激活效果的影响。结果表明:(1)卵母细胞成熟22h、24h和26h卵裂率分别为60.7%、75.2%和74.5%,卵母细胞成熟24h的卵裂率较22h卵裂率,具有明显差异(P<0.05),与26h卵裂率差异不显著(P>0.05);其桑椹胚率38.6%,明显高于26h的桑椹胚率27.3%(P<0.05)。(2)6-DMAP6h的处理组,卵裂率83.4%,较2h卵裂率70.3%,有明显差异(P<0.05),也高于4h卵裂率79.4%,但差异不显著(P>0.05)。(3)乙醇浓度7%,激活3min、5min、7min卵裂率分别为76.7%、81.4%和70.4%,差异均不显著(P>0.05);激活3min囊胚率13.3%,显著高于激活7min囊胚率9.3%(P<0.05)。(4)乙醇浓度7%,激活绵羊卵母细胞5min,卵裂率85.5%,与乙醇浓度为5%的卵裂率72.2%,有显著差异(P<0.05),桑椹胚率和囊胚率,差异分别不显著(P>0.05)。 展开更多

关键词 卵裂率 绵羊 囊胚率 桑椹胚 孤雌激活 卵母细胞体外成熟 6-DMAP 乙醇浓度 处理 效果

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中国美利奴“U”品系羊重复超排效果试验 被引量：7

20

作者 倪建宏 杨永林 +1 位作者 皮文辉 石国庆 《黑龙江动物繁殖》 2000年第3期3-4,共2页

在一个发情季节里对15只中国美利奴“U”品系母羊实施2次重复超排试验。结果表明，第1次处理15只羊有13只发情配种，超排有效率86.7%，黄体总数128枚，平均9.84枚/只，回收卵97枚，可用胚数63枚，平均4.85%枚/只。第2次处理有3只羊未发... 在一个发情季节里对15只中国美利奴“U”品系母羊实施2次重复超排试验。结果表明，第1次处理15只羊有13只发情配种，超排有效率86.7%，黄体总数128枚，平均9.84枚/只，回收卵97枚，可用胚数63枚，平均4.85%枚/只。第2次处理有3只羊未发情，其中有1只羊为上次处理后未发情羊，超排有效率为80%，12只供体羊共有黄体113枚，平均9.42枚/只，回收卵86枚，可用胚57枚，平均4.75枚/只，其中有1只羊发生子宫粘连。2次超排所获头均黄体数和可用胚数差异不显著（P＞0.05），说明在一个发情季节里对母羊实施重复超排可以获得比较好的效果。 展开更多

关键词 中国美利奴 “U”品系羊 重复超排 黄体 可用胚

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